班布特罗和沙丁胺醇在人体内的立体选择性药动学和代谢产物研究

姜义武　夏宇敏（.广东东莞常安医院药剂科　东莞　53000；.广东东莞康华医院药剂科　东莞　53000）

班布特罗和沙丁胺醇在人体内的立体选择性药动学和代谢产物研究

姜义武1夏宇敏2（1.广东东莞常安医院药剂科东莞523000；2.广东东莞康华医院药剂科东莞523000）

目的：研究分析班布特罗和沙丁胺醇在人体内的立体选择性药动学和代谢产物。方法：各选择5名受检者服用消旋盐酸班布特罗片剂与左旋硫酸沙丁胺醇片，分别于用药前、用药后（1、3、6、12、24、48以及72h）抽取受检者静脉血5mL，检测患者血浆中班布特罗和沙丁胺醇的浓度变化。结果：班布特罗及沙丁胺醇在人体的代谢过程中均存在着差异。结论：班布特罗、沙丁胺醇及它们的代谢产物在代谢上具有立体选择性。

班布特罗 沙丁胺醇 立体选择性药动学 代谢产物

班布特罗、沙丁胺醇均属于β2-肾上腺素受体激动剂，是特布他林的氨基甲酸酯前药［1］。班布特罗自身并没有药性作用，但其能够在人体内通过氧化反应以及水解作用生成特布他林，特布他林则具有药理活性［2］。沙丁胺醇是一种支气管扩张剂，通常被用来治疗慢性肺阻以及哮喘［3］。我院对班布特罗和沙丁胺醇在人体内的立体选择性药动学和代谢产物进行了深升入研究，现报道如下。

1资料和方法

1.1检测方法：班布特罗的检测方法：在目前已有的对班布特罗以及其代谢产物的检测方法中，灵敏度最高是2010年Luo［4］创建的LC-MS/MS班布特罗手性测定方法，因该方法并不适合用于测定人体的血浆，故需要在对该检测方法做一些改进。首先采用液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）的LC分离血液样本中的母药，再采用MS/MS的质谱多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式采集样本中的母药及其子离子。MRM允许符合设定的目标物母离子进入碰撞池，然后在碰撞池中将此母离子进行碰撞诱导，接着去除无关子离子干扰，仅采集选定的子离子的质谱信号。这种质谱扫描模式可以克服背景干扰且灵敏度高，满足了药物定量测定的迫切需要。

沙丁胺醇的检测方法：目前也有许多研究报道了沙丁胺醇的检测方法，灵敏度最高的是LC-MS/MS检测法，测定的沙丁胺醇对映体最低定量限为100.0pg/mL，四硫基沙丁胺醇的最低定量限为5.000ng/mL，且单独测定沙丁胺醇时，最低定量限可达到25.00pg/mL。受试者吸入1200μg沙丁胺醇后，血浆中R-沙丁胺醇、S-沙丁胺醇的Cmax分别约为2.000ng/mL、3.500ng/mL，LLOQ需至少低于200.0pg/mL，此方法已经达到了灵敏度的要求。虽然此方法灵敏度高且同时进行了沙丁胺醇代谢产物的测定，但是满足其测定所需要的沙丁胺醇血浆样品量大，同时测定时为400μL，单独测定时为500μL，且此方法中沙丁胺醇和四硫基沙丁胺醇对映体没有完全分离，所以要对现有的检测方法进行改进。

1.2检测材料及仪器

1.2.1对照品：消旋盐酸班布特罗、消旋盐酸单胺班布特罗、消旋硫酸特布他林、左旋硫酸沙丁胺醇、消旋硫酸沙丁胺醇、左旋盐酸特布他林。（所有药品均有由中国药品生物制品检定所提供，纯度均大于等于与99%）。

1.2.2基质：选择我院6名健康自愿者的空白血浆以及空白尿样，空白血液中含有抗凝剂EDTA-K2，通过检测证明空白血浆以及尿样内无潜在内源性干扰物，可用于配制尿样以及、血浆的质控样品以及标准曲线样品。

1.2.3仪器：美国Waters公司的高效液相色谱质谱联用仪由高效液相色谱（ACQUITY I CLASS）串联质谱（XeVO-TQ-S）组成；德国Hettich公司的UNIVERSAL 320R型台式高速冷冻离心机等。

1.3立体选择性药动力学研究：班布特罗的研究方案：选择5名受检者，受检测者在用药前禁食12h，次日清晨服用消旋盐酸班布特罗片剂，剂量为10mg。分别于用药前、用药后（1、3、6、12、24、48以及72h）抽取受检者静脉血5mL，将静脉血转移至抗凝管，记录采血时间，加入50μL新斯的明溶液混匀后于离心，取上层血浆，在-60℃温度中保存。

沙丁胺醇的研究方案：选择5名受检者，受检测者在用药前禁食12h，次日清晨服用左旋硫酸沙丁胺醇片，剂量为2.4mg。剩余研究步骤同班布特罗的研究方案。

2结果

2.1班布特罗实验实测数据：5名受试者服用消旋盐酸班布特罗片剂10mg，在规定的不同时间点采集血浆，采用LC-MS/MS法测定体内血药浓度，结果详见表1。

表1 5例受检者服药后血浆中班布特罗浓度变化（pg/mL）

2.2沙丁胺醇实验实测数据：5名受试者服用左旋硫酸沙丁胺醇片剂2.4 mg，在规定的不同时间点采集血浆，采用LC-MS/MS法测定体内血药浓度，结果详见表2。

表2 5例受检者服药后血浆中沙丁胺醇浓度变化（pg/mL）

2.3沙丁胺醇的代谢产物总结：在人的尿液、血浆和粪便样品中共检测到15种代谢产物，其中尿样中11种、血样中3种、粪便中4种。相同的代谢产物：尿样、血样和粪便中1种（M6）；尿样、粪便中1种（M1）。详见表3。

3讨论

班布特罗在治疗慢性肺阻以及哮喘上具有非常重要的效果，但目前对于班布特罗药代动力学的研究报道较少，这主要是由于包括单胺班布特罗在内的几个班布特罗中间代谢产物的药理活性目前没有明确。沙丁胺醇对映体主要是以硫酸结合物的形式从人体内清除，目前市场上的沙丁胺醇一般以消旋体混合物的状态出现。

本文通过5例受检者服药后血浆中班布特罗浓度变化情况发现，班布特罗对映体在体内的代谢是立体选择性的。本研究在人体中定量测定班布特罗及其两种代谢物单胺班布特罗和特布他林的手性LC-MS/MS方法。班布特罗对映体的定量下限为25.00pg/mL，单胺班布特罗和特布他林对映体的定量下限为50.00pg/mL，与现有的国内外检测方法相比，本方法灵敏度大大提高，且同时对班布特罗、单胺班布特罗和特布他林进行了定量分析。研究者们发现［5］，单胺班布特罗的水解过程要比班布特罗的水解过程缓慢许多，导致其在体内出现短暂累积。而此现象说明单胺班布特罗可能与特布他林在体内的缓慢释放相关。本文以班布特罗和沙丁胺醇作为研究对象，通过对其药代动力学参数进行统计学分析，研究了班布特罗及其两种代谢产物和沙丁胺醇在人体内的立体选择性药代动力学，通过比较发现：班布特罗与沙丁胺醇存在立体选择性代谢。药物在体内经过吸收后，会发生一系列的化学结构转化，最终形成与母药结构相关的一种或者多种代谢产物。在体内药物的代谢研究过程中发现，同一种药物在不同种属、不同性别甚至个体中的代谢存在差异，这可能是药物代谢酶的水平和组成不同造成的。沙丁胺醇在体内的代谢途径表明其在人体内的Ⅰ相代谢主要是氧化、还原、去烷基化反应，Ⅱ相代谢主要是葡萄糖醛酸化和硫酸化反应，且这以上反应相互交错进行，造成了代谢产物的多样性。

综上所述，班布特罗、沙丁胺醇及它们的代谢产物在代谢上具有立体选择性。

表3沙丁胺醇的代谢产物总结

［1］Guan S，Hu CY，He MY，et al.Comparative pharmacokinetics and bile transformation of R-enantiomer and racemic bambuterol after single-dose intravenous，oral administration in rats and beagle dogs［J］.Eur J Drug Metab Pharmacokinet，2014，40（4）：1-8.

［2］张寅瑛，洪战英，范国荣，等.手性药物的药动学立体选择性研究进展［J］.中国药学杂志，2011，46（18）：1377-1381.

［3］李丹，孙雷，毕言锋，等.超高效液相色谱-串联质谱法检测动物肌肉组织中19种β-受体激动剂残留 ［J］.中国兽药杂志，2013，47（11）：22-26.

［4］蔡勤仁，吴洁珊，钱振杰，等.液相色谱-串联质谱结合谱库检索测定猪组织中的9种β-兴奋剂残留量 ［J］.色谱，2013，31 （3）：200-205.

［5］Zhou T，Zhao T，Cheng Q，et al.A sensitive LC-MS/MS method for simultaneous determination of R-bambuterol and its active metabolite R-terbutaline in human plasma and urine with application to a clinical pharmacokinetic study［J］.Biomed Chromatogr，2014，28（7）：994–1002.

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