消银汤对豚鼠银屑病样模型血清TNF—α、IFN—γ水平的影响

宋红霞

【摘 要】目的：探讨消银汤对TNF-α、IFN-γ水平的影响。方法：建立豚鼠耳部银屑病皮损模型，给予不同剂量的消银汤干预，14d后，采用ELISA法检测豚鼠血清TNF-α、IFN-γ的含量。结果：消银汤组豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明显低于模型组（P<0.01）；消银汤高剂量组对豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ表达的改善作用优于甲氨蝶呤（P<0.05或P<0.01）。结论：消银汤对银屑病具有治疗作用。

【关键词】银屑病；消银汤；肿瘤坏死因子-α；干扰素-γ

银屑病是一种常见的易复发的慢性炎症和增殖性皮肤病，目前该病病因和发病机理不明，大多数学者认为银屑病是一种多基因遗传背景下的T细胞介导的自身免疫性疾病[1]。消银汤是笔者的临床经验方，治疗寻常型银屑病取得了满意的疗效。本实验利用消银汤对豚鼠银屑病样动物模型进行研究，检测豚鼠血清中肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ的水平，为临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物

白色豚鼠53只，普通级，体质量为300g～350g，雌雄兼用，由重庆医科大学实验动物中心提供，合格证号：SYXK（渝）2012-0001。

1.2 药物

消银汤药物组成：黄芩10g、生地15g、牡丹皮12g、赤芍15g、半枝莲30g、白花蛇舌草15g、槐花10g、紫草10g、玄参15g、丹参15g、鸡血藤15g和甘草6g。制备方法：称取各药材，用水煎煮制备，共煎煮两次，煎出液合并，浓缩到每剂药168ml。消银汤的人体推荐摄入量为168g·d-1生药，相当于2.8g·kg-1·d-1生药（成人以60kg计）。

1.3 主要试剂及设备

甲氨蝶呤片（上海信谊药业有限公司，批号：20130403），普萘洛尔（山西云鹏制药有限公司，批号：130801），聚乙烯吡咯烷酮，氮酮（国药集团化学制剂有限公司，批号：20131115，20131030），豚鼠TNF-α，IFN-γELISA试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司，批号：201311），光学显微镜（日本奥林巴斯公司），LP-400酶标仪（法国巴斯德公司）。

1.4 消银汤对豚鼠银屑病样模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影响

盐酸普萘洛尔搽剂制备方法：取盐酸普萘洛尔5g，用50%乙醇溶解，加入氮酮5mL作为透皮吸收促进剂，加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP-K30）5g为成膜材料，最后补加50%乙醇至100mL，搅拌均匀即得[2]。

取白色豚鼠53只，雌雄兼用，随机抽取8只作为正常对照组，其余豚鼠用玻棒涂抹普萘洛尔搽剂于两侧耳廓皮肤，用量为0.1mL/cm2，每日两次，连续涂抹两周，制备耳部皮肤银屑病样皮损模型（至第2周末，空白组及造模组随机处死5只豚鼠作耳组织病理学检查，如出现银屑病样病理改变，则提示造模成功）[3]。

将成模豚鼠40只，随机分为模型组、消银汤高（26.0g·kg-1）、中（13.0g·kg-1，等于临床等效剂量）、低（6.5g·kg-1）剂量组、阳性对照组（甲氨蝶呤0.77mg·kg-1，相当于临床等效剂量），每组8只。各组灌胃给药，每天两次，连续14d，给药容积为13ml·kg-1。正常组和模型组给予等量的生理盐水。末次给药1h后，腹腔注射20%乌拉坦麻醉豚鼠，切开腹部，暴露腹主动脉，采集全血8mL，室温静置30min，3000r·min-1离心15min，吸取上清，置于-80℃保存。用ELISA试剂盒检测血清中细胞因子TNF-α、IFN-γ含量，具体操作严格按照说明书进行。

1.5 统计学分析

采用SPSS 13.0软件进行数据处理和统计分析，计量资料以均数±标准差（■±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 消银汤对豚鼠银屑病样模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影响

与空白对照组相比，模型组豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明显升高（P<0.01）；与模型组相比，消银汤各剂量组及甲氨蝶呤组豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量均明显降低（P<0.01）；消银汤高剂量组与甲氨蝶呤组比较，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01），见表1：

表1 消银汤对豚鼠银屑病样模型血清中TNF-α、IFN-γ含量的影响）（■±s，n=8）

注：与模型组比较aP<0.01；与甲氨蝶呤组比较bP<0.05，cP<0.01.

3 讨论

银屑病是一种以红斑鳞屑为主的慢性炎症性皮肤病，其病因和发病机制复杂。目前，银屑病发病机制主要有遗传因素、免疫因素、感染因素、内分泌因素、神经精神因素等[4]。近年来，大量研究表明银屑病存在着免疫异常，而细胞因子作为免疫调节的物质基础在银屑病的发病中起着重要的作用[5]。TNF-α是一种重要的促炎症性细胞因子，与银屑病的发生密切相关，它能够促进淋巴细胞浸润，能够促进朗格汉斯细胞成熟，能够促进上皮细胞和成纤维细胞的生长[6]。INF-γ在银屑病中既可导致角质形成细胞异常增生，又可使T细胞进入表皮增殖活化[7]。

本实验结果显示，模型组豚鼠血清中TNF-α、IFN-γ的含量明显高于空白对照组，消银汤各剂量组对豚鼠血清TNF-α、IFN-γ均有抑制作用，其中消银汤高剂量组的作用优于甲氨蝶呤组，结果提示消银汤对银屑病豚鼠模型的治疗作用可能与降低血清中TNF-α、IFN-γ的表达水平有关。

【参考文献】

[1]郝平生.豚鼠银屑病动物模型组织中TNF-α表达及加味凉血消风散的调控实验研究[J].成都中医药大学学报，2011，34（3）：29-31.

[2]李涛，李洪梅，李小芹，等.银屑平颗粒对豚鼠银屑病动物模型的影响[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（16）：137-139.

[3]王萍，聂继红，孙玉华.双黄解毒乳膏对银屑病动物模型作用的实验研究[J].中成药，2011，33（7）：1227-1229.

[4]赵辨.中国临床皮肤病学[M].第1版.南京：江苏科学技术出版社，2009：1008-1009.

[5]陈文娟，史玉玲.银屑病免疫学的研究进展[J].国际皮肤性病学杂志，2015，41（1）：31-34.

[6]郝平生.豚鼠银屑病动物模型组织中TNF-α表达及加味凉血消风散的调控实验研究[J].成都中医药大学学报，2011，34（3）：29-31.

[7]胡祥宇，杨文信.血清中肿瘤坏死因子α、干扰素γ及白介素4与寻常型银屑病中医辨证相关性研究[J].西南军医，2015，17（2）：156-158.

[责任编辑：王楠]