山茱萸果肉化学成分研究*

任亚硕，许凤清，马凤爱

(1 安徽中医药大学药学院，安徽　合肥　230012；2 安徽省现代中药重点实验室，安徽　合肥　230012)



山茱萸果肉化学成分研究*

任亚硕1,2，许凤清1,2，马凤爱1,2

(1 安徽中医药大学药学院，安徽合肥230012；2 安徽省现代中药重点实验室，安徽合肥230012)

研究了山茱萸(Cornusofficinalis)果肉的化学成分，分离得到单体化合物。对山茱萸成熟果实渗漉提取，利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱和重结晶等方法分离纯化化合物，通过理化性质和现代波谱分析技术鉴定化合物结构。结果表明：从山茱萸果肉中分离并鉴定得到6个单体化合物。化合物分别鉴定为槲皮素(Quercetin, 1)、咖啡酸(Caffeic acid, 2)、没食子酸(Gallic acid, 3)、没食子酸乙酯(Ethyl gallate, 4)、齐墩果酸(Oleanoic acid, 5)、β-谷甾醇(β-Sitosterol, 6)。

山茱萸；化学成分；提取分离；结构鉴定

图1　化合物1～6的结构式Fig.1　The structure of compounds 1～6

山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc)为山茱萸科(Cornaceae)植物[1]。药用部位是除去果核的干燥成熟果肉，始载于《神农木草经》，又名蜀枣、 药枣、山萸肉、枣皮、肉枣等，具有补益肝肾、涩精固脱的功效[2]。作为临床常用中草药，山茱萸含有多种活性成分，为了进一步阐明其药理活性的化学基础，本文对新鲜的山茱萸果肉进行了化学成分研究，分离得到6个单体化合物。

1　实　验

1.1仪器与材料

AV-500核磁共振仪,Bruker BioSpin GmbH, Rheinstetten, Germany；EYELA SB-1100旋转蒸发仪,东京理化器械株式会社；SHB-III循环水式多用真空泵,郑州长城科工贸有限公司;ZF-2型三用紫外仪,上海市安亭电子仪器厂；HH-S2恒温水浴锅,江苏金坛市环宇科学仪器厂；DZF-6050真空干燥箱,上海博讯实业有限公司医疗设备厂；AB135-S十万分之一分析天平,瑞士METTLER TOLEDO；大孔树脂AB-8型,天津光复精细化工有限公司；柱色谱用硅胶(100～200目，200～300目)、薄层色谱用硅胶G、GF254,青岛海洋化工厂生产；凝胶为Sephadex LH-20(50 μm)，GE 公司；乙醇为食用酒精；水为蒸馏水；其它试剂均为市售分析纯。

山茱萸药材采自安徽省岳西县石关乡，由安徽中医药大学中药资源系杨青山鉴定为山茱萸科植物山茱萸(CornusofficinalisSieb.et Zucc)。

1.2提取与分离

山茱萸成熟果实6.0 kg，人工去核，得到山茱萸果肉，95%乙醇50 L浸渍2次，续用70% 乙醇50 L 浸渍1次，每次2天，合并3次浸渍液，回收溶剂，得到无醇味稠浸膏，加水混悬，依次以乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，合并萃取液，减压回收溶剂，分别得到乙酸乙酯部位浸膏127.9 g，正丁醇部位浸膏521.3 g。水相经AB-8大孔树脂柱，水洗2个柱体积，后续用70%乙醇洗脱，回收洗脱液，得到水相部位。

取山茱萸乙酸乙酯部位浸膏，加乙醇溶解，吸附于350 g硅胶(200～300目)，经硅胶柱色谱(1.65 kg, 13×80 cm)，二氯甲烷-甲醇(95:5, 9:1, 85:15, 4:1, each 20 L, V/V)系统梯度洗脱，经TLC检识，合并相近的流份，得到12个洗脱部位(Fr 1～Fr 12)。取Fr 1、Fr 2、Fr 3、Fr 7经硅胶柱色谱和Sephadex LH-20葡聚糖凝胶色谱反复纯化，从Fr 1中分离得到化合物6(38 mg)，Fr 2中分离得到化合物5(16 mg)，Fr 3中分离得到化合物4(2 mg)，Fr 7中分离得到化合物1(626 mg)，2(12 mg)，3(6 mg)。

2　结果与讨论

2.1结构鉴定结果

化合物1：黄色针状结晶(甲醇)。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δH: 12.48 (1H, s, OH-5), 7.65 (1H, d,J=2.2 Hz H-2′), 7.51 (1H, dd,J=8.4, 2.2 Hz, H-6′), 6.85 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5′), 6.38 (1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 6.16 (1H,d,J=2.0Hz,H-6), 10.80 (1H,s,3′-OH), 9.6 (1H,s,4′-OH), 9.36(1H,s,7-OH), 9.31(1H,s,3-OH);13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ: 175.8 (s, C-4), 163.9 (s, C-7), 160.7 (s, C-5), 156.1 (s, C-9), 147.3 (s, C-4′), 146.8 (s, C-2), 145.0 (s, C-3′), 135.7 (s, C-3), 121.9 (s, C-1′), 120.0 (d, C-6′), 115.6 (d, C-5′), 115.0 (d, C-2′), 103.0 (s, C-10), 98.2 (d, C-6), 93.4 (d, C-8)。以上波谱数据与文献[3]一致，故鉴定化合物1为槲皮素(Quercetin)。

化合物2：黄色针状结晶(甲醇)。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δH: 7.37 (1H, d,J=15.8 Hz, H-7), 7.00 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.91 (1H, dd,J=8.2, 2.0 Hz, H-6), 6.73 (1H, d,J=8.2 Hz, H-5), 6.13 (1H, d,J=15.8 Hz, H-8).13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δC: 167.9 (s, C-9), 148.1 (s, C-4), 145.5 (s, C-3), 144.6 (s, C-7), 125.0 (s, C-1), 121.2 (d, C-6), 115.7 (d, C-5), 115.1 (d, C-2), 114.6 (s, C-8)。以上波谱数据与文献[4]一致，故鉴定化合物2为咖啡酸(Caffeic acid)。

化合物3：无色针状结晶(甲醇)。1H-NMR (500 MHz, acetone-d6) δH: 7.13 (2H, s, H-2, 6)。13C-NMR (125 MHz, acetone-d6) δC: 167.7 (s, C-7), 145.9 (s × 2, C-3,5), 138.6 (s, C-4), 121.9 (s, C-1), 110.0 (d × 2,C-2, 6)。以上波谱数据与文献[5]一致，故鉴定化合物3为没食子酸(Gallic acid)。

化合物4：无色针状结晶(氯仿)。1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δH: 7.13 (2H, s, H-2, 6)。13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δC: 167.7 (s, C-7), 145.9 (s×2, C-3,5), 138.6 (s, C-4), 121.9 (s, C-1), 110.0 (d×2, C-2, 6)。以上波谱核磁数据与文献[6]报道一致，故鉴定化合物4为没食子酸乙酯(Ethyl gallate)。

化合物5：无色针状结晶(甲醇)。1H-NMR (400 MHz，DMSO-d6) δH：0.7～1.2之间出现7个甲基氢质子峰，1.0～2.1(m)为多个CH、CH2上的H信号，5.28(1H，br.s,H-12)为烯氢信号。13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δC：38.4(C-1)，27.7(C-2)，79.1(C-3)，38.7(C-4)，55.2(C-5)，18.2(C-6)，32.4(C-7)，39.6(C-8)，47.6(C-9)，37.0(C-10)，23.3(C-11)，122.6(C-12)，143.6(C-13)，41.5(C-14)，28.1(C-15)，23.9(C-16)，46.8(C-17)，41.9(C-18)，46.5(C-19)，29.6(C-20)，33.8(C-21)，32.6(C-22)，30.6(C-23)，15.9(C-24)，15.5(C-25)，17.2(C-26)，26.9(C-27)，182.8(C-28)，34.0(C-29)，23.9(C-30)。以上波谱数据与文献[7]所报道的一致,故鉴定化合物5为齐墩果酸(Oleanoic acid)。

化合物6：白色无定形粉末(氯仿)。经TLC 检识与β-谷甾醇对照，薄层行为一致；后经HPLC验证，保留时间与β-谷甾醇对照品相同，故确定化合物6为β-谷甾醇。

2.2讨论

本实验以安徽大别山区的山茱萸新鲜果肉为研究对象，为防止植物中的某些化学成分遇热会被破坏，采用渗漉的方式提取，并在实验过程中严格控制实验温度在60 ℃以下，通过系统溶剂萃取法将提取浸膏进行极性分段，并利用多种色谱技术对乙酸乙酯萃取部位的化学成分进行初步分离，分得6个化合物，经薄层检识、1H-NMR，13C-NMR等方法对分离得到的6个单体化合物进行结构鉴定。

后期进一步对比山茱萸果肉与果核中化学成分的异同，深入探讨山茱萸炮制前后化学成分的改变，将会对山茱萸的综合开发与应用起到促进作用。

3　结　论

山茱萸是目前中医临床常用的传统中药，本研究对其乙酸乙酯萃取部位化学成分进行系统分离，后期实验还将对其石油醚、正丁醇萃取进行研究。山茱萸因含有丰富的活性成分，确切的保健功效，成为研究热点，随着山茱萸在医药和保健品等方面的广泛应用，其药效机制的研究也在不断深入。本课题组也将继续进行系统实验，以期为山茱萸的进一步研究提供有益参考。

[1]中科院中国植物志中国植物志编委会. 《中国植物志》. 北京：科学出版社，1990: 56, 84.

[2]国家药典委员会. 中华人民共和国药典(第一部)[S]. 北京：中国医药科技出版社，2015: 27.

[3]宋丽，臧志和，廖洪利，等. 槲皮素三种化学结构修饰方法的研究[J]. 成都医学院学报, 2007, 2(2): 115-117.

[4]段营辉，戴毅，高昊，等. 草珊瑚的化学成分研究[J]. 中草药, 2010, 41(1): 29-32.

[5]杨小凤，付宏征. 栾树的化学成分[J]. 药学学报, 1999, 34(6): 457-462.

[6]程琛舒. 山茱萸化学成分的研究[D]. 合肥：安徽大学, 2011.

[7]李娟，毕志明，肖雅洁，等. 怀牛膝的三萜皂苷成分研究[J]. 中国药学杂志，2007, 42(3): 178-180.

Study on the Chemical Constituents from the Fruit ofCornusofficinalis*

RENYa-shuo1,2,XUFeng-qing1,2,MAFeng-ai1,2

(1 School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui, Hefei 230012;2 Anhui Key Laboratory of Modernized Chinese Materia Medica, Anhui Hefei 230012, China)

To study the chemical constituents from the fruit ofCornusofficinalis, the chemical constituents were separated and purified by a variety of chromatographic methods such as silica gel, Sephadex LH-20 and recrystallization. Their structures were elucidated on the basis of extensive spectroscopic methods and physico-chemical characters. Results showed that six compounds were isolated from the fruit ofCornusofficinalis. Compounds 1～6 were identified as Quercetin, Caffeic acid, Gallic acid, Ethyl gallate, Oleanoic acid and β-Sitosterol.

CornusofficinalisSieb.et Zucc; chemical constituents; extraction and isolation; structure establishment

安徽中医药大学自然科学研究基金项目(No: 2015zr008)。

任亚硕(1987-)，男，助教。

许凤清，女，副教授。

R931.6

A

1001-9677(2016)08-0076-02