全自动酶标仪检测严重程度不同的急性痛风患者的IL-1β、TNF-α、COX-2动态变化情况与结果分析*

苟 静张文举



全自动酶标仪检测严重程度不同的急性痛风患者的IL-1β、TNF-α、COX-2动态变化情况与结果分析*

苟 静①张文举②

苟静,女,(1983- ),硕士，主治医师。新疆医科大学第五附属医院内分泌科，从事临床诊疗工作。

目的：分析全自动酶标仪检测经镇痛药物治疗后严重程度不同的急性痛风患者的血清白细胞介素(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)及环氧合酶-2(COX-2)动态变化情况与结果。方法：前瞻性地选取90例急性痛风患者，按照痛风轻重程度的不同将其分为重度组、轻度组和缓解期组，每组30例。另选择30名体检健康者为对照组。使用镇痛药物秋水仙碱联合依托考昔对急性痛风患者进行治疗，采用ELISA法检测3组的血清IL-1β、TNF-α及COX-2水平动态变化情况。结果：重度组在急性痛风发作第1 d、3 d、7 d和10 d时的血清IL-1β水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t＝4.89，t＝5.26，t＝8.15，t＝3.74；P＜0.05)；重度组在急性痛风发作第7 d、10 d时的血清IL-1β水平与轻度组相比明显升高，差异有统计学意义(t=6.4931，t=3.3192；P＜0.05)；重度组在急性痛风发作的第1 d、3 d、7 d和10 d时的血清TNF-α水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.24，t=3.47，t=3.60，t=4.22；P＜0.05)；重度组在急性痛风发作第10 d时的血清TNF-α水平与轻度组比较明显升高，差异有统计学意义(t=3.46，P＜0.05)；重度组在急性痛风发作的第1 d、3 d及7 d时的血清COX-2水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.73，t=3.96，t＝8.27，t=4.22；P＜0.05)；重度组在急性痛风发作第7 d时的血清COX-2水平与轻度组相比明显升高，差异有统计学意义(t=6.3587，P＜0.05)；缓解期患者在急性痛风发作的10d血清IL-1β、TNF-α、COX-2的水平动态水平与对照组比较，差异无统计学意义(t=0.84，t=1.18，t=1.45；P＞0.05)。结论：使用镇痛药物对急性痛风患者进行治疗后，患者的IL-1β、TNF-α及COX-2等炎性细胞因子水平呈现动态变化，该研究为采用镇痛药物治疗急性痛风患者的疗程提供了重要的依据。

急性痛风；白细胞介素；肿瘤坏死因子；环氧合酶-2；动态变化；自动酶标仪

①新疆医科大学第五附属医院内分泌科 新疆 乌鲁木齐 830000

②兰州军区乌鲁木齐总医院骨三科 新疆 乌鲁木齐 830000

[First-author’s address] Department of Endocrinology, The Fifth Xinjiang Medical University Affiliated Hospital, Urumqi 830000, China.

痛风是由于尿酸排泄量减少或嘌呤代谢发生紊乱而导致的晶体性的关节炎，其分为慢性期、间歇期、急性期和无症状期，临床常表现为尿酸盐沉积和高尿酸血症所致的痛风石性的慢性关节炎、特征性的急性关节炎，并可能发生尿酸性的尿路结石、尿酸盐肾病等，甚至有患者发生肾功能不全、关节致残，严重危及患者的生命健康[1]。痛风性关节炎发作有多种细胞因子的参与，其中血清白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的参与最为关键[2]。痛风性关节炎急性发作时，患者血清中的IL-1β、TNF-α及环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)含量均明显升高[3]。目前，虽然治疗痛风急性期的镇痛药物秋水仙碱、依托考昔等均可降低患者血清中细胞因子IL-1β、TNF-α及COX-2水平，但其使用疗程尚不明确，为此，本研究前瞻性地对痛风患者经镇痛药物秋水仙碱联合依托考昔治疗后，使用全自动酶标仪检测其外周血中的IL-1β、TNF-α及COX-2水平，在不同严重程度痛风患者体内的动态变化进行分析探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年5月至2014年9月期间在新疆医科大学第五附属医院内分泌科进行急性痛风治疗的90例患者，按照痛风轻重程度的不同将其分为重度组、轻度组和缓解期组，每组30例；另选择30名体检健康者作为对照组。其中重度组的临床表现为躁动不安、疼痛剧烈、睡眠较差，必须采用强止痛剂进行疼痛缓解；轻度组的临床表现为疼痛比较轻微，可以正常的睡眠和生活；缓解期组为痛风缓解期。采用ELISA法检测4组的血清IL-1β、TNF-α及COX-2水平动态变化情况，重度组、轻度组及缓解期组患者在年龄、性别及病程等一般资料对比无差异，具有可比性(见表1)。本研究经过医院伦理委员会的通过。

表1 三组患者一般资料相比较(±s)

表1 三组患者一般资料相比较(±s)

缓重轻组解度度别期组组 组 例333 数000 年222 564龄～～～(岁777 463) 平444 565 均...539 年±±± 龄111 100(岁...395) 病00 1..程～55～～(1年111 02) 平566 均...812 病±±± 程111...(年451 )

1.2 纳入与排除标准

(1)纳入标准：①所有患者均符合痛风关节炎[4]的诊断标准(1997美国风湿病学会制定)；②与患者及其家属签署知情同意书；③患者的痛风关节处皮肤有暗红色；④具有痛风石；⑤X射线片诊断显示患者的关节呈现非对称肿胀；⑥患者单侧疼痛可累及附骨处疼痛。

(2)排除标准：患有肝病、心脏病、骨病、高血压、恶性肿瘤、炎症和肾功能障碍的患者。

1.3 仪器与药物

全自动酶标仪(美国Thermo FC)以及配套的ELISA试剂盒。碳酸氢钠片(北京市燕京药业有限公司)，秋水仙碱(昆明制药集团股份有限公司)，依托考昔(Merck Sharp and Dohme(Australia)Pty.Ltd)，辣根过氧化酶(CAS 9003-99-0，上海谱振生物科技有限公司)。

1.4 治疗方法

所有患者均进行常规治疗：①卧床休息，将患肢提高，要注意保暖，避免外部因素的刺激；②禁止饮酒，采取低嘌呤饮食；③每日饮水量为3 000 ml，保证尿量＞2 000 ml/d；④碱化尿液：服用碳酸氢钠片，1.0 g/次，3次/d，饭后服用。

发病期间的重度组和轻度组采用镇痛药物秋水仙碱联合依托考昔进行治疗，秋水仙碱的使用方法：初始药量为0.5 g，每日服用3次；3 d后药量为0.5 g，2 次/d；7 d后药量为0.5 g，每日服用1次，4 d后停药。依托考昔的使用方法：初始药量为120 mg，1次/d；3 d后药量为60 mg，每1次/d，7 d后停药。

1.5 血清检测方法

采用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α 及COX-2水平。使用IL-1β、TNF-α及COX-2单抗将微孔板包被，依次加入样本和标准品中的IL-1β、TNF-α及COX-2，再与通过辣根过氧化酶标记后的IL-1β、TNF-α及COX-2抗体相结合，彻底洗涤抗体复合物，最后加入显色剂。若反应孔里存在IL-1β、TNF-α及COX-2，在辣根过氧化酶的作用下会出现蓝色，并且在终止液硫酸催化下变成黄色。

1.6 评分标准

按照VRS-4评分法评分标准[5]：0分为无主诉性疼痛；1分为轻度疼痛，可以正常的生活和睡眠；2分为疼痛明显，睡眠不好，主动要求使用止痛剂；3分为躁动不安、疼痛剧烈、睡眠较差，必须采用强止痛剂进行疼痛缓解。

1.7 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行数据统计分析，计数资料以均数±标准差(±s)表示，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用x2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组急性发作不同时间血清IL-1β水平动态变化

重度组在急性痛风发作第1 d、3 d、7 d和10 d时的血清IL-1β水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=4.89，t=5.26，t=8.15，t=3.74；P ＜0.05)。轻度组在急性痛风发作第1 d、3 d、7 d和10 d时的血清IL-1β水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.43，t=4.71，t=4.44，t=2.14；P ＜0.05)，见表2。

重度组在急性痛风发作第7 d、10 d时的血清IL-1β水平与轻度组相比明显升高，差异有统计学意义(t=6.4931，t=3.3192；P＜0.05)；

2.2 各组急性发作不同时间血清TNF-α水平动态变化

重度组在急性痛风发作的第1 d、3 d、7 d和10 d时的血清TNF-α水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.24，t=3.47，t=3.60，t=4.22；P＜0.05)；轻度组在急性痛风发作的第1 d、3 d、7 d和10 d时的血清TNF-α水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.12，t=3.54，t=2.73，t=2.12；P＜0.05)，见表3。

表2 各组急性发作不同时间血清IL-1β水平动态变化(pg/ml,±s)

表2 各组急性发作不同时间血清IL-1β水平动态变化(pg/ml,±s)

对重轻组照度度别组组组 例333 数000 133 697...473 1±±± d123 031...786 43 t..值-84 93 00 P..-值00 00 142 659...484 3±±± d121 080...776 54 t..值-27 61 00 P..-值00 00 132 675...446 7±±± d1 93 0...28 7 84 t..值-14 54 00 P..-值00 00 122 640...4 148 ± 0±± d143 0...85 7 32 t..值-71 44 00 P..-值00 00

表3 各组急性发作不同时间血清TNF-α水平动态变化(ng/ml,±s)

表3 各组急性发作不同时间血清TNF-α水平动态变化(ng/ml,±s)

对重轻组照度度别组组组 例333 数000 32 289 337 5± 1 ± ± d27 834 07a a 3 3 t..值-21 42 00 P..-值00 00 54 256 343 5 3±± ± d43 894 074 33 t..值-45 74 00 P..-值00 00 4 22138451 7±± ± d2 846060 32 t..值-67 03 00 P..-值00 00 232 326 1558 0±±± d883 050 42 t..值-21 22 00 P..-值00 00

表4 各组急性发作不同时间血清COX-2水平动态变化(pg/ml,±s)

表4 各组急性发作不同时间血清COX-2水平动态变化(pg/ml,±s)

对重组照度别组组 例33 数00 17 8..35± 1± d11 2..7 8a3 t.值-7 3 0 P.-值0 0 18 8..45 3±± d11 3..7 6a3 t.值-9 6 0 P.-值0 0 1 82..57 7±± d1 2..7 2a8 t.值-2 7 0 P.-值0 0 8 9..5 5 1±± 0 d 11..3 7 4 t.值-2 2 0 P.-值0 0轻度组 30 16.8±12.4a3.63 0.00 11.6±3.5a4.36 0.00 9.4±1.8ab1.99 0.00 9.2±1.6 2.12 0.00

重度组在急性痛风发作第10 d时的血清TNF-α水平与轻度组比较明显升高，差异有统计学意义(t=3.46，P ＜0.05)；

2.3 各组急性发作不同时间血清COX-2水平动态变化

重度组在急性痛风发作的第1 d、3 d及7 d时的血清COX-2水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.73，t=3.96，t=8.27，t=4.22；P＜0.05)；轻度组在急性痛风发作的第1 d、3 d及7 d时的血清COX-2水平与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(t=3.63，t=4.36，t=1.99，t=2.12；P＜0.05)，见表4。

重度组在急性痛风发作第7 d时的血清COX-2水平与轻度组相比明显升高，差异有统计学意义(t=6.3587，P＜0.05)。

2.4 缓解期组急性发作血清IL-1β、TNF-α、COX-2的水平动态变化

缓解期组患者在急性痛风发作的第10d血清IL-1β、TNF-α及COX-2的水平与对照组比较，差异不具有统计学意义(t=0.84，t=1.18，t=1.45，P＞0.05)，见表5。

表5 缓解期组患者在急性发作的第10 d血清IL-1β、TNF-α及COX-2 水平动态变化(±s)

表5 缓解期组患者在急性发作的第10 d血清IL-1β、TNF-α及COX-2 水平动态变化(±s)

缓对组 解Pt照 值值别 期组 组例33 数00 116 (8.p I.L400 g3±..-/±84 m 1141 6 β0l.).37 (22 Tn3510 Ng59../±± F 12 m-84 87 αl08 ) 89 ( C..p O5110 g±±../ X 41 m-1156..l 2)75

3 讨论

近年来，随着科学技术的发展对痛风发病机制有了进一步的认识，痛风性关节炎的发病原因与IL-1β、TNF-α及COX-2等细胞因子相关，而酶标检测仪对IL-1β、TNF-α及COX-2等细胞因子检测的准确性至关重要。研究结果表明，IL-1β和TNF-α在急性痛风关节炎患者发病和病情进一步发展过程中起到关键性的作用，是前炎症网链中的一级细胞因子[6-9]。IL-1的激动剂是L-1β，主要由单核巨噬细胞所产生，是炎症消减的始动因素，是急性痛风关节炎的炎性介质，其和TNF-α对于痛风性关节炎具有促炎的作用，均能介导骨质和关节软骨的损害，进而导致关节功能发生障碍[10-12]。此外，PGE2是痛风关节炎的主要介质，而COX-2是合成PGE2的关键酶，故COX-2对于急性痛风关节炎患者发病和病情发展有很重要的作用及影响。内皮白细胞的COX-2发生高表达会受到IL-1β 和TNF-α的影响[13-15]。

本研究数据表明，急性痛风患者的血清IL-1β、TNF-α及COX-2含量明显高于正常的健康人群，表明痛风是炎性细胞因子的反应过程，其发生和发展与炎症的免疫因素有很大的关系。数据显示，重度痛风患者给药1d后IL-1β、TNF-α及COX-2含量远高于正常人群。患者在采用秋水仙碱联合依托考昔进行治疗的期间，重度痛风患者的炎性细胞因子水平较轻度痛风患者高，不同的炎性细胞因子在机体内的持续时间各不相同，COX-2在7～10 d内可以恢复到正常水平。数据显示，重度痛风患者10 d后的IL-1β、TNF-α及COX-2含量均已恢复正常水平。此外，IL-1β和TNF-α在机体内的持续时间为10～14 d；重度痛风患者的炎性细胞因子水平下降速度较轻度痛风患者快，同时可知，轻重程度不同的急性痛风患者的炎性细胞因子水平在最初发病时是相似的，但是时间延长时，重度患者血清的炎性细胞因子在机体内维持的时间也越长，对患者造成的伤害也会越大，从而不利于患者的预后和康复[16]。由于炎性细胞因子对于患者的预后有很大的影响，因此早期的抑制和阻断其激发和介导的炎症过程，对患者病情和防止关节被破坏具有积极的意义。此外，长期使用药物进行治疗会带来很大的不良反应，而疗程不足会导致病情反复，甚至病情加重，因此，如何选择合理的药物和使用疗程非常重要[17]。本研究数据显示，对急性痛风患者在10～14 d内进行镇痛抗炎治疗的效果最佳。

综上所述，通过酶标检测仪对急性痛风患者IL-1β、TNF-α及COX-2水平的检测，在明确严重程度不同的动态变化情况下为其治疗方案提供重要的思路和依据，值得临床上推广使用。

[1]袁艳平,李长贵.痛风性关节炎患者血清白细胞介素-1β肿瘤坏死因子-α环氧化酶-2水平的动态变化研究[J].中华风湿病学杂志,2013,17(12):818-822.

[2]陈勇,干敏芝,痛风的个体化多模式治疗[J].现代实用医学,2013,25(8):847-848,853.

[3]Sullivan PM,William A,Tichy EM.Hyperuricemia and gout in solid-organ transplant:update in pharmacological management[J].Prog Transplant,2015,25(3):263-270.

[4]洪骏,徐江勇.依托考昔与塞来昔布治疗急性痛风的临床疗效对比[J].中国药业,2013,22(12):44-45.

[5]杨君霞,刘琳,王向党,等.大剂量与小剂量秋水仙碱治疗急性痛风的比较[J].中国医师进修杂志,2011, 34(34):50-51.

[6]黄甘霖.中西医结合综合治疗痛风急性发作的临床研究[J].中国医刊,2014,49(3):92-94.

[7]梁宏达,王吉波,潘琳,等.五味甘露药浴颗粒治疗急性痛风关节炎的临床观察[J].中华全科医学,2011, 9(12):1863-1865.

[8]王纪云,姜玲.自拟止痛汤治疗急性痛风148例疗效观察[J].中国保健营养(中旬刊),2014,24(2):735-736.

[9]Xu Z,Zhang R,Zhang D,et al.Peptic ulcer hemorrhage combined with acute gout:analyses of treatment in 136 cases[J].Int J Clin Exp Med, 2015,8(4):6193-6199.

[10]施桂英.急性痛风关节炎的治疗选择[J].临床药物治疗杂志,2012,10(1):1-4.

[11]蒋春梅,李娟.痛风危险因素、体质类型与中医证型的相关研究[J].热带医学杂志,2011,11(5):590-592,595.

[12]尚积玉,赵心童,贺圣文,等.中国人群代谢综合征各组分与易感基因抵抗素关系的meta分析[J].中国医学装备,2014,11(9):15-17.

[13]王跃旗,王义军,王磊,等.急性痛风性关节炎的中医研究进展[J].环球中医药,2012,5(11):873-877.

[14]薛川松,崔小红,吴宇,等.中西医结合治疗痛风临床研究[J].中医学报,2013,28(10):1577-1579.

[15]张伟杰,王志明.中西医结合治疗痛风的临床研究[J].中国医药导报,2007,4(25):91.

[16]刘亚飞,涂胜豪.中医药治疗痛风的研究进展[J].中西医结合研究,2012,4(1):44-47,50.

[17]Shiozawa A,Cloutier M,Heroux J,et al.Realworld treatment patterns of gout patients treated with colchicine or other common treatments for gout in acute care settings:a retrospective chart review study[J].Curr Med Res Opin,2015, 31(8):1611-20.

The analysis on dynamic change and severity of IL-1 beta, TNF alpha, cox-2 detected by automatic enzyme immunoassay analyzer on patients with acute gout

GOU Jing, ZHANG Wen-ju// China Medical Equipment,2016,13(2):95-98.

Objective: To analyze dynamic change and severity of IL-1 beta, TNF alpha, COX-2 detected by automatic enzyme immunoassay analyzer on patients with acute gout.Methods: Ninety cases of acute gout patients selected according to the different degrees of severity, and were divided into three observed groups.Thirty health people were treated as the control group.IL-1β, TNF-α, COX-2 levels of dynamic change were recorded and compared within the four groups of patients.Results: The serum IL-1β, TNF-α, COX-2 levels in the 1st, 3rd, 7th, 10th day in the observation group 1 and group 2 in acute gout attacks were significantly higher than the control group; The serum levels of IL-1β, TNF-α, COX-2 levels in the 7th 10th day in observation group 1 in acute gout was significantly higher than observation group 2; The serum IL-1β, TNF-α,COX-2 levels in observation group 3 have not significant difference with control group 2; The serum IL-1β, TNF-α, COX-2 levels in observation group1,2,3 in acute gout attacks in the 14th days have not significant difference with control group.Conclusion: After analgesic drugs for the treatment of acute gout patients from 10 to 14 days, the inflammatory cytokines can be completely back to normal.The results provided important evidence for the introduction of analgesic drugs in patients with acute gout treatment.

Acute gout; IL-1β; TNF-α; COX-2;Dynamic changes; Automatic enzyme immunoassay analyzer

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2016.02.030

新疆医科大学科研创新基金(XYDCX2014168)“血清Dickkopf-1水平与痛风性关节炎骨破坏的临床研究”

1672-8270(2016)02-0095-04

R589

A

2015-11-28