香菇多糖抗菌抗病毒普适性研究

香菇多糖抗菌抗病毒普适性研究

侯爱萍，张树梅

(济钢集团有限公司总医院药剂科，山东 济南 250101)

摘要：目的探讨香菇多糖对细菌、真菌和病毒的抑制作用。方法细菌(溶血性链球菌、金黄色葡糖球菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、痢疾志贺氏菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌)和真菌(白色念珠菌、啤酒酵母、红色毛癣菌、青霉、绿色木霉、黑根霉、烟曲霉)做成含菌平板，放置含有一定浓度香菇多糖的滤纸片，培养后通过测量抑菌圈计算最低抑菌浓度。对病毒(流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒A、单纯疱疹病毒1型、轮状病毒、埃可病毒2型)的抑制作用通过多糖先和细胞作用及先和病毒作用两种方式。结果香菇多糖对9种供试细菌和7种病毒都有抑制作用，只对7种供试真菌中的3种有微弱抑制作用。结论香菇多糖对细菌和病毒具有普遍抑制作用，而对真菌无普遍抑制作用。

关键词：香菇多糖；细菌；真菌；病毒；抑菌

作者简介：侯爱萍，女，主管药师，研究方向：医院药学，E-mail：shumeizhang888@163.com

中图分类号：R285.5文献标识码：A

Investigation on the universality of antibiotic property of polysaccharide in lentinan

HOUAi-ping,ZHANGShu-mei

(DepartmentofPharmacy,JinanIronandSteelLimitedCompanyHospital,Jinan250101,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the general inhibitive effect of lentinan on bacteria,fungi and viruses.MethodsDouble layer agar plates were cultured with the following bacterias:Hemolytic streptococcus,Staphylococcus aureus glucose,Salmonella typhimurium,Bacillus subtilis,E.Coli,Pasteurella multocida,Shigella dysentery,Salmonella typhi,Paratyphoid bacilli and following fungi:Candida albicans,Brewer′s yeast,Trichophyton rubrum,Penicillium,Viride,Rhizopus nigricans,Aspergillus fumigates.Filter paper with known concentration lentinan was put on top of the agar plates.After culture for 24 hours the minimal concentration of polysaccharide which inhibits bacterial/fungal growth was calculated by measurement of the size of inhibitive ring.The inhibition on viruses (influenza virus,respiratory syncytial virus,adenovirus,coxsackie virus A,herpes simplex virus-1,rotavirus,ECHO virus-2) was investigated by binding of lentinan to either the host cells or directly to viruses.ResultsLentinan showed inhibitive effect on all nine bacteria and seven viruses tested,but only slightly inhibited three out of seven fungi tested.ConclusionLentinan had general inhibitive effect on bacteria and viruses but not on fungi.

Key words:Lentinan;Bacteria;Fungi;Virus;Bacteriostat

香菇为担子菌伞形科真菌，是我国著名的食药用菌，它因含有多种有效药用组分，如香菇多糖(Lentinan,LNT)、木质素等，而引起人们广泛地重视[1]。近年来的研究发现，香菇多糖具有多种生物活性，在生物体内起着重要作用，具有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等功效[2～5]。香菇多糖有很好的抗菌消炎作用，可作为天然抗菌药物应用于临床。为了明确香菇多糖的应用范围，本文对其抗菌谱进行了检测。

1材料与方法

1.1供试菌和培养基进行普适性研究的细菌为溶血性链球菌、金黄色葡糖球菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、痢疾志贺氏菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌，真菌为白色念珠菌、啤酒酵母、红色毛癣菌、青霉、绿色木霉、黑根霉、烟曲霉，病毒为流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒A、单纯疱疹病毒1型、轮状病毒、埃可病毒2型。

各菌株的培养基为：细菌用LB培养基培养，真菌用PDA培养基培养，病毒和相应寄主共培养。

1.2香菇多糖香菇多糖(南京康海药业有限公司)用蒸馏水溶解，配制成1 000 mg·L-1的母液，无菌过滤器过滤除菌后4 ℃冰箱保存备用。用2倍稀释法将香菇多糖母液稀释成浓度为160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625 mg·mL-1的应用液。用直径9 mm的圆形无菌滤纸片蘸取10 μL多糖应用液，制成含药纸片。

1.3香菇多糖对细菌的抑制作用细菌在LB液体培养基中震荡培养24 h，然后用生理盐水配成106·mL-1的菌悬液。0.1 mL菌悬液和融化并冷却到40 ℃的0.5%琼脂混匀，倾倒于LB固体平板上，制成含菌双层平板。

在双层平板上均匀放置4片同浓度的含药纸片，每个浓度重复3个培养皿，37 ℃培养24 h后，测量抑菌圈直径，计算平均值，以有抑菌圈的最低浓度为最小抑制浓度。以生理盐水为阴性对照。

1.4香菇多糖对真菌的抑制作用各真菌在PD液体培养基振荡培养3 d，用无菌组织捣碎机将菌丝高速捣碎至菌液状态。按照“1.3”方法制成含菌双层平板并进行抑菌实验。

1.5香菇多糖对病毒的抑制作用

1.5.1香菇多糖对细胞的保护作用各病毒在寄主细胞上传代，调整病毒滴度为100 TCID50/0.1 mL。传代细胞于96孔培养板，长成单层后接种病毒，37 ℃吸附2 h，弃去病毒液，PBS洗1次，加入含2.5 mg·mL-1香菇多糖的细胞维持液，置37 ℃温箱培养。48 h后，用MTT法检测细胞增殖率，计算香菇多糖对病毒感染细胞的保护率。

1.5.2香菇多糖对病毒的直接灭活作用对流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行直接抑制实验。先将病毒和多糖作用2 h后再吸附细胞，然后按上述方法实验及检测。

2结果与分析

2.1香菇多糖对细菌的抑制作用香菇多糖对各供试细菌都有一定抑制作用。对大肠杆菌抑制作用最强，在0.625 mg·mL-1时既能出现抑菌圈。对枯草芽孢杆菌抑制效果最差，40 mg·mL-1时才出现抑菌圈。整体效果显示对革兰阴性菌的抑制作用要大于对革兰氏阳性菌的抑制作用，结果见图1及表1。

2.2香菇多糖对真菌的抑制作用160 mg·mL-1的香菇多糖对青霉、绿色木霉、黑根霉和烟曲霉无抑制作用，对红色毛癣菌有微弱抑制作用。80 mg·mL-1的香菇多糖可以在啤酒酵母培养平板上产生抑菌圈。香菇多糖对白色念珠菌的抑制效果明显，40 mg·mL-1即可出现抑菌圈，结果见表2。

图1　香菇多糖对细菌的抑菌作用

细菌细菌类型MIC溶血性链球菌Streptococcushemolytis革兰阳性1.25金黄色葡糖球菌Staphylococcusaureus革兰阳性2.5鼠伤寒沙门氏菌Salmonellatyphimurium革兰阳性10枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis革兰阳性40大肠杆菌Escheirchiacoli革兰阴性0.625多杀性巴氏杆菌Pasteurellamultocida革兰阴性10痢疾志贺氏菌Shigelladysenteriae革兰阴性2.5伤寒杆菌Salmonellaenterica革兰阴性2.5甲型副伤寒杆菌SalmonellaparatyphiA革兰阴性5

表2　香菇多糖对真菌的抑制作用

2.3香菇多糖对细胞的保护作用香菇多糖对供试病毒均有一定的抑制作用，对病毒感染细胞的保护率均在70%以上，其中对流感病毒B的抑制率最高，达96%，结果见表3。

表3　香菇多糖对细胞的保护作用

2.4香菇多糖对病毒的直接抑制作用检测香菇多糖对流感病毒、呼吸道合胞病毒感染和腺病毒的直接抑制作用，结果显示多糖对腺病毒的抑制效果最好，抑制率达59%，对呼吸道合胞病毒只有32%，结果见表4。

表4　香菇多糖对病毒的直接抑制作用

3讨论

本研究发现，香菇多糖对供试细菌溶血性链球菌、金黄色葡糖球菌、鼠伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、痢疾志贺氏菌、伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌都有抑制作用，对革兰阳性菌的MIC为明显高于革兰阳性菌。可以得出结论，香菇多糖的抑制细菌作用具有普遍适应性，但革兰阴性菌对其更敏感。张嫚等[6]对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等4种鸡病原菌进行检测，发现对大肠杆菌的抑制作用强于金黄色葡萄球菌，并推测香菇多糖对革兰阴性菌的作用强于阳性菌，本研究扩大检测菌的数量，得出相同结论，其原理可能与革兰阴性菌细胞壁肽聚糖层薄，交联松散，多糖更易透过有关。

香菇多糖抑制真菌的文献报道相对较少，供试7株真菌对香菇多糖均不敏感，160 mg·mL-1的香菇多糖仍未表现对青霉、绿色木霉、黑根霉和烟曲霉的抑制作用，对红色毛癣菌仅有微弱抑制作用。香菇多糖对白色念珠菌和啤酒酵母的抑制效果较明显，但浓度已经分别高至40 mg·mL-1和80 mg·mL-1，明显高于对细菌的抑制浓度。文献报道[7，8]已证实香菇多糖对多种病毒有抑制作用，本研究进一步发现，相对于

病毒直接和香菇多糖作用后再吸附细胞，香菇多糖预先和寄主细胞作用，然后细胞再吸附病毒，对病毒的抑制率比较高。说明香菇多糖对病毒的抑制主要通过提高细胞的免疫能力，降低和阻断病毒吸附作用，抑制进入细胞内病毒的生物合成和复制起作用的。

总之，香菇多糖的抗菌作用具有普遍适应性，但对细菌和病毒的作用显著高于真菌，而且其抗病毒作用主要通过对细胞的免疫增强起作用。因此，香菇多糖更适于开发为抗细菌药物和免疫增强剂。

参考文献：

[1] 黄瑛,吴学谦,徐娟,等.香菇健康产品的开发研究现状[J].食药用菌,2013,21(6):346-348.

[2] 钟耀广,林楠,王淑琴,等.香菇多糖的抗氧化性能与抑菌作用研究[J].食品科技,2007,32(7):141-144.

[3] 吕国英,范雷法,张作法,等.香菇多糖研究进展[J].浙江农业学报,2009,21(2):183-188.

[4] 柏建岭,刘薇,于浩.香菇多糖联合化疗治疗肺癌近期疗效和免疫功能的评估[J].临床肿瘤学杂志,2008,13(8):724-729.

[5] 芦殿荣,祝彼得,刘啸,等.香菇多糖的免疫调节及临床应用研究进展[J].中华临床医学杂志,2004,5(7):63-65.

[6] 张嫚,胡大坤.香菇多糖对鸡常见病原菌的体外抑菌活性[J].江苏农业科学,2009,10(5):219-220.

[7] 张福明,张淑芹,孙非,等.香菇多糖对单纯疱疹病毒的抑制作用[J].长春中医药大学学报,2007,23(1):17-18.

[8] 李丹,尚红,姜拥军,等.香菇多糖体外抗HIV的免疫调节作用的实验研究[J].中国免疫学杂志,2004,20(4):253-255.