瓜蒌桂枝汤对MCAO大鼠脑组织自由基代谢药效学研究

庞文生　胡　娟

1. 福建中医药大学附属第二人民医院，福建　福州　350003；2. 福建中医药大学药学院，福建　福州　350122



瓜蒌桂枝汤对MCAO大鼠脑组织自由基代谢药效学研究

庞文生1,2胡娟2

1. 福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州350003；2. 福建中医药大学药学院，福建福州350122

【摘要】目的：探讨瓜蒌桂枝汤对MCAO大鼠脑组织自由基代谢影响。方法：采用线栓法制造大鼠局灶性脑缺血再灌注MCAO模型，给药组给予瓜蒌桂枝汤原方和化裁方临床折合剂量的水煎液，每日1次，连续灌胃14d；模型组与假手术组均给予同体积生理盐水。生化法测定MCAO大鼠脑组织中SOD、GST和GSH-Px活力和MDA含量。结果：瓜蒌桂枝汤可以显著提高MCAO大鼠SOD、GSH-Px、CAT的活力，对大鼠脑组织MDA升高具有明显抑制作用。结论：瓜蒌桂枝汤可能通过减轻脑组织自由基损伤发挥其脑缺血保护作用。

【关键词】瓜蒌桂枝汤；MCAO大鼠模型；SOD；MDA；GSH-PX；CAT

瓜蒌桂枝汤是《金匮要略》治疗柔痉的中医经典方剂，以瓜蒌根加桂枝汤组成。柔痉之病是因外感风寒、过汗或误下，耗损津液，致筋脉失养所造成的。桂枝汤解肌祛邪，瓜蒌根(即天花粉)能滋养津液而润燥养筋、舒缓筋脉，以治柔痉。汤本求真氏说：“瓜蒌根治因虚热，脏器组织燥枯，而于外表发轻微强直性痉挛，于里现口燥口渴及其他之症状”[1]。根据临床实践，瓜萎根确有治疗因热伤津而致强直痉挛的作用。

福建中医药大学校长陈立典教授创新性地临床运用瓜蒌桂枝汤治疗脑卒中后痉挛性偏瘫，跟踪多年临床上使用本方的情况，患者服药后症减，取得较好疗效[2]。将此方已研发为医院制剂，具有自主知识产权。中药复方多具有多靶点、多途径的作用特点，因此从多方面多层次探讨瓜蒌桂枝汤用于治疗脑卒中后遗症的作用机制，为其临床应用提供理论依据。

本文研究瓜蒌桂枝汤(GLGZT)对MCAO大鼠脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)及过氧化氢酶(CAT)等代谢的影响，探讨其逆转脑卒中神经损伤的药理作用靶点。

1材料与方法

1.1实验动物SPF级雄性SD大鼠，体重(250±20)g，上海斯莱克实验动物有限公司。

1.2实验仪器VF3001全波长扫描多功能酶标仪(美国)。

1.3实验药物与试剂瓜蒌根(天花粉)、桂枝、白芍、甘草、干姜、大枣购于福建祥安药业有限公司，经检测符合药典标准；氯化钠(国药集团化学试剂有限公司)；SOD、GSH-Px和MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)；CAT试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)。

1.4方法

1.4.1动物模型制备目前进行脑缺血再灌注损伤研究的常用动物模型为大鼠MCAO模型。采取线栓法制作大脑中动脉闭塞/再灌注模型[3]：动物术前禁食12h，自由饮水；用10%水合氯醛3ml/kg行腹腔注射麻醉；钝性分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、和颈内动脉(ICA)，并小心分离迷走神经，分别电凝ECA分支枕动脉和甲状腺上动脉；在距CCA分叉大约1cm处结扎ECA近心端，电凝远心端；用无创小动脉夹夹闭CCA，在ECA残端距CCA分叉3mm剪一小口，将制备好的线栓经ECA插入ICA，线栓头端距CCA分叉处约18mm，此时进线有轻微阻力，栓线正好插至颅内的大脑前动脉，堵住大脑中动脉(MCA)开口，制成MCAO模型；造模后2h，以半剂量10%水合氯醛再次麻醉动物，拔出线栓，结扎ECA残端。术后20～25℃条件下饲养大鼠，自由进食水。假手术组除不在颈内动脉插入线栓外，其余步骤与上述相同。

1.4.2分组与给药将40只大鼠随机分成4组，每组10只，分别为模型组、假手术组、原方组和化裁方组。两个给药组分别给予瓜蒌桂枝汤原方(天花粉6g，桂枝9g，芍药15g，甘草6g，生姜9g，大枣12枚和增大天花粉用量的化裁方(天花粉30g，其余药味用量与原方相同)按临床剂量折合大鼠剂量水煎剂，用水煎煮两次合并混匀。模型组与假手术组均给予生理盐水。每日1次，连续给药14d。

1.4.3MDA、SOD、GSH-Px和CAT的测定大鼠于缺血再灌注24h后断头取脑，冰上分离缺血侧大脑皮质适量，在冰浴中匀浆，用0.9%生理盐水制成10%的组织匀浆液。4000r/min离心10 min，取上清分装备用。具体检测方法严格按各自试剂盒说明书操作，按说明书公式计算具体数值。

2结果

2.1GLGZT对MCAO大鼠脑组织SOD和MDA的影响脑组织缺血缺氧后，组织氧化和抗氧化平衡被打破，结果显示模型组SOD、GXH-Px和CAT活力明显降低，表明机体清除超氧阴离子自由基的能力降低；脑组织缺血缺氧后产生大量的自由基，攻击生物膜中的多种不饱和脂肪酸，生成MDA等脂质过氧化物，显示模型组脑组织MDA明显升高。给予GLGZT后，原方和化裁方可明显升高脑组织SOD活力；MDA均有不同程度的降低，表明GLGZT对脑组织缺血后自由基的生成有一定抑制作用；尤以化裁方效果更好；结果见表1。

表1GLGZT对MCAO大鼠脑组织

组别nSOD/U/mgMDA/nmol假手术组10145.22±8.760.93±0.26模型组10112.03±9.52▲▲1.50±0.48▲▲GLGZD原方10129.65±5.94*1.38±0.27*GLGZD化裁方10138.12±5.36**1.33±0.31*

注：与假手术组比较，▲▲P<0.01；与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05。

2.2GLGZT对MCAO大鼠脑组织GSH-Px和CAT的影响脑缺血缺氧后通过COQ途径产生H2O2等过氧化物，造模后MCAO大鼠脑组织CAT、GSH-Px活性明显降低。GLGZT原方和化裁方均可提高CAT、GSH-Px活力，同模型组相比差异有统计学意义。结果见表2。

表2GLGZT对MCAO大鼠脑组织

组别nGSH-Px/U/mgCAT/U/mg假手术组1016.11±2.164.39±0.62模型组108.78±1.53▲▲2.55±0.37▲▲GLGZT原方1011.34±2.44*2.83±0.37*GLGZT化裁方1013.12±3.28**3.16±0.24**

注：与假手术组比较，▲▲P<0.01，▲P<0.05；与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05。

3讨论

脑血管疾病以其高发病率、高致残率、高复发率己成为严重威胁人类生命与健康的主要疾病之一，随着我国老龄化社会的到来，其发病率呈明显上升趋势。脑血管疾病主要包括缺血性和出血性脑卒中，其中以缺血性脑卒中最常见，而且大脑中动脉(MCA)是脑缺血的多发部位[4]。

脑组织缺血缺氧后，组织氧化和抗氧化平衡被打破，SOD、GXH-Px和CAT活力明显降低，表明机体清除超氧阴离子自由基的能力降低；脑组织缺血缺氧后产生大量的自由基，攻击生物膜中的多种不饱和脂肪酸，生成MDA等脂质过氧化物，脑组织MDA明显升高；GXH-Px可催化过氧化物分解，保护细胞膜结构和功能的完整；CAT也可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害[5]。瓜蒌桂枝汤能提高SOD、GXH-Px、CAT活性，减少MDA产生，对脑缺血后自由基的损伤有明显的保护作用。

参考文献

[1]田文熙. 《金匮要略》中桂枝汤类方调和阴阳的作用[J]. 中国中医基础医学杂志，2010，16 (8)：646-647.

[2]陈瑛玲，陈立典，陶静.瓜篓桂枝汤治疗中风后肢体痉孪的临床研究[J]. 中医临床研究，2013，5 (4)：7-9.

[3]朱雪钦，韩静，胡娟，等. 补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用研究[J]. 中国民族民间医药杂志，2015，(1)：42-43.

[4]高峰. 急性缺血性脑卒中血管内治疗中国专家共识[J]. 中国脑血管病杂志，2014，11(10)：556-560.

[5]邵福源，王宇卉. 分子神经药理学[M]. 上海：上海科学技术出版社，2005.

(收稿日期：2015.12.07)

【中图分类号】R285.5

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2016)03-0019-01

作者简介：庞文生，男，从事天然药物化学研究。E-mail：pws@fjtcm.edu.cn

基金项目：福建省科技厅社会发展引导性(重点)项目(2013Y0047)资助。