市售油性记号笔对水产品中结晶紫检测污染研究

◎ 李 轩，曾丽珠，张 昊

（阳江出入境检验检疫局，广东 阳江 529500）

市售油性记号笔对水产品中结晶紫检测污染研究

◎ 李 轩，曾丽珠，张 昊

（阳江出入境检验检疫局，广东 阳江 529500）

本文研究用超高效液色谱串联质谱法（UPLC/MS/MS）测定市售4种常见品牌的黑色、蓝色、红色油性记号笔中结晶紫（含隐性结晶紫）的含量。待测笔样直接在称量纸上书写若干直线，再用乙腈提取，UPLC/MS/MS测定，内标法定量。结果表明，4种品牌的黑色、蓝色油性笔均检出结晶紫（含隐性结晶紫），而红色油性笔中结晶紫（含隐性结晶紫）含量较低或未检出。水产品检测过程中样品应避免直接接触到油性记号笔的染料，以防止样品在检测过程中的本底污染和假阳性。

超高效液色谱串联质谱法；结晶紫；隐性结晶紫；油性笔

结晶紫为三苯甲烷类染料，常用于鱼类水霉病等寄生虫病的防治或作为消毒剂用于鲜活鱼类运输过程中。研究表明，结晶紫进入人体，可以通过生物转化，还原代谢成脂溶性隐性结晶紫。隐性结晶紫具有高毒性、高残留和致癌、致突变等副作用，严重威胁着消费者的身体健康，是一种极为有害的消毒剂[1]。美国、韩国、日本等许多国家已要求水产品中结晶紫不得检出。目前结晶紫在水产品中残留检测的方法有HPLC、HPLC/MS/MS、UPLC/MS/MS等，但在样品前处理过程中可能会使用到含量存在结晶紫目标化合物的物品。其中油性记号笔是一大污染源，经常会用于实验过程中对各种容器的标志。许荣富 等[2]研究发现，结晶紫、甲基紫、碱性品蓝是市售蓝色圆珠笔中的主要染料。李心倩 等[3]研究发现，市售蓝色圆珠笔油墨所采用的主要色料是结晶紫。因此，研究和分析油性记号笔中结晶紫的含量，控制其在检测过程中对样品的污染，能有效提高检测水平。

1 实验过程

1.1 仪器

超高效液相色谱-串联质谱联用仪（Waters Quattro Premier XE）：配有电喷（ESI）离子源；离心机；漩涡振荡器（IKA）；超声波振荡器。

1.2 试剂

结晶紫（CV）、隐性结晶紫标准品（LCV），Dr.Ehrenstorfer GmbH；同位素内标氘代结晶紫（CV-D6）、同位素内标氘代隐性结晶紫（LCV-D6），Witega；乙腈、乙酸、无水乙酸铵，均为色谱纯。10 mmol/L乙酸铵；中性氧化铝柱。

1.3 油性记号笔

日本斑马 MO-120-MC，日本樱花XYK-T，晨光MG-2130，得力6824，4种品牌均含黑、蓝、红3种颜色。

1.4 试样检测

（1）标准溶液的配制。准确称取适量的结晶紫、隐性结晶紫内、外标标准品，用乙腈按需逐级稀释分别配制成结晶紫、隐性结晶紫混合标准溶液和结晶紫、隐性结晶紫内标混合标准溶液。

（2）提取。取各品牌不同颜色的记号笔，分别在称量纸上划写四道5 cm横线，晾干后置于塑料离心管中，加入100 μL内标混合标准溶液（100 ng/mL），加入10 mL乙腈，漩涡振荡1 min，超声振荡5 min，4 000 r/min离心10 min。空白称量纸作为空白对照。

（3）净化。移取样品溶液加至已活化的中性氧化铝柱上，用玻璃试管接受流出液，2 mL乙腈洗涤柱子，收集流出液，45 ℃氮气吹至近干，1+1乙腈-10 mmol/L乙酸铵定容至1.00 mL，经0.2 μm滤膜过滤后上机测定。

1.5 仪器条件

（1）色谱条件。A：0.1%甲酸乙腈，B：10mmol/L乙酸铵+0.1%甲酸；流速：0.3 mL/min；柱温：35 ℃，进样量：10 μL；总运行时间：4 min；色谱柱：Acquity UPLC BEH C18色谱柱，2.1×50 mm，1.7μm。

（2）质谱条件。离子化方式：ESI positive；毛细管电压：1.0 kV；离子源温度：110 ℃；脱溶剂气温度：氮气，800 L/Hr；采集模式：MRM模式。

1.6 标准曲线制作

取适量的混合标准溶液，分别加入内标混合标准溶液（100 ng/mL）100 μL，50%1+1乙腈-10mmol/乙酸铵溶液稀释成浓度为0.0、0.2、0.5、1.0、2.0 ng/mL和5.0 ng/mL标准系列，依次按从低到高浓度顺序分别进样检测，制作标准工作曲线。进样量10 μL，内标法定量。

2 结果分析

上述品牌各色记号笔中结晶紫（含隐性结晶紫）含量见表1。由表1可知，各品牌的黑色、蓝色油性记号笔中均有检出结晶紫，且蓝色笔均含较高浓度的结晶紫。各品牌的红色油性记号笔中结晶紫含量较低或未检出。研究结果表明，水产品检测过程中样品应避免直接接触到油性记号笔的染料，以防止样品在检测过程中的本底污染和假阳性。

表1 各品牌油性记号笔中结晶紫和隐性结晶紫的含量表

[1]刘 军，胡华军，张明洲，等.渔药孔雀石绿的毒性、危害和检测现状[J].浙江农业学报，2006（5）：397-400.

[2]许荣富，卢 青，邹 洪，等.反相高效液相色谱法对蓝色圆珠笔分类的研究[C].中国化学会有机分析及生物分析学术研讨会会议，2007.

[3]李心倩，王彦吉，史晓凡，等.圆珠笔油墨字迹色痕的高效液相色谱分析方法[J].分析化学，2004（5）：657-660.

Research on the Detection of the Contamination of Crystal Violet in Aquatic Products by Commercial Marking Pen

Li Xuan, Zeng Lizhu, Zhang Hao
(Yangjiang Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Yangjiang 529500, China)

This paper studied the content of crystal violet (including leucocrystal violet) in three diferent colors marking pen(black ,blue and red) by ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC/MS/MS). The results showed that the black and blue marking pen were detected in the crystal violet (including leucocrystal violet), while the red marking pen in the crystal violet (including leucocrystal violet) content is low or not detected. In the process of aquatic product inspection, the sample should avoid direct contact with the marking pen, in order to prevent the background pollution and false positive.

UPLC/MS/MS; Crystal violet; Leucocrystal violet; Oil pen

TS207

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.24.038