桦剥管菌产甘露聚糖酶酶学性质研究

杨立霞 李艳 王明莹 刘琼

【摘要】本文测定了桦剥管菌（Piptoporus betulinus）在白桦木屑培养基中产甘露聚糖酶粗酶的部分酶学性质。结果显示甘露聚糖酶最适反应温度为50℃，最适反应pH值为6.0。

【关键词】桦剥管菌；甘露聚糖酶；酶学性质

本文研究了桦剥管菌分泌甘露聚糖酶的部分酶学性质，希望能为木材腐朽菌降解半纤维素的机制研究提供有用数据。

1.材料与方法

1.1材料

桦剥管菌（P. betulinus），为非褶菌目多孔菌科剥管菌属。

1.2主要试剂

甘露聚糖、D-甘露糖、3，5-二硝基水杨酸（DNS）。

1.3实验方法

（1）D-甘露糖标准曲线的绘制。pH 5.0 的NaAC-HAC緩冲液中，用紫外分光光度计在波长540nm处，绘制标准曲线。

（2）粗酶液酶活测量方法。在无菌操作条件下，将木屑培养基中桦剥管菌菌丝接种到PDA培养基平板上，培养7-10d；在培养基上钻取2个相同大小菌饼，产酶固体培养基中，23℃培养数天，测定酶活前取出菌饼；向培养中加入5倍质量的蒸馏水，浸泡12h后过滤，滤液于4000rpm离心10min，上清液用于甘露聚糖酶酶活性测定。

（3）酶学性质测定。在pH 3.0-9.0不同缓冲液条件下，测定木聚糖酶反应最适pH。在4℃条件下，将粗酶液分别于pH 3.0-9.0不同缓冲液中放置1h和24h，测定甘露聚糖酶酶活，探究pH对酶活稳定性的影响。最适pH条件下，分别测定30℃-90℃不同反应温度时酶活，确定酶反应最适温度。将粗酶液在30℃-90℃不同温度下分别保温1h和24h，在最适pH条件下测定酶活，探究温度对酶活稳定性的影响。

2.结果与分析

2.1酶反应最适pH及pH稳定性

取白桦木屑培养第18d菌样，以6.77‰甘露聚糖为底物，测不同pH条件下甘露聚糖酶酶活，结果如图2，pH4.5-7.0之间时酶活在50%以上；最适pH为6.0，pH 8.0时相对酶活下降为40%，pH 9.0时上升到50%以上。在4℃，将粗酶液不同pH值缓冲液中放置1h和24h后，测定甘露聚糖酶残存酶活力，结果如图3，甘露聚糖酶粗酶液在放置1h后，最适pH 6.0酶稳定性较好；pH4.5-6.5之间时相对酶活保持在75%以上；放置24h后，相对酶活均低于10%，说明桦剥管菌甘露聚糖酶的pH稳定性较差。

2.2酶反应最适温度及热稳定性

取白桦木屑培养第18d菌样，以6.77‰甘露聚糖为底物，酶反应最适温度及热稳定性如图4，50℃时酶活最大值。温度继续升高酶活下降，在30～60℃之间，相对酶活性保持在50%以上，70℃时残存酶活低于20%。分别在不同温度水浴中将酶液放置1h和24h，酶稳定性结果如图5：在低于50℃的水浴保温1h后，测得相对酶活随着处理温度的升高而逐渐升高；粗酶液在高于60℃的水浴保温1h后，相对酶活随处理温度升高而降低。在低于50℃的水浴保温24h后，相对酶活性在60%以上；高于70℃时，残存酶活性渐为下降，但高30%，酶热稳定性好，宜常温保存运输。

3.结论

以6.77‰甘露聚糖为底物，桦剥管菌（P. betulinus）产甘露聚糖酶最适pH为6.0，pH稳定范围在4.5-6.5之间，最适温度为50℃，耐受温度低于70℃，酶耐热性好，可以在常温保存运输。

参考文献

[1]魏玉莲，戴玉成.木材腐朽菌在森林生态系统中的功能[J].应用生态学报，2004，10：1935-1938.

[2]张婕，赵敏. β-甘露聚糖酶的研究进展[J].黑龙江医药，2011，24（2）：248-250.