抑郁对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响

贺振燕++胡雪烈++徐亚熙++吴光焰++朱振叶

[摘要] 目的探讨抑郁对急性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法30只SD大鼠随机分为三组，假手术组，心肌梗死对照组，心肌梗死抑郁组，每组10只。制备相应模型并干预后，用TUNEL法检测心肌细胞凋亡，用免疫组织化学法检测心肌细胞Bc1-2、Bax蛋白的表达。结果心肌梗死抑郁组和心肌梗死对照组大鼠心肌细胞凋亡率以及心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达均高于假手术组，差异有统计学意义（P<0.01），心肌梗死抑郁组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax蛋白表达高于心肌梗死对照组，而心肌细胞Bcl-2蛋白表达低于心肌梗死对照组，差异有统计学意义（P

[关键词] 抑郁；心肌梗死；大鼠；凋亡；B细胞淋巴瘤/白血病基因-2；BCl-2相关基因X

中图分类号：R542.2

文献标识码：A

文章编号：1009-816X（2015）06-0457-02

急性心肌梗死严重威胁人类健康，严重影响患者生活质量，心功能不全是心肌梗死发展的主要结局，其间发生一系列的变化：如心肌坏死，心肌重塑等。近年来大量的研究发现，急性心肌梗死后细胞凋亡在这个过程中发挥了至关重要的作用。近年研究还表明，抑郁已成为急性心肌梗死的独立危险因素，急性心肌梗死后，尤其是冠状动脉支架植入者，术后出现抑郁较常见，再住院率高，备受关注。本文旨在探讨抑郁对急性心肌梗死心肌细胞的潜在作用机制，为心肌梗死后心脏康复方案的介入提供实验数据。

1 材料与方法

1.1 实验材料：

1.1.1 实验动物：健康雄性SD大鼠，共30只，体重250g左右，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司（国家啮齿类实验动物种子中心）。

1.1.2 主要试剂：原位末端标记（terminal deoxynu- cleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling，TUNE）细胞凋亡原位检测试剂盒（武汉博士德公司）；B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（B-cell lymphonma/leukemia gene 2.Bcl-2）、Bcl-2相关基因X（Bcl-2 Assaci-ated X protein，Bax）抗体、免疫组化试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。

1.2 实验方法：

1.2.1 大鼠急性心肌梗死模型的制作：1.5%戊巴比妥溶液腹腔注射麻醉大鼠后，行气管插管连接呼吸机，于左侧第4肋间开胸，暴露心脏并结扎左冠状动脉前降支，检测肢导心电图ST明显抬高或Q波出现即可认为心肌梗死动物模型造模成功。

1.2.2 大鼠抑郁模型的制作：根据文献，心肌梗死模型造模成功后大鼠孤养，随机选取以下各种刺激：冰水游泳、禁食、电击足底、夹尾、鼠笼倾斜、停水、悬吊、40度环境，制作大鼠抑郁模型。参照文献，少动并有焦虑及抑郁样症状的大鼠作为抑郁症大鼠成功制备标准。

1.2.3 分组雄性SD大鼠30只，随机抽取10只大鼠作为假手术组，其余20只进行急性心肌梗死造模。假手术组手术步骤同急性心肌梗死模型组，但不结扎冠状动脉。大鼠心肌梗死模型制作成功1周后，随机分成两组，心肌梗死对照组（n=10）：不给予任何刺激，群养每笼5只；心肌梗死抑郁组（n=10）瓢养，按照上述大鼠抑郁模型方案制作。

1.2.4 检测指标及方法：①心肌细胞凋亡检测应用TUNEL法原位标记凋亡细胞核。严格按照试剂盒说明书进行。心肌细胞凋亡率：视野内凋亡心肌细胞核数/视野内所有细胞核数×100%。②Bcl-2和Bax蛋白的检测采用SP免疫组织化学染色法，参照免疫组化试剂盒说明书，严格按照SP试剂盒操作步骤行免疫组织化学染色，每张切片随机取5个高倍视野（×400），计数每个高倍视野内的阳性细胞数和细胞总数，求其平均值。

1.3 统计学处理：使用SPSS18.0版统计软件，计量资料以（x±s）表示，多组间比较用方差分析和q检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

抑郁对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡指数及Bcl-2、Bax表达的影响：心肌梗死对照组与心肌梗死抑郁组大鼠心肌细胞凋亡指数均高于假手术组，差异有统计学意义（P<0.01），心肌梗死抑郁组大鼠心肌细胞凋亡指数高于心肌梗死对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。心肌梗死抑郁组与心肌梗死对照组大鼠心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白表达均高于假手术组，差异有统计学意义（P<0.01），心肌梗死抑郁组大鼠心肌细胞Bax蛋白表达高于心肌梗死对照组，而Bcl-2蛋白表达低于心肌梗死对照组，差异有统计学意义（P<0.01），见表1。

3 讨论

急性心肌梗死后心肌细胞坏死，致心肌细胞数量急剧减少，并发生形态学改变，加致血流动力学障碍，最终导致心功能受损。心肌梗死后患者心理压力大，生活质量下降，但其心理状况很少被重视，导致抑郁发病率增高。Alcantara等研究，抑郁可增加急性心肌梗死患者的死亡率。心肌梗死后抑郁生活状态，导致心功能进一步下降，给社会和家庭造成沉重的负担。急性心肌梗死后多种因素诱导心肌细胞凋亡，从而加速心室重构，加快心功能恶化进程。目前研究认为细胞凋亡基因Bcl-2，Bax起重要的决定作用。Bcl-2抑制细胞凋亡，Bax基因高度表达会加速细胞凋亡。Bcl-2及Bax比值增大说明细胞凋亡被抑制程度高，反之则细胞凋亡程度高。本研究显示：心肌梗死抑郁组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白表达低于心肌梗死对照组，而Bax蛋白表达高于心肌梗死对照组。从而得出抑郁可增加急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡，其作用可能与促进促凋亡基因Bax表达、抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达有关，由此为早期心脏心理康复介入提供实验数据，也可作为进一步研究具体机制的基础。