p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

王　璐，杨文秀

(1.贵阳医学院附属医院病理科，贵阳 550004；2.贵州省安顺市人民医院CT室　561000)



论著·临床研究

p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

王璐1，2，杨文秀1△

(1.贵阳医学院附属医院病理科，贵阳 550004；2.贵州省安顺市人民医院CT室561000)

[摘要]目的探讨p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌患者中的表达情况及临床意义。方法免疫组织化学法检测45例甲状腺乳头状癌和45例结节性甲状腺肿组织标本p53、C-myc和CerbB-2表达情况，分析其与患者临床病理特征的关系。结果p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率均明显高于结节性甲状腺肿(P<0.01)。p53和C-myc在甲状腺乳头状癌的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)；CerbB-2在甲状腺乳头状癌的表达与肿瘤大小、局部浸润、TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(均P<0.05)。p53、C-myc和CerbB-2阳性表达均是甲状腺乳头状癌患者淋巴结转移的独立危险因素。结论p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中呈高表达，并与淋巴结转移有关，对三者进行检测可成为甲状腺乳头状癌早期诊断的评价指标。

[关键词]甲状腺肿瘤；腺癌,乳头状；p53；C-myc；CerbB-2；临床病理特征；诊断,鉴别

甲状腺乳头状癌是一种常见的甲状腺恶性肿瘤，近年来在我国发病率呈逐年上升趋势。虽然甲状腺乳头状癌预后较好，但是依旧有10%的患者直接死于甲状腺癌和22%～30%的患者死于复发性甲状腺癌[1]。已有报道年龄、性别、肿瘤大小、包膜侵犯、分化程度和淋巴结转移是影响甲状腺乳头状癌预后的重要因素[1]。但是甲状腺癌的诊断和预后分子标记物依旧存在较大争议，因此准确诊断甲状腺乳头癌和预测甲状腺乳头癌预后对指导患者的治疗有重要作用。p53基因是一种常见的肿瘤抑制基因，其编码的p53蛋白在细胞生长、调控中起到重要作用；C-myc蛋白可以促进甲状腺癌细胞分裂和增生；CerbB-2蛋白也在多种肿瘤发病中起重要作用[2-3]。目前有报道显示p53、C-myc和CerbB-2在胃癌及癌前病变同时存在高表达[4]，但是在甲状腺乳头状癌中尚未见报道。因此，本研究采用免疫组织化学法检测p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头癌中的表达情况，探讨p53、C-myc和CerbB-2能否成为甲状腺乳头癌发生发展的分子标记物，为指导甲状腺乳头状癌诊断提供理论依据。

1材料与方法

1.1组织标本采集选取2006年10月至2014年10月安顺市人民医院病理科手术切除的甲状腺乳头状癌组织45例和结节性甲状腺肿组织45例。甲状腺乳头状癌患者中男21例，女24例；年龄21～68岁，平均(42.6±13.6)岁；肿瘤直径大于或等于1.0 cm 12例、<1.0 cm 33例；依据国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准Ⅰ+Ⅱ期31例，Ⅲ+Ⅳ期14例；组织学分型典型31例、滤泡型10例、高细胞型4例；有淋巴结转移12例，无淋巴结转移33例。结节性甲状腺肿中男23例，女22例；年龄19～71岁，平均(43.1±15.2)岁。术前患者均未接受过放射治疗、化学治疗等治疗，所有标本行苏木素-伊红(HE)染色重新确诊。

1.2方法将石蜡标本包埋并制作4 μm连续病理切片，按照免疫组织化学染色说明书中的方法进行染色。DAB试剂盒和SP染色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，鼠抗人p53单克隆抗体、鼠抗人C-myc单克隆抗体和鼠抗人CerbB-2单克隆抗体购自Abcam公司。由两位病理医生进行双盲阅片，结果取平均值。免疫组织化学结果判定标准：采用半定量对p53、C-myc和CerbB-2进行分析，按阳性细胞的染色强度记分等级为0、1、2、3分；按染色阳性细胞百分比记分等级为0分(<10%细胞阳性)、1分(10%～25%细胞阳性)、2分(26%～50%细胞阳性)、3分(51%～75%细胞阳性)、4分(>75%细胞阳性)；将染色强度和染色百分比相乘得到的分数即为最后染色水平分级：0～3分定义为阴性，4～12分定义为阳性。

1.3检测指标分析甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿组织中p53、C-myc和CerbB-2表达情况；甲状腺乳头状癌患者临床病理特征年龄、性别、肿瘤大小、局部浸润、TNM分期、组织学分型、分化程度及淋巴结转移与p53、C-myc和CerbB-2表达的关系；将年龄、性别、肿瘤大小、局部浸润、组织学分型、分化程度、淋巴结转移、p53阳性表达、C-myc阳性表达和CerbB-2阳性表达纳入甲状腺乳头状癌患者淋巴结转移多因素Logistic回归分析；分别计算p53、C-myc和CerbB-2的敏感度、特异度和准确度。敏感度=真阳性/(真阳性+假阴性)，特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)，准确度=(真阳性+真阴性)/(所有阳性+所有阴性)。

2结果

2.1p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿中的表达p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为75.6%、80.0%、53.3%，明显高于在结节性甲状腺肿中的阳性表达率22.2%、44.4%、17.8%(P<0.01)，见表1。

2.2p53、C-myc和CerbB-2表达与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系在45例甲状腺乳头状癌中，p53、C-myc的表达只与患者淋巴结转移有关(P=0.019,P=0.044)，与年龄、性别、肿瘤大小、局部浸润、TNM分期、组织学分型和分化程度无关(均P>0.05)；CerbB-2的表达与肿瘤大小、局部浸润、TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关(P=0.016,P=0.008,P=0.024,P=0.090,P=0.002)，与年龄、性别和组织学分型无关(均P>0.05)。见表2。

表1　　p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿中的表达[n(%)]

表2　　p53、C-myc和CerbB-2表达与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系(n)

2.3甲状腺乳头状癌淋巴结转移与临床病理特征的关系在甲状腺乳头状癌患者中，淋巴结转移与年龄、性别、局部浸润、组织学分型和分化程度无关(均P>0.05)；与肿瘤大小、p53阳性表达、C-myc阳性表达和CerbB-2阳性表达有关(P=0.003,P=0.003,P=0.002,P=0.000)。多因素Logistic回归分析显示，影响甲状腺乳头状癌患者淋巴结转移相对危险度(OR)由大到小依次为CerbB-2阳性表达、C-myc阳性表达、p53阳性表达、肿瘤大小、分化程度、局部浸润、性别、组织学分型和年龄。见表3。

表3　　甲状腺乳头癌 淋巴结转移与临床病理特征的多因素

2.4p53、C-myc和CerbB-2诊断甲状腺乳头状癌的敏感度、特异度、准确度p53,C-myc和CerbB-2诊断甲状腺乳头状癌的敏感度分别是85.0%、87.8%、82.8%，特异度分别是73.3%、69.2%、77.8%，准确度分别是81.8%、83.3%、80.4%。三者在敏感度、特异度和准确度的数值上比较接近。见表4。

表4　　p53、C-myc和CerbB-2敏感度、特异度、

3讨论

目前，大多数甲状腺肿瘤采用组织病理学或细胞学检查能做出诊断，但是由于乳头状增生的结节难以区分良恶性，导致在甲状腺乳头癌的诊断上依旧比较困难。同时，在甲状腺乳头状癌的预后指标中，尚缺乏有效的特异分子标志物。因此本研究采用免疫组织化学法分析p53、C-myc和CerbB-2表达情况和及其临床意义。

p53基因是编码于17号染色体的重要抑癌基因，其编码的p53蛋白在参与细胞周期转换、DNA修复、细胞分化和凋亡中有着重要作用。在人类大多数肿瘤中可见p53基因突变，是恶性肿瘤中最常突变的基因之一。在甲状腺癌中，40%～62%的未分化癌和0～25%的高分化癌中存在p53基因突变[5]，突变后会使p53蛋白更易被检查。国内报道中，赵丽华等[6]研究显示p53在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为88.4%，诊断的敏感度、特异度和准确度分别为88.4%、85.1%和86.2%；王亚奇等[7]研究显示p53在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为46.9%，并与患者的年龄、性别无关；祁燕云等[8]研究显示p53在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为86.1%。国外报道中，多数研究报道显示p53在甲状腺乳头状癌中阳性表达率在11%～59%[9-10]；Morita等[11]研究显示p53在甲状腺乳头状癌的阳性表达率为47.3%，并与肿瘤大小和淋巴结转移有关；也有研究显示p53甲状腺乳头状癌的表达和临床病理特征无明显关系[9]。国内外对于将p53作为甲状腺乳头状癌诊断和预后分子标记物尚存在争议，同时国内研究中p53在甲状腺乳头状癌中阳性表达率普遍高于国外，其中原因还有待进一步研究。本研究显示p53在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为75.6%，并与患者淋巴结转移有关，诊断的敏感度、特异度和准确度分别为85.0%、73.3%、81.8%。这一结果和国内多项研究结果接近。

C-myc是一种常见的原癌基因，它可促进细胞增殖或诱导细胞凋亡，在调节细胞生长、分化或者恶性转化中发挥重要作用。C-myc在淋巴瘤、胶质细胞瘤、肝癌、肺癌、乳腺癌、甲状腺癌等都存在高表达，并参与肿瘤的发生发展，是肿瘤治疗的一个重要潜在靶点[12]。国内报道中，万婕等[13]研究显示C-myc在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为78.8%，并与患者淋巴结转移有关；胡耀杰等[14]研究显示C-myc在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为81.0%，并与患者淋巴结转移有关。国外研究显示，C-myc在甲状腺乳头状癌中存在高表达，有关C-myc和甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系尚未见报道[15]。本研究显示C-myc在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为80.0%，并与患者淋巴结转移有关，诊断的敏感度、特异度和准确度分别为87.8%、69.2%、83.3%。

CerbB-2基因又称neu或HER-2，是一种位于染色体17q21上的原癌基因，其基因表达产物是一种具有酪氨酸激酶活性的糖蛋白，在细胞信号传导中具有重要作用，主要参与细胞生长分化的调节，促进细胞分裂和增殖。目前CerbB-2在乳腺癌领域的研究已为学者熟知，其生物靶向治疗已广泛应用于临床。同时，也有研究显示CerbB-2在胃癌、骨肉瘤、甲状腺癌等肿瘤的发生发展中有重要作用[16]。对于CerbB-2作为甲状腺乳头状癌诊断和预后分子标记物尚存在争议。在国内报道中，王丽娟等[17]研究显示CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为46.6%，并与患者淋巴结转移、分化程度及临床分期有关；靳英等[18]研究显示CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为24.7%，与患者的性别、年龄及淋巴结转移均无关。Wu等[19]研究显示CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为79.5%，诊断灵敏感度和特异度分别是79.5%和 88.0%。在国外报道中，Freudenberg等[20]研究显示CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为34.4%，并与肿瘤复发有关；本研究显示CerbB-2在甲状腺乳头状癌中阳性表达率为53.3%，并与肿瘤大小、局部浸润、TNM分期、分化程度和淋巴结转移有关，诊断的敏感度、特异度和准确度分别为82.8%、77.8%、80.4%。

在本研究中，同时将p53、 C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中进行研究，结果显示均呈高表达，并都与淋巴结转移有关，同时CerbB-2阳性表达还与肿瘤大小、局部浸润、TNM分期、分化程度有关。提示三者与甲状腺乳头状癌的发生发展及淋巴结转移过程密切相关。在多因素Logistic回归分析中，显示淋巴结转移和肿瘤大小、p53阳性表达、C-myc阳性表达和CerbB-2阳性表达有关，并且p53、C-myc和CerbB-2阳性表达在多种危险因素中有更高的OR值，这进一步显示p53、C-myc和CerbB-2阳性表达与淋巴结转移的密切关系，提示p53、C-myc和CerbB-2对判断甲状腺乳头状癌预后有重要价值。同时，p53,C-myc和CerbB-2在诊断甲状腺乳头状癌中表现出较高的敏感度、特异度、准确度，提示其也可以作为鉴别诊断甲状腺乳头状癌的重要标志物。为了进一步提高诊断准确性，可以考虑联合检测3种分子标志物。

综上所述， p53、C-myc和CerbB-2在甲状腺乳头状癌中均呈高表达，并与淋巴结转移有关，三者可成为甲状腺乳头状癌诊断分子标志物，并进一步指导甲状腺乳头状癌临床治疗。

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The expression and clinical significance of p53,C-myc and CerbB-2 in thyroid papillary carcinoma

WangLu1，2,YangWenxiu1△

(1.DepartmentofCT,People′sHospitalofAnshuncity,Anshun,Guizhou561000,China;2.DepartmentofPathology,theAffiliatedHospitalofGuiyangMedicalUniversity,Guiyang,Guizhou550004,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression level and clinical significance of p53,C-myc and CerbB-2 in papillary thyroid carcinoma patients.MethodsThe expression level of p53,C-myc and CerbB-2 were detected in 45 cases of papillary thyroid carcinoma tissue specimens and 45 cases of nodular goiter tissue specimens by using immunohistochemical staining.Their correlations with clinic pathological features in papillary thyroid carcinoma were analyzed further.ResultsThe positive expression rates of p53,C-myc and CerbB-2 in the papillary thyroid carcinoma tissue specimens were significantly higher than that of the nodular goiter tissue specimens(all P<0.01).The expression of C-myc and CerbB-2 significantly correlated with lymph node metastasis(P<0.05).The expression of CerbB-2 significantly correlated with tumor size,local infiltration,TNM stage,differentiated degree and lymph node metastasis (all P<0.05).p53 positive expression,C-myc positive expression and CerbB-2 positive expression were the independent factors of cervical lymph node metastasis.Conclusionp53,C-myc and CerbB-2 were highly expressed in papillary thyroid carcinoma and correlated with cervical lymph nody metastasis.The detection of p53,C-myc and CerbB-2 might be helpful for diagnosis of papillary thyroid carcinomas.

[Key words]thyroid neoplasms;adenocarcinoma,papillary;p53;C-myc;CerbB-2;clinic pathological parameters;diagnosis,differential

作者简介：王璐(1985-)，住院医师，在读硕士，主要从事病理学诊断及影像学诊断。△通讯作者，E-mail：ypq1964@163.com。

doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.01.026

[中图分类号]R736.1

[文献标识码]A

[文章编号]1671-8348(2016)01-0077-04

(收稿日期：2015-08-08修回日期：2015-09-10)