番茄组织培养

雷蕾

[摘 要]针对组织培养中污染这个首要问题及番茄种子的特点对其进行消毒处理，采用次氯酸钠（商品名为安替福民）对两个供试品种即五彩番茄和抗寒番茄进行消毒。两个品种各进行四次处理。每次处理有一组变量，处理结束后取出芽多污染少的变量作为下次处理的必要条件。通过不同的消毒结果，分析出最佳的番茄消毒措施。

[关键词]番茄；种子；次氯酸钠；消毒

植物组织培养是20世纪初开始，以植物生物学为基础发展起来的一项植物繁殖技术。番茄组织培养技术也已用于遗传进化，因而获得无菌苗是番茄组培的关键。污染是组织培养过程中首先遇到的问题，且难以控制，不能把污染降低到可以接受的范围，也就意味着这项工艺不能进行下去。因此，控制污染成了组织培养中的首要技术。对番茄进行组织培养，首先应该得到无菌苗。那么第一步就要对番茄种子进行消毒处理。番茄种子扁平，灰黄色带绒毛。所以根据番茄种子的特点及导师的指导和两种消毒液的特点：次氯酸钠对种子无毒害而升汞抑制IAA对细胞的影响和幼苗的生长，从而大大降低种子的活力。

一、材料与方法

1. 供试材料

试验选用两个品种，即抗寒番茄、五彩番茄。

2. 试验仪器与药品

高压蒸汽灭菌锅，烘箱，光照培养箱，镊子，小烧杯，玻璃棒，量筒，超净工作台，酒精灯，精密试纸，牛皮纸，标签笔，1N NaOH，1N HCl，次氯酸钠原液，95%医用酒精，蒸馏水等。

3.试验方法

（1）培养基。以1/2MS为基本培养基，不加任何其它激素。1/2MS培养基共1000ml/次。调pH值为5.8，每瓶分装约25ml，共40瓶，并在121℃和1个大气压下灭菌15分钟。

（2）接种前的准备工作。

①配制培养基。称取琼脂10g，蔗糖30g，蔗糖放入少许蒸馏水溶解，用量筒量取MSA100ml， MSB 10ml ，铁盐10ml，有机成份10ml。混匀备用。将琼脂放入电磁炉中加水溶解，彻底溶解后加入蔗糖和母液再加入蒸馏水定容到1000ml，同时不断搅拌使混合均匀一般要求pH5.8-6.0。过酸或过碱用0.1N NaOH或0.1N HCl调节。

②仪器灭菌。将小烧杯，量筒，镊子，玻璃棒等用牛皮纸包好在1260C下进行高压灭菌30min.待用。

（3）种子消毒。选取两个番茄品种，即抗寒番茄、五彩番茄。

对抗寒番茄和五彩番茄进行以下四组处理：

第一组：

处理Ⅰ：蒸馏水浸种10h（加入百菌清），在超净工作台上用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅱ：蒸馏水浸种12h（加入百菌清），在超净工作台上用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅲ：蒸馏水浸种14h（加入百菌清），在超净工作台上用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅳ：蒸馏水浸种16h（加入百菌清），在超净工作台上用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

第二组：

处理Ⅰ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸0.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅱ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h五彩番茄14h；（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸1min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅲ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅳ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸2min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

第三组：

处理Ⅰ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸5min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅱ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14 h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸7min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅲ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸9min（加入洗洁精），无菌水洗6次

处理Ⅳ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸11min（加入洗洁精），无菌水洗6次

第四组：

处理Ⅰ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：5浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅱ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：6浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗洁精），无菌水洗6次。

处理Ⅲ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液1：7浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗洁精），无菌水洗6次

处理Ⅳ：蒸馏水浸种抗寒番茄12h；五彩番茄14h（加入百菌清），在超净工作台上用70%酒精浸泡抗寒番茄1min；五彩番茄1.5min，无菌水冲洗1次，用安替福民液原液浸泡抗寒番茄5min；五彩番茄9min（加入洗洁精），无菌水洗6次以上每组四个处理，每个处理接种5瓶，每瓶接10粒种子。

（4）培养条件。接种后将瓶置于光照培养箱中，16h光照/8h黑暗，温度控制在250C±20C，培养9天。

二、结果分析

抗寒番茄浸泡12小时，70%酒精消毒1分钟，无菌水冲洗1次，再用安替福民原液消毒5分钟，无菌水冲洗6次，消毒效果最好。

五彩番茄浸泡14小时，70%酒精消毒1.5分钟，无菌水冲洗1次，安替福民原液消毒9分钟，无菌水冲洗6次，消毒效果最好。

三、结语

在当今快速高效发展的社会中，各个领域都在寻求发展的快车道，那么植物组织培养也早已成为生命科学领域不可忽视的一部分。通过对不同品种番茄进行种子消毒培养，从而得到番茄种子对于各种消毒措施发芽的影响，为进一步发展番茄的无菌种植提供了实验依据。

参考文献：

[1] 罗素兰，田嘉王君，长孙东亭.番茄高效再生体系的建立[J].海南大学学报自然科学版，2002（4）：315-316.

[2] 徐宏英.三种消毒剂对番茄种子萌发及幼苗生长的影响[J].河南科学，1999，17（S1）：113-115.

[3] 王首峰，梁海曼.升汞和次氯酸钠对黄瓜种子萌发及幼苗生长的影响[J].植物生理学通讯，1996（02）：117-118.