兔沙门氏菌病的病原学诊断

孙维发

（黑龙江省密山市畜牧兽医局动物检疫站，黑龙江密山 158300）

兔沙门氏菌病的病原学诊断

孙维发

（黑龙江省密山市畜牧兽医局动物检疫站，黑龙江密山 158300）

兔沙门氏菌病是由鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌引起的兔的一种以消化道疾患为主的疾病，主要侵害妊娠母兔。沙门氏菌感染不仅发生于兔，人和其他动物也有发现，食用被沙门氏菌污染的动物性食物，往往是导致人食物中毒的重要原因。

沙门氏菌病；病原学；诊断

正常动物肠道内本身就寄生沙门氏菌，当由于环境因素变化、饲养管理不良以及患有其他疾病，使机体抵抗力降低时，就可以通过内源性感染而发病。根据感染途径和发病经过的不同，沙门氏菌病分为腹泻型和流产型两种临床表现形式，病理变化也随疾病的经过不同而不同。

根据流行病学、临床表现及病理变化可做出初步诊断。进一步确诊，则须进行细菌分离与鉴定。普查兔群污染情况，须作血清学检验。

1 流行病学

本病传染性比较强，发病兔不分年龄、性别和品种，但以妊娠母兔易发。饲养管理不当、卫生条件不良和家兔体弱、气候剧变均可增加发病的机会。

2 临床症状

本病分为腹泻型和流产型两种。腹泻型主要发生于断奶后的仔兔。病兔体温升高，食欲不振，精神沉郁，顽固性下痢，病兔消瘦。流产型多发生于妊娠1个月前后，多数病兔由阴道排出黏液脓型分泌物，病兔常于流产后死亡。即使母兔在流产后不死亡，康复后也不易再受孕。

3 病原学诊断

（1）样品采集。剖检时采取病死兔的血液、肝脏、脾脏以及有病变的回、盲、结肠黏膜和肠内容物。流产兔还可取子宫、阴道分泌物或流产胎儿的内脏器官；病兔，采血液、直肠拭子。

（2）镜检。取采集的病料进行涂片，革兰氏染色镜检，观察细菌形态。沙门氏菌为革兰氏阴性，短杆状（2～4μm×0.5μm），具有周鞭毛并常有菌毛，不形成芽孢。

（3）分离培养。将采集的样品接种于SS琼脂、DHL琼脂、HE琼脂或麦康凯平板，37℃培养24h。同时，接种改良亚硒酸盐胱氨酸（SCM）增菌培养基中培养20h，再接种上述培养基。本菌在SS琼脂或DHL琼脂上呈无色半透明菌落，边缘整齐，菌落中心为黑色，周围培养基透明，呈淡黄色；在HE琼脂上，菌落呈圆形，边缘整齐，蓝绿色或蓝色，菌落中心为有或无黑色，菌落周围培养基呈透明墨绿色；在麦康凯琼脂上，呈无色半透明，边缘整齐、光滑、稍隆起的菌落。从每块平板上挑选3个以上的可疑菌落，接种三糖铁斜面培养基，接种方法是先划线而后穿刺，37℃培养过夜。沙门氏菌在三糖铁培养基上，斜面部分保持原来的颜色为碱性红色，而垂直部分变为黄色并有黑色的硫化铁产生，产酸产气。

4 细菌鉴定

（1）生化试验。在三糖铁培养基上初步鉴定，符合沙门氏菌特征者，作靛基质、硫化氢产生、pH7.2尿素、氰化钾培养基生长、赖氨酸脱羧酶试验。本菌的硫化氢、赖氨酸脱羧酶试验为阳性。发酵葡萄糖、甘露糖、麦芽糖，不发酵蔗糖、乳糖；M.R.试验、枸橼酸盐利用、运动力试验阳性，V-P试验、靛基质试验、尿素酶产生试验阴性。

（2）血清型鉴定。将培养物与生理盐水作成的乳浊液，取该乳浊液一滴于玻片上，加入特异性多价O血清（A-F组多价O诊断血清）作玻板凝集反应。阳性反应者通常在室温下3min内出现凝集颗粒，若不出现凝集，可确定为阴性。但对于生化反应比较典型的可疑菌株，在血清学鉴定呈阴性的情况下，可将上述培养物乳浊液100℃处理30min后，再用多价O血清进行凝集试验。对于确定为沙门氏菌的菌株，可进一步用单价O因子血清、第Ⅰ相因子血清、第Ⅱ相因子血清作玻片凝集试验，以确定该菌株属于哪一组，是哪一型的沙门氏菌（因为沙门氏菌培养16～20h，鞭毛形成最好，所以在确定第Ⅰ相抗原、第Ⅱ相抗原时，菌株的培养时间要适宜，才会取得令人满意的结果）。

（3）辛酯酶荧光试验

试验试剂：①MUCAP试剂：按生产者的使用说明制备工作浓度的稀释液，贮存于4℃冰箱，备用。②氧化酶试纸：将1%α-萘酚乙醇溶液与1%二甲基对苯二胺草酸盐水溶液等量混合后，70～80℃烘箱烘干，剪成适当大小的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮存于4℃冰箱，备用。

细菌分离培养：挑取一接种环四硫磺酸盐煌绿增菌液培养的细菌培养液，划线接种于SS和HE琼脂培养基各一个，于36±1℃培养24h。观察各琼脂平板上有无可疑沙门氏菌菌落，如无可疑菌落，应再继续培养24h。

测定：①测定方法：从分离培养基上选可疑沙门氏菌（尽量选较大的单个菌落），用记号笔做好标记并编号。用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上，待整个平皿的被检菌落全部滴加试剂后，将平皿拿至366nm紫外灯下检查，发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落记录下来。用接种环挑取荧光反应阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变为蓝色，于10min内变为蓝色者判为氧化酶试验阳性，不变色者判为氧化酶阴性。②结果判定：MUCAP试验阴性的样品，判为“未检出沙门氏菌”；MUCAP试验阳性，氧化酶试验阴性的样品，进行生化试验和血清学鉴定；MUCAP阳性，且氧化酶试验阳性者判为沙门氏菌阳性。

5 防制措施

防止传染源的接触。一旦发现本病，应立即检出病兔隔离治疗或淘汰，兔笼和用具应彻底消毒，并可用凝集反应普查带菌兔，对阳性者最好进行淘汰，面对阴性兔，可应用本场所分离到的沙门氏菌制成死菌苗进行预防注射，用以控制本病的流行。目前，许多沙门氏菌菌株已对多种抗生素产生了抵抗力，从而严重地降低了抗菌疗法的效力。因此使用抗生素一定要慎重，如果使用已有抗药性的抗生素以后，则会破坏已定居的、能对宿主提供保护力的固有菌区系，使微生态系统受到破坏，造成沙门氏菌无限制地增殖，通过血液循环系统而导致败血症。当病兔出现菌血性或败血性情况时，注射氯霉素、庆大霉素以及三甲苄磺胺嘧啶合剂对全身性沙门氏菌病有效。

［1］ 张清洁，孙文学.兔沙门氏菌病的诊断［J］.中国兽医杂志，1998，（9）：14.

孙维发（1977-），男，大专，兽医师，主要从事动物检疫工作。