探析生活饮用水微生物检验方法和评价标准

广东省惠州市博罗县疾病预防控制中心（516100）陈晓能 邓育芳

随着经济的不断发展，工业化建设的进程也在不断地加快，导致人们日常生活中的饮用水生物污染越来越严重，也是造成人们疾病的主要原因之一[1][2]。所以，我国政府对生活饮用水的卫生问题也越来越关注，并且多次发布和修改饮用水卫生的标准。在我国，对生活饮用水均采用沉淀、过滤并且加氯消毒，减少水中的微生物，因此生活饮用水中的微生物检测指标就是评价水质生物性污染的重要指标。与此同时，本文选取一家生活饮用水中的微生物检验科抽检1000例水样，对其进行微生物大肠菌群检验，探讨生活饮用水微生物的检验方法和评价标准，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取一家生活饮用水中的微生物检验科抽检1000例水样，所有的水样选取都是按照《生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存》中的规定进行具体操作。随机抽取生活的饮用水，并对生活饮用水进行大肠菌群检测，将其分成观察组和对比组，对两组方法收集的1000例的水样放入试管中进行检验。

1.2 方法

1.2.1 观察组中的多管发酵法

1.2.1.1 多管发酵法和需要的仪器和设备 多管发酵法主要用于对生活饮用水中总大肠菌群进行测定。总大肠菌群是一种革兰氏阴性菌，是一类无芽孢杆菌，在培养温度为37℃的环境中进行24小时的培养，可产酸产气、发酵乳糖，并具有厌氧与需氧的特性。在多管发酵法中，需要采用培养基及其相关试剂进行培养，在采用该方法进行检测时，需要采用培养基与实验试剂进行测定。首先需要试管、天平、分度吸管、冰箱、显微镜、培养箱、小倒管、平皿、锥形瓶、载玻片这些仪器设备。

1.2.1.2 操作步骤 首先，分别将10mL、1mL水样放至10mL的双料乳糖蛋白胨培养液以及10mL的单料乳糖蛋白胨培养液中，另外将lmL水样放入9mL无菌生理盐水中，将其混匀后，取1mL将其放入单料乳糖蛋白胨培养液中进行培养，并将每一种稀释度进行5管接种。对于经处理后的饮用水，也要每天进行定期检验。其次，对水源水样行检验时，当发现水源污染严重，应将稀释度加大，将3种接种水样的稀释度进行5管接种，共15管。再就是试管接种后，将其置于37℃的恒温培养箱中进行培养，时间为24小时。然后，对于产酸产气的接种管，将其在伊红美蓝琼脂板上进行转种，置于培养箱中培养。同时对菌落形态进行观察，将紫黑色合并金属光泽或无金属光泽以及淡紫红色且中心部分颜色较深的菌落进行染色，并通过镜检进行证实。最后，采用染色镜进行染色，证实为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则可对其进行乳糖蛋白胨的培养，将接种管置于恒温培养箱中，进行一天培养之后，出现产酸气的接种管，则为总大肠菌群阳性。

附表 两组水样检验对比

1.2.2 对比组中的滤膜法 滤膜法主要采用0.45微米的微孔滤膜对水样进行过滤，对总大肠菌群进行检测。所需要的仪器和设备有0.45微米孔径滤膜、小倒管、无齿镊子、滤器、锥形瓶、培养箱、天平、冰箱、显微镜、试管、平皿、抽滤设备，分度吸管、载玻片。其次，滤膜法的具体操作步骤为：①灭菌：采用火焰进行灭菌，可将酒精棉球点燃实施灭菌，还可采用蒸汽灭菌器实施灭菌，灭菌时间为20分钟。同时，在烧杯中放置滤膜，并将蒸馏水加入烧杯中，将水煮沸三次进行灭菌，每次灭菌时间为15分钟。②培养：对水样进行过滤之后，再抽气5秒，随后把滤器阀门关上，并将滤膜用灭菌镊子夹取至品红亚硫酸钠培养基上，将滤膜截留的细菌面朝上放置，紧贴培养基后在恒温箱中进行培养。③过滤水样：将灭菌滤膜采用无菌镊子进行夹取，将滤膜的粗糙面朝上，置于无菌滤床上，随后将100mL水样在滤器中注入，并打开阀门，进行抽滤。

1.3 观察指标 水源污染比较严重的水样在进行检验时可以进行稀释，每递增一次就换一个灭菌刻度吸管。将试管放置在培养器皿中，将温度控制在合理的温度表上。

1.4 统计学分析 对数据库的录入及统计分析均通过SPSS22.0软件实现。计量资料的检验和计数资料的检验分别采用t 和x来体现。P<0.05表示具有统计学意义。

2 结果

观察组中合格有478例，不合格22例，总合格率为95.6%。对比组中合格390例，不合格110例，总合格率为78%，观察组中的检验合格率明显高于对比组，P<0.05，具有统计学意义。详见附表。

3 讨论

有研究显示，多管发酵法在对少于1mL的水样进行接种时，应稀释10倍，随后取1mL进行接种，采用逐次递增法进行稀释，在稀释时的吸管应具有灭菌刻度，它也是生活用水日常的检验中最常用的一种检验方法[3][4][5]。滤膜法则主要采用0.45微米的微孔滤膜对水样进行过滤，对总大肠菌群进行检测，采用火焰进行灭菌，可将酒精棉球点燃实施灭菌，并将蒸馏水加入烧杯中，将水煮沸三次进行灭菌，每次灭菌时间为15分钟[6][7]。与此同时，生活饮用水的卫生与人类身体的健康具有紧密联系，所以相关部门应加强饮用水的工作，加大对水源的管理力度，防止水污染。在工作范围内，还应该加强对水质净化消毒以及加大对群众的饮用水卫生的宣传。尤其是对生活饮用水均采用沉淀、过滤并且加氯消毒，减少水中的微生物，因此生活饮用水中的微生物检测指标就是评价水质生物性污染的重要指标，并且所有的水样选取都是按照《生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存》中的规定进行具体操作。本次研究，探讨生活饮用水微生物的检验方法和评价标准。其中，观察组中的总合格率为95.6%，对比组中的总合格率为78%，观察组中的检验合格率明显高于对比组，表明了两组检验出来的数值完全不同，不同的检验方法对大肠菌群的检验显得非常重要。这一结果与相关文献报道的数据吻合，因此本次研究具有参考价值[8]。综上所述，多管发酵法检验和滤膜法的比较得出两组的基本数据相同，但是两组检验出来的数值完全不同，其中有80%的滤膜是通过多管发酵法来界定的，因此，在相同的检验环境中，不同的检验方法对大肠菌群的检验显得非常重要。