sTWEAK、TNF-α和IL-10在卵巢上皮性癌患者血清中的表达及其意义

黄毓丽，邱丽华



sTWEAK、TNF-α和IL-10在卵巢上皮性癌患者血清中的表达及其意义

黄毓丽，邱丽华

【摘要】目的：检测上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）患者外周血可溶性肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（soluble tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，sTWEAK）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10 （IL-10）的表达水平，并分析其临床意义。方法：选取2010年1月—2014年2月在上海交通大学附属仁济医院住院手术的EOC患者和良性上皮性卵巢肿瘤患者共43例，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测外周血血清中sTWEAK、TNF-α和IL-10的表达水平。结果：①与良性上皮性卵巢肿瘤组相比，EOC组的sTWEAK的表达水平升高（P＜0.05），TNF-α的表达水平升高（P＜0.01），IL-10的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。②sTWEAK、TNF-α和IL-10在EOC患者血清中的表达水平在不同的临床分期、病理类型、组织学分级以及腹水有无肿瘤细胞者中差异均无统计学意义（P＞0.05）。③2组患者中sTWEAK的表达与TNF-α呈正相关（rs=0.505，P=0.001），而sTWEAK与IL-10无相关性（rs=0.154，P= 0.325）。结论：sTWEAK、TNF-α与EOC的发生密切相关，sTWEAK高表达者血清TNF-α表达也高。

【关键词】卵巢肿瘤；肿瘤坏死因子α；白细胞介素10；可溶性肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂；酶联免疫吸附测定

作者单位：202150上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院妇产科（黄毓丽）；上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科，上海市妇科肿瘤重点实验室（邱丽华）

（J Int Obstet Gynecol，2016,43：84-86）

肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂（tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，TWEAK）在肿瘤的发生、发展中发挥重要的生物学效应[1]。已知循环血浆中存在TWEAK蛋白水解产生的可溶性TWEAK（sTWEAK）[2]。以往的研究发现外周血血清中sTWEAK的表达与上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）的发生密切相关，且有可能成为判断卵巢肿瘤良恶性的新型血清学标记[3-4]。为了进一步探讨EOC患者外周血sTWEAK表达与其免疫功能的关系，本课题拟研究EOC患者外周血血清中sTWEAK、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）的表达及其相关性。

1　对象与方法

1.1研究对象选取2010年1月—2014年2月上海交通大学医学院附属仁济医院收治的23例良性上皮性卵巢肿瘤和20例EOC患者，2组患者的平均年龄分别为（48.57±17.51）岁和（57.80±12.51）岁，差异无统计学意义（t=2.008，P=0.052）。所有患者均经手术病理证实，术前均未经放、化疗治疗。EOC病理类型：浆液性囊腺癌11例，黏液性囊腺癌3例，透明细胞癌3例，子宫内膜样腺癌3例；病理分级按2003年世界卫生组织（WHO）使用的卵巢癌组织学类型分级标准：G1～G2级8例，G3级12例；临床分期根据2010年国际妇产科联盟（FIGO）分期标准：Ⅰ～Ⅱ期6例，Ⅲ～Ⅳ期14例。所有患者临床病历资料完整，试验获患者本人知情同意并经医院伦理委员会批准。

1.2方法研究对象空腹抽取肘正中静脉血2 mL，经高速离心分离后取血清置于-20℃冻存备用。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血sTWEAK、TNF-α和IL-10的表达水平。ELISA试剂盒购自上海优宁维生物科技有限公司，操作方法参照说明书。

1.3统计学方法采用SPSS 13.0统计软件对数据进行统计分析。定量资料经检验不符合正态分布，采用中位数和四分位数[M（P25，P75）]表示，2组比较采用Mann-Whitney U检验，多组比较采用Kruskal-Wallis H检验，相关性检验采用Spearman相关分析。所有检验均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.12组患者血清sTWEAK、TNF-α和IL-10表达水平EOC组的sTWEAK和TNF-α表达水平均高于良性上皮性卵巢肿瘤组，差异有统计学意义（均P＜0.05）；而2组患者IL-10的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。对所有患者sTWEAK、TNF-α和IL-10的表达水平进行相关性分析发现，sTWEAK的表达与TNF-α呈正相关（rs=0.505，P= 0.001），而与IL-10水平无相关性（rs=0.154，P= 0.325）。

表12　组患者血清sTWEAK、TNF-α和IL-10的表达水平　M（P25，P75）

2.2EOC组患者临床资料分析将EOC患者分别按照临床分期、组织学分级和病理类型分组，各亚组之间sTWEAK、TNF-α和IL-10表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）。20例EOC患者中有16例患者有腹水，其腹水中肿瘤细胞阳性者的sTWEAK、TNF-α和IL-10表达水平与肿瘤细胞阴性者比较，差异也无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2　EOC组患者临床资料分析M（P25，P75）

3　讨论

TWEAK广泛表达在胰腺、肠、心脏、肺、脑、卵巢、血管系统、骨骼、肌肉、肝、肾[2]。其主要与其受体——成纤维细胞生长因子诱导14（fibroblast growth factor-inducible 14，Fn14）结合，介导多种生物学作用，如生成促炎性细胞因子、细胞增殖、存活、迁移和凋亡等。有研究发现，促炎性细胞因子和抗炎性细胞因子可能都具有调节肿瘤生长以及机体抗肿瘤免疫的作用。其中，TNF-α主要由活化的单核巨噬细胞产生，具有直接杀伤肿瘤细胞，促进巨噬细胞、自然杀伤（NK）细胞、细胞毒性T淋巴细胞等免疫活性细胞的细胞毒效应，调节细胞增殖和分化等功能。Johansson等[5]发现小剂量TNF-α具有促进血管重铸和抗肿瘤免疫应答的作用，可作为主动免疫治疗的有效佐剂。IL-10是一种多功能负性调节因子，主要由Th2细胞、活化的B细胞、单核细胞、巨噬细胞产生，其参与免疫细胞、炎症细胞、肿瘤细胞等多种细胞的生物调节，在自身免疫性疾病、严重感染性疾病、肿瘤及移植免疫等多种疾病中发挥重要作用。Zhou等[6]研究发现，卵巢癌患者的卵巢组织、血清以及腹水中的IL-10均显著高于良性卵巢肿瘤患者及正常卵巢患者，提示IL-10的表达与卵巢癌的发生和发展有关。另有研究发现IL-10具有免疫刺激功能，可能发挥促癌作用，亦有可能发挥抑癌作用[7]。Cândido等[8]发现EOC患者卵巢组织和外周血中TNF-α、IL-4、IL-6和IL-10的表达水平均高于卵巢正常的其他妇科疾病患者，其中Ⅲ/Ⅳ期EOC患者的IL-10 和TNF-α表达水平较高，且伴有较高水平的CA125。而且，EOC患者中未行满意肿瘤细胞减灭术的患者和低分化肿瘤患者的IL-6和IL-10表达水平较高，且总生存率较低。本研究发现，与良性卵巢上皮性肿瘤患者相比，EOC患者外周血血清IL-10的表达水平差异无统计学意义，而TNF-α的表达显著增加，且这两种细胞因子的表达水平在EOC患者不同的病理类型、临床分期、组织学分级以及腹水中有无肿瘤细胞者差异均无统计学意义，提示外周血TNF-α水平与EOC的发生密切相关，但其不能反映EOC的肿瘤进展程度，而IL-10则与EOC的发生和肿瘤进展程度无关。本研究结果与上述研究结果不尽相同，这可能与细胞因子的表达个体差异大及本研究病例数少有关。

TWEAK具有调节机体免疫功能的作用，人非特异性免疫细胞——NK细胞、树突细胞（DC）和巨噬细胞均表达TWEAK及其受体Fn14，而特异性免疫细胞——T细胞和B细胞基本不表达TWEAK。TWEAK可通过抑制NK细胞和巨噬细胞产生γ干扰素（IFN-γ）和IL-12，促进NK细胞发生活化诱导的细胞死亡（AICD）来抑制非特异性免疫应答[9]。Kaduka等[10]发现，腹腔及皮下接种TWEAK敏感的Fn14受体阳性肿瘤细胞的小鼠，TWEAK在其体内可介导巨噬细胞的抗肿瘤效应。以往的研究将巨噬细胞与EOC细胞HO-8910PM共培养，发现TWEAK可刺激巨噬细胞分泌TNF-α，TWEAK和TNF-α具有协同抑制EOC细胞的侵袭能力的作用，提示TWEAK介导的巨噬细胞抗肿瘤作用可能与其调节TNF-α的表达有关[3]。Park等[11]研究发现与正常外耳道皮肤相比，中耳胆脂瘤组织中TWEAK和TNF-α的蛋白表达水平均显著增加，且TWEAK与TNF-α的表达水平密切相关，提示在中耳胆脂瘤中TWEAK具有调节TNF-α表达的作用。本研究发现EOC患者外周血sTWEAK及TNF-α在EOC中的表达水平较良性上皮性卵巢肿瘤显著升高，且sTWEAK的表达与TNF-α的表达呈正相关，提示在EOC患者中sTWEAK同样具有调节TNF-α表达的作用。鉴于本研究发现sTWEAK和TNF-α的表达与EOC进展无关，sTWEAK调节TNF-α表达是否进一步与EOC患者预后有关，尚待对随访患者的5年生存率和无瘤生存期加以探讨阐明。

参考文献

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[4]Dai L,Gu L,Ding C,et al.TWEAK promotes ovarian cancer cell metastasis via NF-kappaB pathway activation and VEGF expression [J].Cancer Lett，2009，283（2）：159-167.

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[6]Zhou J，Ye F，Chen H，et al.The expression of interleukin-10 in patients with primary ovarian epithelial carcinoma and in ovarian carcinoma cell lines[J].J Int Med Res，2007，35（3）：290-300.

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[8]CândidoEB，SilvaLM，CarvalhoAT，etal.Immuneresponse evaluation through determination of type 1，type 2，and type 17 patterns in patients with epithelial ovarian cancer[J].Reprod Sci，2013，20（7）：828-837.

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[10]Kaduka Y，Takeda K，Nakayama M，et al.TWEAK mediates antitumor effect of tumor-infiltrating macrophage[J].Biochem Biophys Res Commun，2005，331（2）：384-390.

[11]Park M，Lee B，Lee J.Expression of tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis in human middle ear cholesteatoma[J].ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec，2013，75（4）：221-227.

[本文编辑王昕]

Serum sTWEAK，TNF-α and IL-10 Expression and Their Clinical Significance in Epithelial Ovarian Cancer Patients

HUANG Yu-li，QIU Li-hua.Department of Obstetrics and Gynecology，Xinhua Hospital Chongming Branch，School of Medicine，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 202150，China（HUANG Yu-li）；Department of Obstetrics and Gynecology，Shanghai Key Laboratory of Gynecologic Oncology，Renji Hospital，School of Medicine，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200127，China （QIU Li-hua）
Corresponding author：QIU Li-hua，E-mail：Lilyqiulh@126.com

【Abstract】Objective：To explore the expression level and clinical implications of serum sTWEAK，TNF-α and IL-10 in epithelial ovarian cancer（EOC）patients.Methods：Totally 43 patients with EOC（EOC group）and benign epithelial ovarian tumor（BOT group）were selected from Renji Hospital，School of Medicine，Shanghai Jiao Tong University.These patients were admitted to the hospital during the period from January 2010 to February 2014.The levels of serum sTWEAK，TNF-α and IL-10 were detected by ELISA.Results：①Compared to the BOT group，the expression levels of sTWEAK（P＜0.05）and TNF-α（P＜0.01）were significantly increased in the EOC group，the elevation of IL-10 level was not significant（P＞0.05）.②The expression levels of sTWEAK，TNF-α and IL-10 in peripheral serum in EOC group were not significantly different with different clinical stages，pathological types，histological grade and ascites presence of tumor cells（P＞0.05）.③In both two groups，the expression level of sTWEAK was positively correlated with serum TNF-α（rs=0.505，P=0.001）and was no correlation with serum IL-10（rs=0.154，P=0.325）.Conclusions：Serum sTWEAK and TNF-α expression levels were closely correlated with the pathogenesis of EOC.In patients with high sTWEAK expression，the expression of TNF-α was dominant.

【Keywords】Ovarian neoplasms；Tumor necrosis factor-alpha；Interleukin-10；sTWEAK；Enzyme-linked immunosorbent assay

基金项目：国家自然科学基金（81272884）

通信作者：邱丽华，E-mail：Lilyqiulh@126.com

收稿日期：（2015-05-13）