正交试验法优化麻桔止咳颗粒水提醇沉工艺

万李

（重庆医科大学附属第二医院，重庆　400010）



正交试验法优化麻桔止咳颗粒水提醇沉工艺

万李

（重庆医科大学附属第二医院，重庆400010）

摘要：目的优化麻桔止咳颗粒的水提醇沉工艺。方法采用正交试验法，以盐酸麻黄碱为指标，考察用水量、提取时间、提取次数对水提取工艺的影响；以盐酸麻黄碱保留率、固形物减少率为指标，考察药液相对密度、醇沉浓度、醇沉时间对醇沉工艺的影响。结果最佳水提取、醇沉工艺为加10倍量水，煎煮3次，第1次60 min，第2和第3次各40 min，提取液浓缩至相对密度为1.20，冷却后加入乙醇使含醇量为80%，放置24 h，除去沉淀。结论优化的水提取、醇沉工艺条件稳定可行，重复性好，适用于本制剂的工业化生产。

关键词：麻桔止咳颗粒；正交试验；盐酸麻黄碱；工艺优选

麻桔止咳颗粒为纯中药复方制剂，由麻黄、桔梗、川贝母、甘草等药材组方，具有宣肺化痰、止咳平喘功效，用于风寒咳嗽、痰喘引起的咳嗽气喘、胸闷、痰多，以及急、慢性支气管炎见上述证候者。本研究中采用L9（34）正交试验设计，以盐酸麻黄碱含量和固形物减少率为测评指标，优化麻桔止咳颗粒的水提醇沉工艺，旨在为该制剂的规范化生产和临床疗效提供参考。

1　仪器与试药

高效液相色谱仪（日本岛津10A）；LC-10ATVP输液泵（双泵）；SPD-10AVP紫外检测器。

1.2试药

盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为171241-201007）；麻黄Ephedra equiselina Bge.，桔梗Platycodon grandiflorun（Jacq.）A.DC.，川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don，甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.为市售品，经重庆市中药研究院肖铭玉副研究员鉴定，均符合2010年版《中国药典（一部）》项下相关规定。乙腈、磷酸为色谱纯；水为重蒸水，其余均为分析纯。

2　方法与结果

2.1盐酸麻黄碱含量测定

2.1.1色谱条件

色谱柱：Hypersil-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺，3∶97）；流速：1 mL/min；柱温：30℃；检测波长：210 nm。

2.1.2溶液制备

取干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品5.25 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，甲醇定容，精密量取10 mL，转移至25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.042 g/L盐酸麻黄碱对照品溶液。

X射线径向衍射数据用Singh,Singh[14]和Balasingh[15]提出的晶格应变理论进行分析.根据该理论，测得的dm(hkl)是Ψ角(金刚石对顶砧加压方向和hkl衍射面法向的夹角)的函数，可以表示为：

取正交试验项下的提取液，浓缩至200 mL，从中精密量取5 mL提取液，加水10 mL及浓氨试液0.5 mL，用乙醚提取4次（30，30，20，20 mL），合并乙醚液，加盐酸乙醇溶液（1→20）2 mL，混匀，低温回收溶剂至干，残渣加乙醇10 mL使溶解，转移至50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，摇匀，过微孔滤膜（0.45 μm），离心，得供试品溶液。

2.1.3方法学考察

专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，依法测定。色谱图见图1。

线性关系考察：分别精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液2，4，8，16，20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得盐酸麻黄碱回归方程Y=3 614.4 X-7.836，r=0.999 9（n=5）。结果表明，盐酸麻黄碱进样量在0.084～0.84 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一盐酸麻黄碱对照品溶液10 μL，重复进样6次，在上述色谱条件下测定。结果峰面积的RSD为0.70%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，4，8，14 h时进样。结果盐酸麻黄碱峰面积值的RSD为1.13%（n=5），表明供试品溶液在14 h内稳定。

重复性试验：取同一批样品适量，依法制备6份供试品溶液，照上述色谱条件测定，结果峰面积的RSD为1.32%（n=6），表明方法重复性较好。

加样回收试验：精密称取同一批样品6份，分别加入对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，照上述色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表1。

图1　高效液相色谱图

表1　盐酸麻黄碱加样回收试验结果（n=6）

2.2水提取工艺优化

正交试验：照处方比例1/10称取药材，以提取液中的盐酸麻黄碱含量为考察指标，采用L9（34）正交试验进行试验。因素水平见表2，试验结果见表3。可见，各因素对提取效果均有影响，影响盐酸麻黄碱提取因素中C > A >B，最佳组合为A3B3C2。从处方全局及临床应用角度考虑，拟采用加10倍量水，煎煮3次，第1次60 min，第2和第3次各40 min。

表2　水提取工艺正交试验因素水平表

表3　麻桔止咳颗粒水提取工艺正交试验结果

验证试验：按处方比例称取药材，分别采用最佳工艺条件和拟采用工艺条件提取，照2.1项下色谱条件测定盐酸麻黄碱含量。结果见表4。可见，在麻桔止咳颗粒选定提取工艺条件下，样品中盐酸麻黄碱含量相近，表明选定的工艺条件稳定、可行。

2.3醇沉工艺优化

正交试验：按处方比例投料，照选定的水提取条件，合并滤液，浓缩至一定相对密度后按表5试验，醇沉后过滤，浓缩，干燥，得醇沉干膏。以因素E（药液相对密度＜60℃>）、因素F（醇沉浓度＜%>）、因素G（醇沉后放置时间＜h >）为考察因素，进行L9（34）正交试验，并以盐酸麻黄碱保留率和固形物减少率为评价指标进行综合评分，筛选出最佳工艺。结果见表6。由直观分析可知，影响醇沉效果的因素顺序为G > E > F，以E3F3G3组合最佳。因素E和F对醇沉效果基本无影响。从节约成本考虑，故确定醇沉方案为E3F1G3：药液浓缩至相对密度为1.20（60℃），放冷后加入一定量的乙醇使药液含醇量为80%，放置24 h，滤过，即得。

表4　水提取正交验证盐酸麻黄碱含量测定结果（%）

表5　醇沉工艺正交试验因素水平

表6　醇沉工艺正交试验结果

验证试验：取药液相对密度为1.20的药液3份，分别加入一定量乙醇，使含醇量为80%进行醇沉，醇沉时边搅拌，边缓慢加入乙醇，以避免药液中局部乙醇浓度过高造成有效成分被沉淀物包裹所造成的损失。静置24 h后，过滤。分别测定麻黄碱的保留率，并测定固形物重量计算固形物减少率。结果见表7。可见，醇沉工艺验证试验结果与正交试验筛选结果基本一致，表明该分离纯化工艺条件稳定可行，重复性好。

表7　醇沉工艺试验验证结果（%）

3　讨论

3.1色谱柱的选择［1-2］

试验中比较了Apollo，Hypersil，Capcell PAK，Dimasil，Agilent等不同品牌色谱柱，按拟订含量测定方法操作。在使用不同色谱柱的情况下，结果均能较好地将盐酸麻黄碱与相邻色谱峰成分分离。综合考虑，选用Hypersil-C18色谱柱，在选用的液相色谱条件下，理论板数以盐酸麻黄碱峰计不得低于5 000。

3.2流动相的选择［3-6］

考察了5种流动相系统：1）乙腈-含0.2%三乙胺的0.02 moL/L磷酸二氢钾溶液（3∶97），用磷酸调节pH至2.7；2）甲醇-磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH 为2.5，6∶94）；3）乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺，3∶97）；4）乙腈-含0.3%三乙胺的0.02 moL/L磷酸二氢钾溶液（5∶95），用磷酸调节pH至3.0；5）乙腈-0.1%磷酸（3∶97）。结果流动相1）和4）的盐酸麻黄碱与相邻色谱峰分离度不好；流动相2）和5）色谱条件下保留时间长，故未采用；流动相3）色谱条件下出峰时间快，分离度好，故选择其作为流动相。

3.3提取方法的选择

麻桔止咳颗粒药味多，由麻黄、桔梗、贝母、甘草等药材配伍而成，组成复杂，固形物收膏率较高，要制成服用方便的颗粒制剂，须进行提取、经纯化减少固形物得量［7-11］。为便于服用，保持原方疗效，对此方采用水提取，经不同浓度含醇量进行醇沉工艺试验。通过L9（34）正交试验法优化水提醇沉工艺，确定了该复方制剂制备工艺中水提醇沉的最佳工艺条件，验证试验结果表明，该工艺稳定可行。

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Process Optimization on Water Extract-Alcohol Extraction of Majiezhike Granules

Wan Li
（Chongqing Medical University Second Affiliated Hospital，Chongqing，China 400010）

Abstract：Objective To optimize water extract-alcohol extraction method of Majiezhike Granules.Methods The content of ephedrine hydrochloride was examined by orthogonal design，and the influence of the extraction times，extraction duration and consumption of water on the extraction process by water were observed；the retention rate of ephedrine hydrochloride and decrement of solid mater were examined，and the influence of relative density of medication，concentration of alcohol and alcohol extraction duration on the extraction procedure by alcohol were observed.Results The best optimizations of water extract-alcohol extraction were the weight of water was 10 times，boiled 3 times，the first time 60 min，the second and the last time 40 min；then the extract was concentrated to a relative density of 1.20，after it was cooled，added alcohol to make the alcohol content being 80%；placed for 24 h，removed precipitate.Conclusion The optimized method of water extract-alcohol extraction is stable，feasible，reproducible and is suitable for industrial production.

Key words：Majiezhike Granules；orthogonal experiment；ephedrine hydrochloride；process optimization

中图分类号：TQ461；R284.2

文献标识码：A

文章编号：1006-4931（2016）07-0008-03

作者简介：万李，女，大学本科，主要从事医院药学与药事管理，（电子信箱）2120317719@qq.com。

收稿日期：（2015-08-17；修回日期：2015-10-17）