转筋草生药学研究

转筋草生药学研究

张琳,程虎印,王继涛,张妮,张岗*

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

摘要：目的对转筋草进行性状、显微及理化鉴别。方法采用组织学、形态学鉴别方法，研究原植物形态、生药特征、各部分组织及粉末显微特征，并且进行粉末的生物碱化学鉴别。结果转筋草根茎、茎及叶的薄壁细胞均含草酸钙方晶；粉末中可见不定式气孔及非腺毛。粉末与3种生物碱沉淀试剂分别生成沉淀。结论以上性状特征、显微特征及理化结果可以作为转筋草生药鉴别的依据。

关键词：转筋草；显微结构；生药学

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.030

中图分类号：R282.5文献标志码： A

文章编号：1003-5699(2015)10-1071-03

基金项目:陕西省教育厅专项科研计划项目(2013JK0829)。

作者简介:张琳,女,硕士,高级实验师,主要从事中药资源学研究。

收稿日期:(责任编辑：赵玉芝2015-04-14)

*通信作者:张岗,电话-18709108808,电子信箱-25784319@qq.com

Pharmacognosical studies onPachysandraterminalisSieb.et Zucc.

ZHANG Lin,CHENG Huyin,WANG Jitao,ZHANG Ni,ZHANG Gang*

(Shaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang 712046,Shaanxi Province,China)

Abstract:ObjectiveTo perform the trait identification,microscopy authentication and physiochemical determination.MethodsUsing histological and morphological methods,systemically studied traits of the original plant morphology,pharmacognosy,various tissues and microscopic characters of powder from Pachysandra terminalis.And alkaloids were physiochemically determined in powder.ResultsThere were cubic crystal of calcium oxalate in rhizome,stems,and leaves of Pachysandra terminalis Sieb et Zucc;Anomocytic type stomas and non-glandular hair were visible in powder.The herbal powder could produce precipitation with three types of alkaloids.ConclusionAbove traits,microscopic characteristics and physicochemical results can be used as the basis for Pachysandra terminalis Sieb.et Zucc.identification.

Keywords:Pachysandra terminalis Sieb.et Zucc.;microscopic structure;pharmacognosy

转筋草，又名雪山林、顶蕊三角咪、粉蕊黄杨、顶蕊板凳果、捆仙绳等，为黄杨科(Buxaceae)板凳果属(Pachysandra)植物顶花板凳果PachysandraterminalisSieb etZucc的带根全草，常绿亚灌木，主要分布于陕西、湖北、甘肃、四川、贵州等地[1]。其味苦微辛，性凉；具有除风湿、清热解毒、调经活血、止带舒筋活络的功效；主要治疗风湿性关节炎、慢性气管炎、小腿转筋、白带、月经过多、烦躁不安等病症。中药化学和现代药理学研究表明，转筋草包含生物碱、酚类、三萜类、木质素等多种活性成分[2-13]，具有抗肿瘤、抗氧化、抗癌等多重药理活性[7-16]。因此，转筋草在临床中应用广泛。本研究对转筋草根茎、茎、叶及粉末性状和显微进行了系统性生药学研究。

1材料

ZEISS 显微镜(德国蔡司，型号 ImagerA1)，粉碎机，恒温箱(上海一恒)，LY-WN-HPCD型万能视频成像装置(成都励扬)；202-1型手摇式切片机。转筋草原植物材料于2014年6月采自太白皂角湾、林场、塘口三地，分别编号标记，并经王继涛高级实验师鉴定为黄杨科板凳果属植物顶花板凳果P.terminalis。所用化学试剂均为国产分析纯,包括二甲苯、乙醇、FAA固定液、石蜡、蒸馏水、中性树胶、番红、固绿、水合氯醛、稀甘油等。

2方法

2.1石蜡切片法[17]制片选取直径约为2～5 mm的药材根茎、茎、叶(通过主脉)切成0.5 cm的小段；分别固定于FAA溶液中，用系列乙醇脱水，二甲苯透明，40 ℃恒温箱过夜浸蜡后石蜡包埋；修块后在202-1型手摇式切片机上切片，切片厚度为10 μm，待干燥后用二甲苯脱蜡，系列乙醇复水后用番红-固绿染色，系列乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封藏，用LY-WN-HPCD型万能视频成像装置照相。

2.2药材粉末制片药材粉碎后过4号筛,分别用蒸馏水与水合氯醛透化装片进行显微观察、照相。

2.3叶表面制片分别撕取叶上表皮和叶下表皮水合氯醛透化装片，进行显微观察并照相。

2.4理化实验取本品粉末0.4 g，加0.1 mol/L盐酸溶液20 mL，超声30 min，滤过,滤液分为3份，置于3支试管中，分别加入碘化铋钾、碘化钾碘、碘化汞钾试液，根据颜色反应进行生物碱沉淀的鉴别实验。

3结果

3.1植物的性状特征常绿亚灌术，茎直立，高约30 cm，绿色，根茎横卧或匍匐向上,黄白色，有纤细须根；叶薄革质，互生或簇生于枝顶，叶片菱状倒卵形，长2.5～5(～9)cm，宽1.5～3(～6)cm，先端尖，上部边缘有粗齿，下部全缘，上面深绿色，有光泽，下面浅绿色，基部楔形，渐狭成长1～1.5 cm的叶柄；穗状花序顶生，长1～3.5 cm,花单性同株,白色，雄花数超过15，几占花序轴的全部，无花梗，苞片及萼片均阔卵形，雄蕊4枚，雌花1～2，生花序轴基部，苞片及萼片均卵形，覆瓦状排列，子房3室，每室有胚珠2枚，花柱2；果实浆果状核果，卵状球形(图1)。

3.2生药的性状特征皱缩，根茎黄色，有纤细须根；叶薄革质，易碎，互生或簇生于枝顶，叶片菱状倒卵形，长2.5～5(～9) cm，宽1.5～3(～6) cm，先端尖，上部边缘有粗齿，下部全缘，上面深绿色，下面浅绿色，基部楔形，叶柄长1～1.5 cm。气辛，略呛鼻，味淡。

3.3显微结构

3.3.1根茎横切面显微特征图2结果表明，根茎木栓层细胞4～6列，含草酸钙方晶；皮层较宽，内皮层明显，1列，细胞排列整齐紧密，径向壁凯氏带明显,皮层中部散布单个木质化的厚壁细胞(经间苯三酚浓盐酸染成红色，苏丹Ⅲ不显色)，中柱鞘纤维可见；韧皮部稍窄，韧皮射线1～2列，无韧皮纤维；形成层明显，3～4列细胞；木质部较宽，导管多角形，多单个或2～3个相聚，成放射状排列，木纤维多数，木射线多单列；髓明显。

图1　转筋草原植物

注：1草酸钙方晶　2木栓层　3皮层　4木质化厚壁细胞　5内皮层　6中柱鞘纤维　7韧皮部　8形成层　9木质部　10髓 图2　转筋草根茎横切面显微特征

3.3.2茎横切面显微特征由图3可以看出，茎木栓层细胞4～6列，含草酸钙方晶；皮层宽广；韧皮部较窄，射线多单列；形成层明显，3～4列；木质部导管呈放射状排列，纤维多数，射线单列，髓明显，大。

3.3.3叶主脉横切面显微特征叶上下表皮均1列细胞，外被较厚的角质层，部分表皮细胞含草酸钙方晶；叶肉组织为异(两)面型，上表皮下有栅栏组织1～2列，偶3列,但不通过主脉，细胞垂直壁较平直；海绵组织细胞间隙明显，大小不一；主脉维管束外韧型，半圆状，木质部导管2～6个径向排列成行，韧皮部细胞多角形(图4)。

3.3.4叶表面观显微特征图5示叶表面观，上表皮细胞类圆形，有细胞间隙，无气孔；下表皮细胞径向壁波状弯曲，气孔多数。

注：1上表皮　2栅栏组织　3草酸钙方晶　4海绵组织　5木质部　6韧皮部　7下表皮　8气孔 图4　转筋草叶主脉横切面显微特征

注：1上表皮　2下表皮 图5　转筋草叶表面观显微特征

3.3.5粉末显微特征如图6所示，薄壁细胞类圆形，有间隙；导管多环纹、螺纹或梯纹，直径10～40 μm；叶下表皮细胞多角形，排列紧密；纤维多成束，两端平截；方晶多见；非腺毛单细胞；木栓细胞长方形，壁稍厚，排列紧密；气孔不定式，副卫细胞4～7个，以5～6个居多。此外还含有淀粉粒，多单粒，类圆形，复粒2～6分粒组成。

注：1薄壁细胞　2导管　3叶下表皮细胞　4纤维　5草酸钙方晶　6非腺毛　7木栓细胞　8气孔 图6　转筋草粉末显微特征

3.4理化鉴别用3种生物碱沉淀试剂进行理化鉴别,分别产生有色沉淀。加碘化铋钾试液的试管，生成橙黄色沉淀；加碘化钾碘试液，生成褐色沉淀；加碘化汞钾试液，生成白色沉淀；说明了生物碱成分的存在。

4讨论

肿瘤、癌症、风湿类疾病是危害人类身体健康的世界性重大医学疑难疾病。秦岭特色资源转筋草在临床应用中广泛用于这些疾病的治疗[1]，尤其在陕西省太白县、眉县、周至县、汉中等地，民间用于风湿类疾病的治疗效果显著。国内外学者就其中药化学和药理学研究[4-16]说明转筋草资源有广阔的开发和利用前景。本文首次开展了转筋草生药学基础研究。通过形态学和组织学系统性比较分析，揭示药材不同器官、组织和粉末的导管、纤维、方晶、气孔(轴式)等特征，且进行生物碱沉淀理化反应，这些可作为生药鉴别的重要依据。

参考文献：

[1]中国科学院西北植物研究所.秦岭植物志[M].北京:科学出版社,1985:2086.

[2]KIKUCHI T,NAKANISHI T,INAGAKI M,et al.Pachysandra alkaloids XIII,structure and stereochemistry of spiropachysine,a novel spirolactam alkaloid[J].Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1975,23(2):416-417.

[3]肖会君,李晨阳,唐生安,等.转筋草中化学成分研究[J].中国中药杂志,2013,38(3):350-353.

[4]FUNAYAMA S,NOSHITA T,SHINODA K,et al.Cytotoxic alkaloids of Pachysandra terminalis[J].Biological & Pharmaceutical Bulletin,2000,23(2):262-264.

[5]邱明华,聂瑞麟,李忠荣.Pachysandra型生物碱的化学结构及活性筛选[J].云南植物研究,1994,6(3):296-300.

[6]李晨阳,翟慧媛,唐生安,等.转筋草化学成分及其活性研究[J].中药材,2010,33(5):729-732.

[7]翟慧媛,李晨阳,唐生安,等.转筋草中的酚类成分及其抗氧化活性[J].中国中药杂志,2010,35(14):1820-1823.

[8]ZHAI Huiyuan,ZHAO Chuan,ZHANG Ning,et al.Alkaloids from Pachysandra terminalis Inhibit Breast Cancer Invasion and Have Potential for Development As Antimetastasis Therapeutic Agen-ts[J].Journal of Natural Products,2012,75(7):1305-1311.

[9]翟慧媛.转筋草的脂溶性成分及其生物活性研究[D].天津:天津医科大学,2010.

[10]李晨阳.转筋草中极性化学成分及生物活性研究[D].天津:天津医科大学,2010.

[11]马胜男.转筋草紫罗兰酮型生物碱的抗肿瘤转移活性及作用机制[D].天津:天津医科大学,2013.

[12]赵川.转筋草生物碱成分及抗肿瘤转移活性研究[D].天津:天津医科大学,2013.

[13]翟慧媛,李晨阳,靳美娜,等.转筋草的抗肿瘤迁移化学成分研究[J].中南药学,2014,12(11):1080-1083.

[14]JACQUES,ISABELLE S,RAJESH D,et al.Cancer incidence and mortality worldwide:sources,methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].International Journal of Cancer,2015,136(5):359-386.

[15]CATHARINA H,AMY-JO C,WERB Z.Balancing the innate immune system in tumor development[J].Trends in Cell Biology,2015,25(4):214-220.

[16]BAL A,ATAMAN S.PMS1 characteristics of patients with rheumatoid arthritis in Turkey:results from the Turkish league against rheumatism RA registry[J].Value in Health,2012,15(7):A439.

[17]张琳,张毅达.秦岭玄参的生药学研究[J].陕西中医学院学报,2013,36(4):118-119,130.