布鲁氏菌病抗体检测技术研究进展

王 琰

（新疆生产建设兵团第六师五家渠市畜牧兽医工作站，新疆五家渠 831300）

布鲁氏菌病抗体检测技术研究进展

王 琰

（新疆生产建设兵团第六师五家渠市畜牧兽医工作站，新疆五家渠 831300）

随着医疗设备以及医疗技术的发展和进步，布鲁氏菌病抗体的研究也有了新的进展和方向，通过使用胶体免疫层析技术，将大肠杆菌进行转化和重组，利用其产生的重组蛋白作为检测布鲁氏菌病抗体的原料，本文主要对该种方法进行简单的叙述，希望能够对布鲁氏菌病抗体检测技术的研究和发展提供一些文本思考和帮助。

布鲁氏菌病抗体；检测技术；研究进展

在对布鲁氏菌病进行检测技术研究的过程中，主要采用了布病虎红平板凝集试验（RBT）、布病试管凝集试验（SAT）、竞争ELISA试验（cELISA）技术，但是对于布鲁氏菌病抗体的检测速度和效果却没有达到理想中的结果，在此，本文主要针对布鲁氏菌病抗体快速检测新方法-胶体金技术进行简单的分析和研究，希望能对布鲁氏菌病抗体检测技术的研究提供一些帮助。

1 传统布鲁氏菌病检测技术分析

1.1 虎红平板凝集试验

该种试验方式主要是快速凝集反应，主要用于检测动物是否感染布鲁氏菌病。当前，在我国国内只有中国医学科学院流行病学微生物研究所生产供应布鲁菌病虎红平板试验抗原，材料包括阴性血清、阳性血清以及阴阳同一试管凝集反应的阴阳性血清。

被检测血清和布鲁菌病虎红平板凝集抗原各取0.03ml滴于玻璃板的方格内，每份血清都要进行搅拌，搅拌过程尽可能手动，搅拌工具可以使用火柴或者牙签，搅拌完成后，室温20℃保持4min内即可进行判定，对该过程中所产生的反应进行记录，与此同时和阴性血清以及阳性血清作为对照。

在血清的对照下，被检测血清出现任何程度的凝集现象都判定其为阳性，不出现凝集现象即为阴性，没有症状感染。

1.2 试管凝集试验

布鲁氏菌病试管凝集试验抗原主要表现为乳白色的悬浊液，久置之后会出现沉淀，溶液会变得清亮透明。

在试验时，抗原要进行稀释，稀释比例为1：20，被检测的血清按照1：12.5、1：25、1：50、1：100、1：200来进行稀释，同时还要设置基础血清作为对照。将抗原和血清一起加入试管中，加入剂量为0.5ml，在37～40℃环境下维持24h，观察其凝集结果。对结果进行判定，牛、马、鹿、骆驼血清1：100“++”为阳性，1：50“++”为可疑。猪、羊、犬1：50“++”为阳性，1：25“++”为可疑。试验结果表现为可疑的动物，应该在21～28d时间后重新进行试验，若其混合血清仍然为可疑，则判定其为阳性。

1.3 cELISA试验

C-ELISA检测试剂盒和新型布病C-ELISA抗体检测试剂盒，用于免疫接种动物和感染动物的鉴别诊断及布鲁氏菌病的确诊诊断。布鲁氏菌病竞争酶联免疫吸附试验检测试剂盒是在间接酶联免疫吸附试验检测阳性结果的基础上，区别被检动物是真正患病还是注射疫苗免疫过的动物。此方法敏感性高，特异性强。能够区分阳性动物的真假性即免疫与患病动物的区分。这样保证了布鲁氏菌ELISA试剂盒的特异性与敏感性。

布鲁氏菌病快速I-ELISA抗体检测试剂盒技术指标：对感染动物（牛、猪、绵羊、山羊和鹿等等）抗体检测特异性达99%，敏感性达97%，检测所需时间为15分钟，眼观判定结果。

布鲁氏菌病C-ELISA检测试剂盒技术指标：对感染动物（牛、猪、绵羊、山羊和鹿等等）血清抗体检测特异性达98%，敏感性达97%（感染山羊的检测敏感性达84%）。鉴别诊断疫苗免疫动物的血清抗体检测特异性达98%，敏感性达75%。

1.4 三种试验特点

以上三种试验在操作过程中，都会存在对试剂的配置和人为操作试剂，以及人为对试剂所表现出来的现象进行分析，后续还要通过计算和观察的形式来对比例或者数据进行研究，这很有可能会给试验带来很大的误差。

2 布鲁氏菌病抗体快速检测新方法-胶体金技术

2.1 测定试剂

（1）测定试剂主要有氯金酸、柠檬酸三钠、碳酸钾、金黄色葡萄球菌蛋白A四种，该四种试剂在使用前一定要对其纯度进行检测，试剂准备完成之后，分别支撑布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原，金黄色葡萄球菌蛋白A胶体金探针，在塑料底板上分别将吸水纸垫、硝酸纤维膜、金标垫以及玻璃纤维膜杨平垫组装在一起。

（2）人体血清，血清要选择临床确诊为布鲁氏菌病患者的血清，以及正常人的血清。

2.2 操作

取代检验血清10μ l按照1：400的比例加入生理盐水400μ l，混合之后作为检测液备用。

将血清标本检测液滴加3至4滴到布鲁氏菌病快速诊断盒中，静置两分钟后即可开始观察结果，15min后停止观察，在诊断窗口对照处出会出现一条红色沉淀线，出现此现象即可说明检测结果为阴性，也就是不存在布鲁氏菌病感染，如果诊断窗口对照和检测处出现了两条红色沉淀线，出现此现象即可说明检测结果为阳性，存在布鲁氏菌病感染，如果诊断窗口对照处没有出现红色沉淀线，则说明检测结果失效，应该重新进行试验检测。

3 结论

通过上述分析和说明，在进行布鲁氏菌病抗体的检测过程中，当前阶段采用的方法主要有虎红平板凝集试验、试管凝集试验、cELISA试验三种，但是其在使用过程中都会存在着或多或少的弊端，而新提出的快速检测方法=胶体金技术，在使用期间，尽可能的减少人为参与，避免人为操作过程中出现的失误，是当前布鲁氏菌病抗体检测工作中一项新兴的技术，希望能对今后布病以及布病抗体的检测工作提供更好的试验方法和途径。

[1] 蔺国珍.布鲁氏菌病LAMP检测方法的建立及双基因共表达分子疫苗研究[D].中国农业科学院，2012.

[2] 王芳，冯宇，张阁，等.牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立[J].中国农业科学，2016，49（9）：1818-1825.

新疆兵团第六师五家渠市《2016年度师市科技计划和重大科技专项计划》（1623号）

王琰（1987—），女，本科学历，助理兽医师，现从事动物疫病监测工作。