不同产地粉葛四种异黄酮含量比较

苏碧丽　胡　娟,2　庞文生,3*

1.福建中医药大学药学院，福建　福州　350122；2.福建中医药研究院，福建　福州　350003；

3.福建省第二人民医院，福建　福州　350003



不同产地粉葛四种异黄酮含量比较

苏碧丽1胡娟1,2庞文生1,3*

1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建中医药研究院，福建福州350003；

3.福建省第二人民医院，福建福州350003

【摘要】目的：考察不同产地粉葛中葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量，为制定粉葛药材质量标准提供参考依据。方法：采用RP-HPLC法，色谱柱Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸，梯度洗脱；流速1.0 ml/min，柱温30℃，检测波长250 nm。结果：葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的线性范围分别为12.4～620ng、1.52～76ng、2.4～120ng、3.28～164 ng，四种成分的平均加样回收率分别为101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分别为1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。结论：该方法简便快速，重复性良好，结果准确可靠，可用于不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分的含量测定。

【关键词】HPLC；葛根素；3＇-甲氧基葛根素；大豆苷；大豆苷元

粉葛为豆科植物甘葛藤PuerariathomsoniiBenth的干燥根，载于《中国药典》[1]，具有解肌退热、生津止渴的功效、临床主要用于外感发热头痛、项背强痛、口渴等症状。粉葛的主要化学活性成分有葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元等异黄酮类化合物[2]，具有降血压、降血糖、保护肝脏、治疗颈椎病等作用[3-4]；同时粉葛富含淀粉，因此具有较高的医用和食用价值。近年来，文献报道对粉葛异黄酮多指标成分的含量测定[5-8]，但是随着粉葛栽培面积的不断扩大，出现了许多栽培品种，因此不同产地药材之间的有效成分含量存在着一定的差异，进而影响了药材的质量。研究采用高效液相色谱法同时对广东、广西、安徽粉葛中四种异黄酮成分的含量，为粉葛药材质量控制提供方法和依据。

1仪器与试药

1.1仪器Waters2695高效液相色谱系统(2998型二极管阵列检测器)；KQ3200DE型数控超声波清洗器(昆山市超市仪器有限公司)；Thermo超纯水设备；电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；FW135中草药粉碎机(天津市泰勒特仪器有限公司)。

1.2药品与试剂3＇-甲氧基葛根素对照品(批号：141217，成都普菲德生物技术有限公司)；葛根素对照品(批号：10752-201313)、大豆苷对照品(批号：111738-201302)、大豆苷元(批号：111502-200402)均购自中国食品药品检定研究院；粉葛(批号：150420，安徽本草国药饮片有限公司；批号：150302，安徽省金芙蓉中药饮片有限公司；批号：1504005，江西樟树天齐堂中药饮片有限公司)；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取各对照品适量，分别用甲醇制成每毫升中含有葛根素0.062 mg、3＇-甲氧基葛根素0.0076 mg、大豆苷0.012 mg、大豆苷元0.0164 mg即可。

2.2供试品溶液的制备取不同产地的粉葛粉末(过三号筛)约1.0 g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.3色谱条件色谱柱Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长：250 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；梯度洗脱条件见表1。色谱见图1。

表1　梯度洗脱条件

2.4方法学考察

2.4.1线性范围考察分别精密吸取上述对照品溶液0.2、0.5、1、2、5、10 ml，置于10 ml容量瓶内，以甲醇定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过。分别按“2.3”项下条件测定，以峰面积(A)为纵坐标，进样量为横坐标(X，ng)绘制标准曲线，得到葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的回归方程，见表2。

表2　四种异黄酮类成分线性关系考察

(n=3)

2.4.2精密度试验取混合对照品溶液，按“2.3”项色谱条件重复测定6次，测得葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面积RSD分别为0.52%、1.36%、1.00%、0.35%，结果表明仪器精密度良好。

2.4.3重复性试验取同一来源的粉葛6份，分别按“2.2”项下制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均含量分别为0.29%、0.04%、0.04%、0.03%，RSD分别为1.61%、1.98%、1.50%、1.62%。结果表明本方法重复性良好。

2.4.4稳定性试验取同一来源的供试品溶液，按“2.3”项下的色谱条件，分别用于0、2、4、6、8、12 h进样10 μL分别测定葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面积，RSD分别为1.02%、1.98%、1.15%、1.54%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4.5加样回收率试验精密称取同一粉葛根粉末约0.5 g，置于锥形瓶中，精密加入适当量的对照品溶液，按“2.2”项下制备供试品溶液，平行制备6份。按“2.3”项下色谱条件测定，计算平均回收率和RSD，葛根素、3＇-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均回收率分别为101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分别为1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。结果表明该方法准确可靠。

2.5样品含量测定取不同产地的粉葛，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件测定，记录各个成分的峰面积，以外标法计算样品中各成分的含量，结果见表3。

表3　不同产地粉葛样品中四种异黄酮类成分含量测定(n=3，%)

3讨论

不同产地粉葛药材中四种异黄酮类成分含量比较，葛根素：广东>安徽>广西；3-甲氧基葛根素：安徽>广东>广西；大豆苷：广东>安徽或广西；大豆苷元：广东>广西>安徽；不同产地之间含量相差较大的是3＇-甲氧基葛根素，进一步的说明不同产地的环境、气候、土壤、降水等条件对粉葛根药材有效成分还是存在一定的影响。

本实验通过高效液相色谱法建立对不同产地的粉葛多指标成分的含量测定，能够更全面的控制粉葛饮片的质量，为粉葛药材的选择提供了一定的依据。

参考文献

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[2]陈荔炟, 陈树和, 刘焱文. 葛根资源、化学成分和药理作用研究概况[J]. 时珍国医国药, 2006,17(11): 2305-2306.

[3]尹丽红, 李艳枫, 孟繁琳. 葛根的化学成分、药理作用和临床应用[J]. 黑龙江医药, 2010, 23 (3): 371.

[4]郑高利. 大豆异黄酮的药理作用[J]. 中国现代应用药学,1998, 15(1): 4.

[5]王春怡, 杨方明, 李卫民, 等. 不同来源的粉葛中总黄酮和葛根素的含量测定[J].时珍国医国药，2008,19 (11): 2772-2773.

[6]张开霞, 章军, 荆文光, 等. HPLC测定粉葛饮片中3种黄酮类成分含量[J].中国实验方剂学杂志, 2013, 19(6): 78-80.

[7]陆霄鹤. HPLC法测定两种葛根中葛根素含量[J].内蒙古中医药, 2010，29(2): 33-34.

[8]王新胜, 吴艳芳, 张延萍, 等. 伏牛山区野葛与粉葛中葛根素和大豆苷元含量的比较[J].中国医院药学杂志, 2010, 30(1): 5-7.

Comparison the content of four kinds of isoflavonoids in different habitats of radixpuerariaethomsonii

SU Bili1HU juan1,2PANG Wensheng1,3*

1.FuJian University of Traditional Chinese Medicine of Pharmacy, Fuzhou 350122,China;2.FuJian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003,China;3.Fujian Seeond Peopleis Hospitied, Fuzhou350000,China

Abstract:Objective To determine the content of puerarin, 3′-methoxy puerarin, daidzin,daidzein in different habitats of radix puerariae thomsonii,and provide reference for establishing its quality standards.Methods HPLC determination was performed on a Hypersil C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm) and detected at 250 nm.The mobile phase was consisted of Acetonitrile and 0.2% Phosphate acid solution with gradient elution. The flow rate was 1.0 ml·min-1and column temperature was kept at 30℃.Results The method was proved to be linear in the ranges of 12.4～620,1.52～76,2.4～120,3.28～164 ng for the four isoflavonoids, puerarin, 3′-methoxy puerarin, daidzin, daidzein,respectively. The average recoveries were 101.1% (1.43%),101.78%(0.95%),103.39%(1.21%),respectively. Conclusion Results obtained showed that the method is convenient,accurate and reliable,can be applied to the determination of the content of Radix Pueraria thomsonii from different sources in four isoflavonoids.

Key words:HPLC;puerarin;3′-methoxy puerarin; daidzin;daidzein

(收稿日期：2015.12.19)

【中图分类号】R284.1

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)03-0010-02

作者简介：苏碧丽，女，在读硕士研究生，从事天然药物化学研究。E-mail：912637905@qq.com通信作者：庞文生，E-mail:pws@fjtcm.edu.cn