某地区牛、羊口蹄疫免疫抗体监测与分析

杨文卫

（江苏省常州市金坛区动物疫病预防控制中心，江苏 常州 213200）

某地区牛、羊口蹄疫免疫抗体监测与分析

杨文卫

（江苏省常州市金坛区动物疫病预防控制中心，江苏 常州 213200）

为确实掌握某地区牛、羊口蹄疫（FMD）春季防疫免疫效果，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）对该地区某奶牛场的74头奶牛进行了A、O和亚洲Ⅰ型FMD免疫抗体的检测，对7家规模养殖场和7家散养户的80只山羊进行了O型和亚洲Ⅰ型FMD抗体的检测。结果显示，用O型-A型-亚洲Ⅰ型FMD三价灭活苗免疫奶牛后，可同时产生针对A、O和亚Ⅰ型3种亚型的高水平抗体；用O型-亚洲Ⅰ型FMD二价灭活苗免疫羊后，规模羊场的两种亚型抗体合格率均高于散养羊。所抽检牛、羊抗体合格率均超过农业部规定的70%的标准。结果表明，FMD三价苗免疫效果较好，可以起到一针防三型的作用，值得推广应用。

奶牛；羊；口蹄疫；免疫抗体；检测

口蹄疫（FMD）俗称“口疮”、“蹄癀”，是由口蹄疫病毒（FMDV）引起偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触性传染病，以牛最易感，其次为猪、羊、骆驼等，人对本病也具有易感性。俗称牛是指示灯，猪是扩大器，羊是保持者。本病感染谱广、流行快，往往造成大流行，不易控制和消灭，是目前世界各国最重视的家畜传染病之一。FMDV具有多型性、易变异的特点。根据其血清学特性，目前可分为7个血清型、即A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲Ⅰ型（简称亚Ⅰ型）。本病主要感染牛、羊，对易感动物进行免疫接种是防控此病最有效的措施。由于FMD各型的抗原性不同，互相之间不能交叉免疫，所以，要获得理想的抗体水平必须使用相应血清型的疫苗。目前，预防牛FMD普遍使用O型-A型-亚洲Ⅰ型三价灭活苗（简称三价苗），羊FMD使用O型-亚洲Ⅰ型FMD二价灭活苗（（简称二价苗）进行免疫接种。

为了解FMD二价苗和三价苗的免疫效果，确实掌握春季防疫后各养殖场（户）牛、羊免疫 FMD后的抗体水平，本试验对某牛场的74头奶牛进行了A、O和亚Ⅰ型FMD免疫抗体的检测，对7家规模场和7个散养户的80只羊进行了O型和亚Ⅰ型FMD免疫抗体的检测，并对结果进行初步分析和探讨，以期为FMD的防治工作提供一定的参考资料。

1　材料

1.1主要仪器普通离心机，酶标仪，微量震荡器等。

1.2试验动物某规模奶牛场的74头奶牛，7家规模场（以A1～A7表示）共计45只羊，7个散养户（以B1～B7表示）共计35只羊。

1.3免疫疫苗奶牛使用O型-A型-亚洲Ⅰ型FMD三价灭活苗为金宇保灵生物药品有限公司生产，批号：5235040；A1～A5、B1～B5免疫羊使用O型-亚洲Ⅰ型FMD二价灭活苗为中牧实业股份有限公司生产，批号：1505005；A6、A7、B6、B7免疫羊使用O型-亚洲Ⅰ型二价灭活苗为金宇保灵生物药品有限公司生产，批号：5216019。

1.4免疫抗体检测试剂O型FMD液相阻断ELISA抗体检测试剂盒（20160407101-1）、亚洲Ⅰ型FMD液相阻断ELISA抗体检测试剂盒（20160408102）和A型FMD液相阻断ELISA抗体检测试剂盒（20160408103）。

2　方法

2.1血清的采集及处理免疫21d后，分别从牛、羊颈静脉采血5mL，倾斜45°室温放置，待血液凝固后以4000r/min进行离心，离心5min，分离出血清样品，至于4℃冰箱待检。

2.2免疫抗体检测依据国家标准《口蹄疫诊断技术》（GB/T18935-2003），应用液相阻断ELISA方法检测A、O和亚Ⅰ型FMD免疫抗体，严格按照试剂盒说明书进行，A、O和亚Ⅰ型抗体滴度测定均按照20份样品进行布局，血清稀释度为24～27。

2.3结果平判定根据农业部《2015年国家动物疫病监测与流行病学调查计划》，A、O和亚Ⅰ型FMD液相阻断ELISA，免疫21d后的抗体效价≥26判定为免疫合格。根据检测3种亚型抗体的试剂盒说明书，牛、羊的抗体效价≥1：128，为99%以上保护；效价在1：22～90之间，为50%保护；效价≤1：16，无保护作用。

3　结果与分析

3.1不同饲养方式牛、羊FMD抗体检测结果比较经检测，该规模牛场抽检的74头奶牛中，只有1头奶牛A、O和亚Ⅰ型3种亚型的抗体水平均不合格，另外有1头奶牛A型抗体不合格。74头奶牛的O型和亚Ⅰ型FMD免疫抗体合格率相同，均为98.65%，A型略低于其它两种亚型，为97.30%。规模羊场的O型和亚Ⅰ型FMD免疫抗体均高于散养羊，羊的两种FMD亚型抗体合格率相近。所有抽检牛、羊抗体合格率均超过农业部规定的70%的标准，检测结果见表1。

3.2EMD三价苗免疫保护情况从检测结果可以看出，奶牛经FMD三价苗免疫后，产生了高水平的免疫抗体。其中，O型和亚Ⅰ型抗体效价≥1：128的比率占到98.65%，即该三价苗对98.65%的奶牛有99%以上的保护作用，对另外的1.35%的奶牛有50%的保护作用；A型FMD免疫保护率也较高，对93.24%的奶牛起到99%的保护。从整体水平来看，一针FMD三价苗可以平均防止该奶牛场96.85%的奶牛感染FMDV，检测结果见表2。

表1　不同饲养方式牛、羊FMD抗体检测结果

表2　FMD三价苗免疫保护情况

4　讨论

FMD是世界动物卫生组织规定的A类烈性动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。近年来，农业部下发的FMD免疫方案中规定：“对所有牛、羊、骆驼、鹿进行O型和亚洲Ⅰ型FMD强制免疫，对所有奶牛和种公牛进行A型FMD强制免疫。”根据最近几年各地FMD发生和流行情况来看，目前流行的主要是A型和O型。因此，为严防FMD的发生，对于奶牛场，必须进行A、O和亚Ⅰ型3种亚型的强制免疫，而羊场则要进行O型和亚Ⅰ型两种亚型的免疫。科学合理的免疫程序和优质疫苗的选择是保证免疫效果的充分条件，同时，免疫抗体检测又是掌握疫苗免疫后动物机体产生的抗体水平以及评估疫苗质量的重要方法。

为了解掌握2016年某地区奶牛和羊的FMD免疫预防情况，科学评价疫苗免疫效果，本试验对分布于当地8个乡镇的羊和一牛场的奶牛进行了FMD免疫抗体的监测。结果显示，所有被检牛、羊免疫抗体合格率均达到农业部规定的标准。其中，奶牛的免疫抗体合格率最高，74头奶牛中只有1头奶牛的3种亚型抗体不达标，可能与该试验牛的免疫机能较差有关。免疫三价苗的肉牛中，O型和亚洲Ⅰ型不合格的A型也不合格。O型和亚Ⅰ型FMD免疫抗体合格率以及达到99%以上保护作用的牛所占比率均达到98.65%，说明该三价苗能同时激发免疫动物产生高水平的O型和亚Ⅰ型FMD抗体，起到极大的保护作用。A型抗体合格率虽然也很高，但起到99%以上保护作用的牛所占比率却较低，为93.24%，可能与多种因素有关，包括动物的种属、FMDV的血清型、抗原结构、有效抗原负荷量、保护性抗体的结合位点等。二价苗免疫羊的抗体合格率偏低，尤其是散养户羊，不论是O型FMD抗体水平还是亚Ⅰ型，规模场都比散养户平均高出6个百分点，这可能与饲养管理人员对疫苗接种的重视程度、管理水平、动物的营养健康水平、防疫员的技术水平以及疫苗的储存条件等有一定关系。因此，在实际防疫工作中，应加大对FMD等重大动物疫病预防接种的宣传力度，同时对养殖场及散养户开展免疫接种等技术指导，确保羊FMD的免疫保护率。无论是FMD三价苗还是二价苗，牛、羊免疫后对同一种疫苗的不同亚型抗原刺激所产生的免疫应答有所不同，但差别不大，可能是不同型的抗原之间存在相互干扰，或是免疫细胞对不同抗原同时刺激存在选择性，或是与多价苗同单位剂量中不同种抗原的量不同有关，在实际工作中，应根据检测结果，及时对免疫后抗体水平较低的动物针对性的进行补免，以达到有效保护力。

本次监测结果表明，用FMD三价苗免疫奶牛后21d，A、O和亚Ⅰ型FMD免疫抗体合格率完全能够达到农业部规定的标准，与贺奋义，周静华等人的报道结果一致。FMD三价苗可以起到一针防三型的作用，并且可大大降低防疫强度和成本，值得推广应用。

当然，要切实避免FMD的发生，除了严格按照要求和标准接种疫苗，定期进行抗体检测外，还应注重以下几个方面。包括（1）日常的消毒。消毒是消灭传染源、控制FMD最有效的办法，必须严格执行消毒制度，做好消毒工作。（2）环境控制。养殖场的选址、分区、布局应科学合理，避免非场区人员进入养殖区。（3）饲养管理。避免不同种类的动物混养；坚持自繁自养，不同日龄的应分开饲养，如需引种，应保证证件齐全；根据不同生长阶段的营养需求，科学饲喂；在饲养过程中，应减少应激。（4）无害化处理。对病死动物、粪便及其他污染或可疑污染物严格按照要求进行无害化处理，所涉及到的运输、装卸等环节要避免洒漏，所用交通工具及其它物品要彻底消毒。（5）建好免疫档案。免疫档案是了解、追溯免疫状况最简捷、最准确的方法。因此，要严格按照防疫要求，建立健全免疫档案，确保防疫工作及时、全面、准确完成。

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10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.017

杨文卫（1966～），高级畜牧师，主要从事动物疫病防控工作