西藏日喀则市猪链球菌病血清ELISA抗体检测分析

四朗玉珍，刘忠艳，元振杰，拉巴次旦，吴金措姆，格桑卓嘎，班 旦

（1.西藏自治区农科院畜牧兽医研究所，西藏 拉萨 850009；2.西藏大学农牧学院，西藏 林芝 860000）

西藏日喀则市猪链球菌病血清ELISA抗体检测分析

四朗玉珍1，刘忠艳2，元振杰1，拉巴次旦1，吴金措姆1，格桑卓嘎1，班 旦1

（1.西藏自治区农科院畜牧兽医研究所，西藏 拉萨 850009；2.西藏大学农牧学院，西藏 林芝 860000）

为监测日喀则市猪链球菌病的流行情况，采用ELISA方法对日喀则市的189份疑似发病猪血清进行了抗体水平检测。结果表明，日喀则市猪链球菌病抗体总阳性率为42.86%，其中桑珠孜区为45.53%、吉隆县为39.47%、亚东县为38.46%。因此，在今后的猪病防控工作中，建议日喀则市以猪链球菌病为重点，采取综合的防控措施加强防疫。

猪链球菌病；ELISA；抗体检测

猪链球菌病（Swine streptococosis）是由多种致病性链球菌感染引起的一种人畜共患病，在世界范围内其最主要的病原为猪链球菌2型[1-3]。猪链球菌病能引起猪的急性败血症和脑膜炎，慢性病例则表现为关节炎、心内膜炎及组织化脓性炎症等[4-5]。

最近几年，ELISA（酶联免疫吸附试验）方法被大量应用于猪链球菌2型的鉴定，对以菌体毒力因子作为包被抗原的间接ELISA方法的研究较多[6]。ELISA方法操作简便、经济、快速，且此方法在我国各级兽医检测部门已应用多年，适合推广应用；同时，ELISA敏感性高、特异性好，在该病的诊断、检疫及流行病学调查中具有一定的实用价值。通过ELISA抗体检测试剂盒的使用，可以完成对日喀则市猪链球菌病的诊断和抗体水平的监测，对今后该病的防治及深入研究具有重要意义。

1 试验材料

1.1 主要仪器

Thermo MK3酶标仪，HH.B11.420恒温培养箱，微量振荡器，雷杜RT-2100全自动洗板机，UPC-I-10T优普超纯水制造仪，eppendorf微量移液器（单道0.1～2.5 μL、10～100 μL，12道30～300 μL），Thermo 1～100 mL电动移液器等。

1.2 主要试剂

猪链球菌抗体（IgG）诊断试剂盒（酶联免疫法），购自深圳市绿诗源生物技术有限公司。

1.3 待检血清

日喀则市共7个采样点，无菌采集猪全血189份。

2 试验方法

2.1 试验时间与地点

2014年12月，分别在西藏自治区畜牧兽医研究所和西藏大学农牧学院动物科学院开展本试验。

2.2 样品采集与处理

2.2.1 采样地点与动物数量 在日喀则市桑珠孜区、亚东县、吉隆县3个县（区）进行采样。在采样点，选择疑似发病的家养猪进行样品采集，具体采样地区和数量见表1。

表1 日喀则地区猪血液采集情况

2.2.2 采样方法 采用前腔静脉采血，采血部位位于左右两侧的颈静脉与腋静脉至第1对肋骨间的胸骨柄汇合处。首先对猪采血部位进行剪毛，用5%碘酒消毒后再用75%的酒精消毒，待皮肤干燥后采血，整个采血过程均为无菌操作，采用未添加抗凝剂的普通采血管进行采集。

2.2.3 血清样品制备 对于采集好的血液，在环境温度较高的采样地区，静置于室温6～8 h；在环境温度较低的采样地区，于37℃培养6～8 h。待血清析出后再于3 000 r/min离心5～10 min，无菌操作将血清分离分装于1.5 mL已灭菌的离心管内，-20℃保存待检。

2.3 血清ELISA抗体检测

（1）试验准备。分别将待检血清和检测试剂盒从冰箱内取出置于室温预热，待血清完全溶化后，用混样仪将血清充分混合均匀。洗涤液和稀释液按照检测试剂盒说明书要求配好备用。

（2）加样。根据样本数量，取所需板条。每板设阴、阳性各2孔，分别加入阴、阳性对照血清100μL。其余孔加入99 μL样本稀释液，设2孔为空白对照，加入已灭菌的超纯水；其它为样品孔加入1 μL样品。

（3）温育。加样后，盖板膜，猪链球菌病检测反应板置于37℃温育30 min。

（4）洗板。甩去孔内液体，按照说明书要求设定好程序进行洗涤。

（5）加酶。洗涤完成后，拍干净孔内剩余液体，每孔加酶标记物100 μL。

（6）温育。检测反应板置于37℃温育30 min。

（7）洗板。甩去孔内液体，按照说明书要求设定好程序进行洗涤。

（8）显色。每孔加显色剂A、B各50 μL，振荡混匀，检测反应板置于37℃避光反应15 min。

（9）终止。显色完成后，每孔加终止液50 μL，充分振荡混匀，终止后即读数。

（10）读数。猪链球菌病抗体检测反应板于450 nm/630 nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。2.4 结果判定

根据试剂盒说明书判断标准要求，当样品OD值≥0.35时判为阳性，样品OD值＜0.3时判为阴性，当0.3≤OD值＜0.35时为可疑。

3 结果

日喀则市共检测猪血清样品189份，所检测的猪链球菌病抗体阳性率为42.86%，分布于桑珠孜区（45.53%）、吉隆县（39.47%）、亚东县（38.46%）。具体阳性数分布情况详见表2。

表2 日喀则市猪链球菌病血清ELISA抗体检测阳性数

4 讨论

近年来，西藏自治区的养猪业在逐年发展，养殖量也在逐年稳步上升，所以做好猪病防控工作，是促进本地区养殖业健康快速发展的重中之重。通过这次对西藏日喀则市猪链球菌病血清ELISA抗体的检测发现，猪链球菌病给养猪业造成了重大的经济损失，今后在日喀则市要加强对猪链球菌病的防疫，并采取综合防控措施。

[1]Arends J P,Zanen H C.Meningitis caused by Streptococcus suis in humans[J].Rev Infect Dis,1988,10(1):131-137.

[2]Clifton-hadley F A.Streptococcus suis type 2 infections[J].Br Vet J,1983,139(1):1-5.

[3]Vecht U,Van Leengoed L A,Verheijen E R.Streptococcus suis infection in pigs in the Netherlands(partΙΙ)[J].Vet Q,1985,7(4): 315-321.

[4]Tarradas C,Luque I,De ANDRS D,et al.Epidemiological relationship of human and swine Streptococcus suis isolates[J].J Vet Med B,2001,48(5):347-355.

[5]Staats J J,Feder I,Okwumabua O,et al.Streptococcus suis:past and pres[J].Vet Res Commun,1997,21(6):381-407.

[6]付建，王敏兰.猪链球菌病的研究进展[J].畜牧与饲料科学，2012，33（4）：101-103.

（编辑：柳青）

维生素B2成为癌症杀手

【《俄罗斯报》10月13日报道】题：维生素B2成为癌症杀手

俄罗斯科学家用维生素B2辅助治疗癌症。这种创新疗法的实验室效果非常出色：肿瘤缩小90%。研究人员接下来打算与俄布洛欣肿瘤科研中心的医学家合作，展开该维生素疗法的临床试验。

人们早就知道，大剂量的维生素B2能消灭癌细胞。但该如何利用这一点的问题迟迟无法解决。

维生素B2生效的原理是进入机体后会产生活性氧和其他几种能杀死癌细胞的化合物。但实现这一点并不简单：维生素B2在发挥作用时需要紫外线或蓝光的照射，而两者都很难照进人体内部。

俄研究人员找到了一个巧妙的解决方法。他们与澳大利亚和法国同行合作，在移植了人体癌变组织的小白鼠身上进行试验。首先将携带大量维生素B2的纳米粒子放入小白鼠体内，然后用特殊的激光照射这些与众不同的纳米粒子。它们能将对人体无害且能深入人体内部的红外线转化成紫外线。有了紫外线，维生素B2被“激活”了，开始消灭癌细胞。

这次试验为期50天，在此期间定时用激光照射受试小白鼠，取得了令人欣慰的成果。

俄罗斯科学院晶体学和光子学科研中心专家叶夫根尼·海杜科夫说：“目前试验对象只是移植了人体癌变组织的小白鼠。放入纳米粒子一次就能阻断癌细胞增长，并将肿瘤体积缩小90%。”

俄科学家将上述研究成果发表在权威的英国《科学报告》杂志上。

（转自参考消息[N]，2016-10-14）

S858.285.1

A

1002-1957(2016)06-0105-02

2016-06-30

四朗玉珍（1980-），女，藏族，西藏林芝人，助理研究员，硕士，主要从事动物疫病防治研究.E-mail：sonamyudren@aliyun.com