内标—标准曲线气相色谱法测定血液中的乙醇含量*

陈迪勇，宋光林，李荣华，李占彬

(贵州省分析测试研究院，贵州　贵阳　550002)



内标
—标准曲线气相色谱法测定血液中的乙醇含量*

陈迪勇，宋光林，李荣华，李占彬▲

(贵州省分析测试研究院，贵州贵阳550002)

摘要：目的：建立内标—标准曲线法定量测定血液中的乙醇含量的气相色谱方法，并与SF/Z JD0107001-2010进行比较。 方法：用移液管量取0.20 mL血样及1.00 mL 40.0 μg / mL叔丁醇内标工作液加入2.0 mL塑料离心管中，混合均匀，离心后将清液通过0.45 μm的无机滤膜过滤后装入2.0 mL进样瓶中密封，应用自动进样器进样，采用ZB-624柱分离样品中的乙醇和叔丁醇，然后采用内标—曲线法定量分析血液中的乙醇含量。结果：内标—标准曲线法定量分析血液中的乙醇含量，乙醇的加标回收率在97.6 %～101.0 %，相对标准偏差小于2.0 %，且重现性好。结论：该法分析血液中的乙醇含量能满足检测工作要求，相较顶空进样—气相色谱法更简单，难度也更小。

关键词：内标—标准曲线法；气相色谱法；血液；乙醇

根据近年世界卫生组织交通事故调查显示，道路交通事故中大约有50 %～60 %与酒后驾车有关，酒后驾车造成了重大的人员伤亡和财产损失。

随着国家对酒驾打击力度的加大，酒驾的司法鉴定工作越来越重要。怎样能够更简单，快捷，准确的测定血液中乙醇含量是司法鉴定工作者们所面临的问题。本试验采用内标-标准曲线气相色谱法，通过对待检血样的检测和色谱条件的摸索，从而实现检测方法的改进[1，2]。

1试验部分

1.1仪器和试剂

气相色谱仪：Agilent 7890A气相色谱仪及工作站，FID检测器；

叔丁醇：分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；

无水乙醇：色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司。

1.2色谱条件

色谱柱为phenomenex的ZB-624毛细柱(60 m×0.25 mm×1.40 μm) 。柱温50 ℃保持10 min，以10 ℃/min的升温速率升至200 ℃，共25 min；汽化室温度200 ℃，检测器温度250 ℃；载气(氮气)流速：1.2 mL/min；进样方式：自动进样器，分流比5∶1 (可根据实际情况调整分流比以改变检出限)，进样量1μL 。

1.3试验步骤

1.3.1样品制备

用移液管量取0.20 mL血样及1.00 mL40.0 g/mL叔丁醇内标工作液加入2.0 mL塑料离心管中，混合均匀，离心后将清液通过0.45 μm的无机滤膜过滤后装入2.0 mL进样瓶中密封。用同样方法制备平行样，供上机测试。

1.3.2乙醇含量的测定

按1.3.1步骤制备样品，按1.2条件测定样品中乙醇的含量。

1.3.3试验方法可行性[3]

用移液管量取0.20 mL 0.20 mg/mL的乙醇水溶液及1.00 mL 40.0 g/mL叔丁醇内标工作液加入2.0 mL塑料离心管中，混合均匀，离心后将清液通过0.45 μm的无机滤膜过滤后装入2.0 mL进样瓶中密封，上机测试，其对比色谱图见图1。从图1可知，乙醇、叔丁醇的出峰时间分别为7.673、10.377，试验条件能达到分离效果，试验方法可行。

1.3.4方法的重现性

在1.2的色谱条件下，对1.3.3制备的样品做

图1　乙醇、叔丁醇的对比色谱图

重现性试验，其乙醇的气相色谱保留时间(t1=7.669 min、t2=7.664 min、t3=7.676 min)的相对偏差为0.078，叔丁醇的气相色谱保留时间(t1=10.372 min、t2=10.372 min、t3=10.386 min)的相对偏差为0.078，此方法的重现性较好，见图2。

图2　血液中的乙醇重现性对比色谱图

1.3.5计算方法的确定[3]

(a)内标—标准曲线的建立

将配制好的乙醇对照品溶液分别进样，以乙醇和叔丁醇的峰面积比为纵坐标，乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，见图3。

表1　乙醇对照品溶液浓度与峰面积比对照表

图3　血液中乙醇浓度标准曲线

(b)样品中乙醇含量的计算

将1.3.1中制备的血样在1.2的色谱条件下上机测试，测试结果按图3中的工作曲线方程计算样品中的乙醇浓度。

(c)平行试验

按以上步骤对同一试样进行平行试验，结果见图4。

图4　平行试验对照图

按图3中的工作曲线方程计算样品中的乙醇浓度，结果见表2。

表2　平行试验结果

按下式计算相对相差：

式中：

C1、C2为样品平行定量测定的结果；

C为样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。

由上式计算得到血样2的相对相差为1.21 %，符合标准中没有凝血块的样相对相差不超过5 %的要求。

1.3.6回收率试验

分别向血样2中加入一定量的10.0 mg/mL乙醇的水溶液，混合均匀后按1.3.1的方法制备血样，在1.2的色谱条件下上机测试，按图3中的工作曲线方程计算样品中的乙醇浓度，然后计算加标回收率，结果见表3。

表3　回收率试验结果

2讨论

实验结果表明，用内标—标准曲线法定量测定血液中的乙醇含量，乙醇的加标回收率在97.6 %～101.0 %，平均回收率在99.0 %，相对标准偏差为1.80 %。本方法采用样品直接加内标物进样检测，测定方法简便，快捷，不受样品中乙醇浓度的影响，且能避免系统误差引起的干扰，测定结果准确，方法重现性好，该法分析血样中的乙醇含量能满足司法检测工作要求。

参考文献【REFERENCES】

[1]周华芳，胡勇，王凤，滕军.直接进样毛细管柱气相色谱法快速测定全血中乙醇含量[D].中国科学院上海冶金研究所，材料物理与化学(专业)博士论文， 2000.

ZHOUHF，HU，WANGF，TENJ.Rapiddeterminationofethanolinwholebloodbycapillarycolumngaschromatography[D].ShanghaiInstituteofmetallurgy，ChineseAcademyofSciences，MaterialphysicsandChemistry(Professional)DoctoralDissertation2000.

[2]李周儒，于常州，蔡红星.顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量的探索[J].徐州医学院学报，2008，28(11)：710-712.

LIZR，YUCZ，CAIHX.DeterminationofalcoholinbloodbyheadspacegasChromatograph[J].JournalofXuzhouMedicalCollege，2008，28(11)：710-712.

[3]中国国家标准化管理委员会.车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量阈值与检验：GB/T19522-2010[S].中国标准化研究院，2011.

StandardizationAdministrationofthePeople’sRepublicofChina.Thresholdandtestofbloodandbreathalcoholcontentofvehicledrivers：GB/T19522-2010[S].ChinaStandardizationResearchInstitute，2011.

[4]司法鉴定管理局.血液中乙醇的测定顶空气相色谱法：SF/ZJD0107001-2010[S].司法鉴定科学技术研究院，2010.

Judicialauthenticationadministration.DeterminationofethanolinbloodbyHeadspaceGasChromatography：SF/ZJD0107001-2010[S].Instituteofforensicscienceandtechnology，2010.

Internal standard-standard curve of gaschromatographic method for the determination of blood alcohol content

CHEN Diyong，SONG Guanglin，LI Ronghua，LI Zhanbin

(Guizhouacademyoftestingandanalysis，Guiyang550002，China)

Abstract：The objective is to establish the internal standard quantitative method and standard curve for determination of alcohol content in blood by gas chromatography method，and compared with SF/Z JD0107001-2010.We use pipe to measure with 2.0 mL plastic centrifuge tube，0.20 mL blood and 1.00 mL 40.0 g/mL TERT butanol internal standard working solution mixed.The supernatant after centrifugation by inorganic membrane filtration 0.45 μm is taken into 2.0 mL sample bottle seal，the application of automatic sample，ZB-624 column separation ethanol and TERT butyl alcohol in the sample.And then the internal standard curve method is used for the quantitative analysis of alcohol content in blood.Results show that by the internal standard quantitative method and standard curve analysis of alcohol content in blood，after the recovery of ethanol at the rate of 97.6 % ～ 101 %，the relative standard deviation is less than 2 %，and has good repeatability. Conclusion：Determination of ethanol content in the blood of the method can meet the detection requirement，by headspace gas chromatography method is more simple with less difficulty.

Keywords：internal standard curve；gas chromatography；blood；alcohol

通讯作者：李占彬(1981-)，男，助理研究员。研究方向：化学分析。

作者简介：陈迪勇(1976-)，男，助理工程师 学士，就职于贵州省分析测试研究院，从事环境及职业卫生检测工作。

基金项目：国家国际科技合作专项资助(项目编号是2011DFB41640)。

收稿日期：2015-06-17；修回日期：2015-10-08

中图分类号：DF 795.1

文献标识码：A

文章编号：1003-6563(2016)01-0081-04