重庆市荣昌区猪瘟病毒的分子生物学检测

蒋梦娜 ，曹礼静 ，李 超 ，范才良 ，蒋 庆 *

（1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460；2.重庆市荣昌区职教中心，重庆 荣昌 402460；3.西南大学荣昌校区水产系，重庆 荣昌 402460；4.重庆市荣昌区畜牧兽医局，重庆 荣昌 402460）

1 材料

1.1 仪器 0.1～2.5、10～100、100～1 000 μL 微量加样器，TGL20M高速冷冻离心机，96空梯度PCR（德国），WD800D微波炉，DYY-6B稳压稳流电泳仪，ChampGel60001全自动凝胶成像系统，FA2104S电子天平。

1.2 试剂盒 猪瘟病毒通用型RT-PCR检测试剂盒（北京世纪元亨动物防疫技术有限公司生产），批号：CSF20150214P，生产日期：20150214。

2 方法

2.1 样品采集 2015年2月26日、3月5日、3月12日、3月19日、3月26日、4月2日于荣昌区某屠宰场进行6次采样，每次随机采取5份猪淋巴结，共计30份，用灭菌自封袋统一编号置－20℃冰箱保存待检。

2.2 试验操作 直接用RT-PCR方法检测，具体操作根据试剂盒说明书进行。

3 结果

本次试验共检测30份猪淋巴结，检测得出猪瘟病毒阳性0份，阳性率为0%，图1、图2、图3分别为RT-PCR对30份淋巴结的检测结果。

图1 RT-PCR检测结果

图2 RT-PCR检测结果

图3 RT-PCR检测结果

4 结论与分析

4.1 结论 本次试验共检测了30份猪淋巴结样本，结果猪瘟阳性率为0%。表明荣昌区2015年春季不存在猪瘟感染。

4.2 分析 本次检测HCV阳性率为零的原因，笔者认为有以下几点：首先荣昌地区连续3年使用了政府采购的合格的猪瘟疫苗；二是荣昌区普遍在30～35日龄阉割仔猪时进行猪瘟首免，散养户在春秋季进行集中免疫，同时给空怀母猪也要进行免疫，规模养殖场在70～80日龄会自主进行二次免疫；三是荣昌人有良好的养猪习惯和上千年的养猪经验，懂得尽快让仔猪吃上初乳来获得母源抗体，使得初生仔猪具有较强的免疫力。

4.3 猪瘟诊断方法的选择 传统的猪瘟诊断方法主要包括兔体交叉免疫诊断、免疫酶染色试验、病毒分离与增毒试验、免疫荧光试验、猪瘟间接血凝试验等等，新发展的检测方法有：ELISA试验、RT-PCR检测试验、DNA探针、胶体金试纸检测、血清中和试验等。常用的诊断如兔体交叉试验，灵敏度高，但耗时长且需要活体无抗兔；RT-PCR具有特异性强、快速和可靠性高的优点。对猪瘟进行诊断或流行病学调查时，应用RT-PCR检测是较理想的选择[1-3]。

4.4 猪瘟疫苗品种的选择 如亚单位疫苗、重组疫苗、DNA疫苗、标记疫苗，目前各个养殖场普遍使用猪瘟兔化弱毒疫苗[4]。虽然HCV存在不同的基因群，但并未发现不同的血清型，说明血清学上的差异并不明显。我国虽然存在多基因型的毒株，但是HCV已经发生的基因变异尚未对目前的猪瘟免疫构成威胁，猪瘟兔化弱毒苗对不同基因型毒株仍可产生交叉保护力[5]。

4.5 导致猪瘟免疫失败的可能原因 主要受疫苗质量、免疫操作、免疫程序、持续感染、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）干扰、免疫抑制病干扰的影响；另外，饲养管理不当、猪的营养状况和人为因素等也会影响免疫成败。

[1] 胡晓苗，张丹俊，汪丽，等.猪瘟病毒实验室诊断研究进展[J].畜禽业，2007（3）：21-23.

[2] 曲春玲.猪瘟诊断技术的比较[J].中国动物保健，2014，16（6）：55-56.

[3] 杭丽，皇甫抗栋，沈玉磊.猪瘟诊断技术的研究进展[J].中国畜禽种业，2013（1）：46-48.

[4] 罗廷荣，莫扬，吴文德，等.RT-PCR技术检测猪瘟病毒的应用研究[J].中国预防兽医学报，2004，26（4）：307-312.

[5] 涂长春，万遂如.我国猪瘟的流行现状、原因与防制对策[A].猪的重要传染病防治研究新成果——中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第五届理事会第二次全体会议暨防检疫专业委员会第7次学术交流会论文集[C].2002：5-8.