试析对大黄中土大黄苷检测方法的改进

孙丽丽

哈药集团世一堂制药厂 黑龙江哈尔病 150000

试析对大黄中土大黄苷检测方法的改进

孙丽丽

哈药集团世一堂制药厂 黑龙江哈尔病 150000

目的：在大黄类中成药中不含有与土大黄苷物质。本文主要通过HPLC法来对四类含有大黄的中成药进行鉴别与测定，研究其中土大黄苷的含量，分析中成药中大黄的质量。方法：利用Lichrospher C18色谱柱，乙腈-甲醇-水作为流动相，检测到波长是320nm，流速是 1.0mL·min-1，并且采用外标法进行定量性质的测定。结果：当土大黄苷保持在 2.62～261.6μg·mL-1的范围中时，和峰面积之间会形成良好的线性关系；平均回收率是96.30%。结论：本次实验采用的方法简单、准确，通用功能较强，具备较高的灵敏度。在鉴别与测定大黄的中成药中土大黄苷时，值得推广应用。

大黄；土大黄苷；检测；方法

大黄属于一种应用范围较广的中药，其功能包括泻热通肠、化瘀通经、凉血解毒。不少普遍的中药处方中都包含大黄。在相关的药物书籍中，提出大黄主要有三种，分别是蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄以及药用大黄的干燥根及根茎。另外，同类的植物中有一种土大黄，人们经常分不清土大黄与正品大黄。二者在化学构成与功效方面有不同之处，在价格方面也有很大的差异。本文主要分析了大黄中土大黄苷检测方法的改进，具体内容如下。

一、仪器与试剂

1、METTLER AE-240电子天平，Waters 2690液相色谱仪系统，Millennium32色谱数据处理软件。土大黄苷对照品[-9国药品生物制品检定所，批号：794—200103(供鉴别用)]；土大黄(成都康弘制药有限公司，由无锡药品检验所中药室鉴定)；炎可宁片(批号：20080307361，厂家1)；炎可宁片(批号：050801，厂家2)；一清颗粒(批号：20080401，厂家3)；一清颗粒(批号：070702，厂家4)；清火片(批号：060901，厂家5)；清火片(批号：20070307，厂家6)；麻仁润肠丸(批号：061001，厂家7)；麻仁润肠丸(批号：8013108，厂家 8)。乙腈、甲醇为色谱醇，水为二次纯化水，其它试剂均为分析纯。

二、方法与结果

1、色谱条件

色谱柱为Lichrospher C18(4．6ram×250mm，5μm)，以乙腈一甲醇一水(7：30：63)为流动相，检测波长为320nm，流速为1.0m L·min-1，进样量为10μL。

2、溶剂的准备

⑴对照试液的准备

采用精密的仪器量取 12mg的土大黄苷，加入到容量为200mL的量杯中，再添加浓度为50%的甲醇，进行均匀的搅拌后，稀释到固定刻度，作为对照试液。

⑵供试品试液的准备

采用精密的仪器量取0.1g的土大黄，加入25mL的甲醇。进行加热与回流，一小时后进行过滤，量取10mL的过滤液，加入25mL的水，作为供试品试液。

⑶炎可宁片

选取10粒炎可宁片，去除糖衣，研磨成细末。然后量取0.2g左右的炎可宁片药物，加入到锥形瓶内。然后添加25mL的甲醇，进行加热与回流，一小时后进行过滤，量取10mL的过滤液。然后加入25mL的水，作为供试品试液。

⑷一清颗粒

选取0.5g左右的一清颗粒，加入到锥形瓶内。然后添加25mL的甲醇，进行加热与回流，一小时后进行过滤。量取10mL的过滤液，加入25mL的水，作为供试品试液。

⑸清火片

选取10片清火片，研磨成细末，然后量取0.2g加入到锥形瓶内。然后添加25mL的甲醇，进行加热与回流，一小时后进行过滤，量取10mL的过滤液。然后加入25mL的水，作为供试品试液。

⑹麻仁润肠丸

选取10丸麻仁润肠丸，剪碎后，量取0.1g加入到锥形瓶内。然后添加25mL的甲醇，进行加热与回流，一小时后进行过滤，量取10mL的过滤液。然后加入25mL的水，作为供试品试液。

3、专属性试验

在上述色谱条件下，土大黄苷峰形良好，保留时间分别为10．32min，样品中杂质不干扰样品测定。可以看出，土大黄药材和厂家l的炎可宁片(厂家3的清火片，厂家5的一清颗粒，厂家 7的麻仁润肠丸)供试品溶液在土大黄苷对照品相应保留时间处有峰出现，通过二极管阵列进一步检测，土大黄苷对照品和厂家1的炎可宁片(厂家3的清火片，厂家5的一清颗粒，厂家7的麻仁润肠丸)供试品溶液主峰的紫外光谱图一致。以上 4个供试品送江苏省药品检验所进行质谱分析鉴定，确认该峰为土大黄苷峰。厂家2的炎可宁片(厂家4的清火片，厂家6的一清颗粒，厂家8的麻仁润肠丸)供试品溶液在10.32min附近没有吸收峰。

三、讨论

在此次实验过程中，选用的有甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲醇-水，甲醇为0.05mol·L-1磷酸二氢钾系统。实验结果显示，在运用甲醇-乙腈-水系统的过程中，土大黄苷的峰形较好，而且供试液的主峰可以和杂质峰进行基线分割。因此选取乙腈-甲醇-水系统作为最佳流动相。由于二苯乙烯类化合物能够溶解在甲醇、乙醇、乙酸乙酯中，同一批号的样品应该依次采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、浓度为80%的乙醇。结果显示，当提取溶液是甲醇时，对于土大黄苷提取的比较完整，而且其中含有的杂质量比较小。因此，选取甲醇当做提取试液。但是，甲醇作为溶液时，土大黄苷的峰形前延比较严重，因此在处理样品时，应该适当的用水稀释，以此调整峰形。

在提取时间方面，考察了加热回流0.5、1、1.5、2h，结果表明加热回流1h可将土大黄苷提取完全。分析炎可宁片、清火片、一清颗粒和麻仁润肠丸4种中成药的处方和功能主治，大黄用量均比较大，都具有清火泻下的作用。而土大黄几乎没有清火泻下的作用，且临床副作用较大，病人在不知情的状况下长期服用，容易贻误病情，造成不良反应，危害较大。在后续检验过程中，在多种含大黄中成药中均发现使用土大黄代替大黄入药的情况，具有一定的普遍性。因此笔者建议应尽快修订大黄[检查]项下土大黄苷检测方法，并建立～种通用性好的HPLC补充检验方法或在具体品种[检查]项下规定土大黄检查，监控中成药中的土大黄苷，为检测含大黄中成药中是否使用土大黄代替大黄投料提供检验依据。

土大黄苷(rhaponticin, rhaponitin 或poniticin)分子，化学名为3-羟基-5-[(1E)-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)乙烯基]苯基-β-D-葡萄糖苷，为二苯乙烯的衍生物，属于茋苷。药典收载的大黄项下规定不可检出土大黄苷。但近期研究表 明土大黄苷具有抗菌、改善微循环、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抑制过敏反应、调节机体免疫防御系统、抗 血栓及抗氧化等作用。药典规定药用大黄中不得检出土大黄苷，但随 着提取分离以及分析技术的发展在众多大黄属植 物中分离或检测出土大黄苷。研究表明：土大黄苷 及其代谢产物具有多种药理活性，其中土大黄苷可能作为PPAR-γ的激动剂以降低血糖浓度达到治疗糖尿病的作用且作用效果和噻唑烷二酮类药物吡咯列酮相当尤其引人注目，土大黄苷很可能成为从天然产物中开发高效、低不良反应的糖尿病药物。本文建立了HPLC法鉴别大黄中土大黄苷，同时采用本法对4种含大黄中成药中土大黄苷进行检查，确证其中是否以土大黄代替大黄投料。经实验证明，该方法通用性好，简便准确，在4种含大黄中成药的检测中均无杂质干扰，方法可行。该HPLC法检测土大黄苷优于药典纸色谱法，更具有专属性，准确性，同时还能应用于含大黄中成药的监控。

[1]徐颖，郭增军，谭林．土大黄苷研究进展[J]．中国现代应用药学杂志，2009，26(7)：549—550．

[2]陈志强，李贞景，傅志良，等．HPLC测定河套大黄中土大黄苷的含量[J]．分析试验室，2009，28(1)：101—102．

R284.1

A

1672-5018（2016）10-273-01