苗药热淋清咀嚼片的质量研究

李展城舒友平宋文凤千永香（1.广州绿色医药科技有限公司　广州　510515；.广东中南药业有限公司深圳　51808）

苗药热淋清咀嚼片的质量研究

李展城1舒友平1宋文凤1千永香2（1.广州绿色医药科技有限公司广州510515；2.广东中南药业有限公司深圳518028）

目的：研究热淋清咀嚼片，确定合理质量检测方法。方法：对热淋清咀嚼片的没食子酸含量检测进行方法学研究。结果：确定了热淋清咀嚼片中没食子酸含量在4.9～196.0μg/mL浓度范围之间具有良好的线性关系（r=0.99995），平均回收率为99.68%，RSD 为0.48%。结论：热淋清咀嚼片含量检测方法可行，质量可控，稳定。

热淋清 头花蓼 质量标准 咀嚼片

热淋清为贵州苗族习用药材头花蓼的单方制剂，头花蓼（Polygonum capitatum Buch-Ham.exD.Don）是蓼科植物，最早收载于《广西中药志》，称其为石莽草、石辣蓼，“味辛，微涩，性温，散瘀止痛，治风湿，跌打”。《贵州省中药材、民族药材质量标准》：味苦，辛，性凉，清热利湿，解毒止痛，活血散瘀，利尿通淋，临床主要用于尿路感染［1～2］、急慢性肾盂肾炎、非淋菌性尿道炎等疾病的治疗［3］。考虑到尿路感染患者常有尿频、尿急、尿痛等症状，心理上惧怕饮用大量的水以及糖尿病患者患有尿路感染，不宜服用含糖药品等因素，开发了无糖型热淋清咀嚼片。本课题对无糖型热淋清咀嚼片的质量检测进行了研究，经过文献检索，在部颁标准基础上增加了高效液相色谱法测定没食子酸含量，得到满意的分离效果，为确立质量标准提供可靠的实验依据。

1　仪器与材料

1.1仪器：HP1100高效液相色谱仪，DAD检测器（美国惠普公司）；AG204电子天平（瑞士METTLER TOLEDO）；xSP-18S型双目显微镜（江南光学仪器厂）。1.2材料：热淋清咀嚼片（某研究所中试产品）；没食子酸对照品（批号0831-9501，中国药品生物制品检定所提供）；热淋清胶囊（贵州弘康药业有限公司，生产批号060103）；色谱纯甲醇（TEDIA COMPANY，INC.ARB0401），N，N-二甲基甲酰胺（AR，天津广成化学试剂厂060309）；磷酸（AR，天津广成化学试剂厂051211）；冰醋酸（AR，天津富宇精细化工有限公司060501）。

2　方法与结果

2.1质量研究

2.1.1性状：根据热淋清咀嚼片的实际性状描述为“热淋清咀嚼片为棕褐色的薄膜衣片，除去薄膜衣后显棕褐色；气香，味甜微涩”。三批某研究所自制样品与对照样品热淋清胶囊形状对比见表1。

表1　性状对比

热淋清咀嚼片：某研究所中试三批，批号：070201、070202、070203。

对照样品：热淋清胶囊由贵州弘康制药有限公司生产，批号：060103。

2.1.2薄层鉴别：依据热淋清胶囊标准［4］鉴别（1）项下进行检测：取热淋清咀嚼片10片，除去薄膜衣，研细，称取3g，加甲醇20mL，水浴回流1h，滤过，滤液浓缩至约2mL，加在氧化铝柱（中性氧化铝3g，100～200目，105℃干燥30min；柱内径1cm）上，用甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，水浴上浓缩至约1mL，作为供试品溶液。另取头花蓼对照药材1.5g，加水20mL，煮沸30min，滤过，滤液浓缩至干，加甲醇20mL使溶解，滤过，水浴上浓缩至约1mL，作为对照药材溶液。再另取热淋清胶囊和缺头花蓼的阴性样品各3g，自供试品处理“加甲醇20mL”起同法操作，制成对照样品和缺头花蓼阴性样品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述四种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，氨气中熏1min，置紫外灯（365nm）下检视。

2.1.3含量测定

2.1.3.1色谱条件及系统适用性试验：采用惠普1100高效液相色谱仪；HP Spherisorb色谱柱（250mm×4mm，0.5μm，十八烷基硅烷键合硅胶）。

流动相：甲醇-水-N，N-二甲基甲酰胺-冰醋酸（1∶96∶1∶2）。检测波长：272nm；柱温：25℃；流速：1mL/min。

理论板数：按没食子酸色谱峰计算应不低于3000。（见图1）。

分离度：热淋清咀嚼片含量测定的没食子酸与其他色谱峰达到基线分离，分离度大于1.5（见图1）。

2.1.3.2阴性干扰试验：按制备工艺方法制备不含头花蓼的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成不含头花蓼的阴性溶液。分别精密吸取不含头花蓼的阴性溶液与对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果在与没食子酸对照品保留时间相同的位置上无色谱峰出现，表明不含头花蓼的阴性溶液对热淋清咀嚼片测定无干扰。（见图2）

2.1.3.3线性范围试验：精密称取没食子酸对照品适量，加50%甲醇溶液溶解并稀释制成含没食子酸为196.0μg/mL的贮备溶液；以该贮备溶液加50%甲醇溶液逐步稀释配制成98.0μg/mL，49.0μg/mL，29.4μg/mL，9.8μg/mL，4.9μg/mL。分别取上述各溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度作横坐标（C），以峰面积作纵坐标（A），作线性回归，得回归方程。结果见表2。

表2　线性范围试验结果

2.1.3.4精密度试验：取没食子酸对照品溶液，精密量取10μL，注入液相色谱仪，重复进样5次，测得5次的没食子酸峰面积相对标准方差为0.44%。

2.1.3.5溶液的稳定性试验：取含量测定项下供试样品溶液，置于室温下，分别于第0，2，4，8，24h取样测定，热淋清咀嚼片在24h内测定，没食子酸峰面积相对标准方差为0.23%，峰面积无明显改变，说明供试品溶液在室温下放置24h比较稳定。

2.1.3.6回收率试验：精密取没食子酸对照品溶液（196.0μg/mL）适量，分别加入一定量的已知含量的热淋清咀嚼片（批号：070207；含量：11.979mg/g）中，加50%甲醇溶液，共制备处于线性范围三组不同浓度（样品+50%，样品+100%，样品+150%）的样品溶液，依法取样测定，平行测定9份，统计方法加样回收率，见表3。

2.1.3.7重现性实验：取热淋清咀嚼片10片，除去薄膜衣，研细，随机取热淋清咀嚼片5份，每份约0.15g，精密称定，置锥形瓶中，加50%甲醇溶液适量，超声处理（功率不少于150W，频率不少于12KHz）1h，放冷后，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，取续滤液10μL依法测定，结果见表4。

表3　回收率试验结果

表4　重现性实验结果（n=5）

从结果可以看出，本含量测定方法重现性好，可以满足分析要求。

3　讨论

早在1985年吴廼居等采用乙醚和乙醇提取与硅胶柱层析，首次分离得到6种化合物，经理化性质及IR、MS等光谱分析鉴定为：苯甲醛、乙酸、24-羟基二十四烷酮-3、29-羟基二十九烷酮-3β-谷甾醇、没食子酸，并认为没食子酸为其主要有效成分［6］。同时也有文献用薄层扫描法［7］、高效毛细管电泳法［8］及高效液相色谱法［9］对热淋清颗粒、胶囊中的没食子酸进行了测定研究，为头花蓼制剂中没食子酸的含量提供了可行的快速测定方法。因此我们采用了高效液相色谱法测定没食子酸，并摸索试验条件，据此，为了控制头花蓼制剂的质量。

含量检测查阅了文献报道［10］，流动相选甲醇-水-N，N二甲基甲酰胺-冰醋酸，达到很好的峰形和分离度，没食子酸在4.9～196.0μg/mL浓度范围之间具有良好的线性关系A=32.626C+ 7.66191（r=0.99995），平均回收率为99.68%，RSD为0.48%，热淋清咀嚼片含量检测方法可行，质量可控，所建方法专属性、重复性好，建立本制剂的质量标准，为本制剂的质量监控提供了实验依据。

［1］杨立明，白明君，张玥，等.热淋清颗粒治疗尿路感染的临床观察［J］.长春中医学院学报，2002，18（3）：18.

［2］俞建军，马小琴.热淋清颗粒治疗尿路感染的疗效评价［J］.浙江中医杂志，2002，37（3）：135.

［3］冯永山，白兆震.热淋清颗粒治疗非淋球菌尿道炎的疗效观察［J］.临床泌尿外科杂志，2001，16（12）：543.

［4］中华人民共和国卫生部药品标准.热淋清胶囊药品标准（WS3-B-2402-97）.中药成方制剂，1997，第十二册：151.

［5］中华人民共和国卫生部药品标准.热淋清颗粒药品标准（WS3-B-3303-98）.中药成方制剂，1998，第十七册：219.

［6］吴廼居，王德仁.石莽草化学成分的研究［J］.中草药，1985，16 （4）：5-6.

［7］茅向军，熊慧林，许乾丽，等.薄层扫描法测定热淋清胶囊及热淋清颗粒中没食子酸的含量 ［J］.药物分析杂志，2001，21（5）：364-365.

［8］茅向军，鲁静，林瑞超.高效毛细管电泳法测定2种热淋清制剂中没食子酸的含量［J］.药物分析杂志，2002，22（1）：62-65.

［9］茅向军，许乾丽，熊慧林，等.高效液相色谱法测定热淋清胶囊中没食子酸的含量［J］.中国中药杂志，2002，27（8）：589-591.

［10］史亚军，王榭，刘世军.热淋清糖浆的含量测定研究［J］.陕西中医学院学报，2005，28（6）：47-48.

Quality of Miao traditional medicine Relinqing chewable tablets

Li zhancheng1Shu Youping1Song Wenfeng1Qian Yongxiang2（1.Guangzhou Green Medicine Science&Technology Co.，Ltd. Guangzhou 510515；2.Guangdong South China Pharmaceutical Co.，Ltd.Shenzhen 518028）

Objective:To determine a quality methods in relinqing chewable tablets.Methods:Methodological study of content detection gallic acid in Relinqing Chewable test.Results:Gallic acid was linear of in the concentration range of 4.9～196.0μg/mL（r=0.99995）. The average recovery was 99.68%，RSD 0.48%.Conclusion:This method of content detection in Relinqing Chewable is feasible，quality control，and stability.

Relinqing Polygonum Quality standards Chewable tablets

R927.2

A

1672-8351（2016）02-0016-02