脓毒血症患者血小板膜糖蛋白的表达及临床意义

黄君华，邓杰

脓毒血症患者血小板膜糖蛋白的表达及临床意义

黄君华，邓杰

目的研究脓毒血症患者的血小板膜糖蛋白的表达和变化的临床意义。方法选取脓毒血症患者40例，将23例器官功能正常患者设为A组，17例器官功能不全患者设为B组，另选40例正常人作为对照组，比较3组外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63、血浆血栓素B（2TXB2）和6-酮-前列腺素F1（6-keto-PGF1）。结果脓毒血症患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于正常组（均＜0.05），但6-keto-PGF1低于正常组（＜0.05）；器官功能不全患者在血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于器官功能正常患者（均＜0.05），但6-keto-PGF1低于器官功能正常患（＜0.05）。结论脓毒血症患者外周血中血小板明显处于高度活化状态，其活化程度与患者病情呈正相关。血小板激活指标可以作为患者脏器损伤程度的有效指标之一。

脓毒血症；血小板膜糖蛋白；表达

脓毒血症是由于感染引起的全身性严重反应综合征［1］，是烧伤、创伤、休克等严重疾病患者的高发并发症之一，患病后容易引发全身性多器官功能障碍。全球现阶段感染脓毒血症患者超过1 800万人，并且该病发病率还在以每年2％～7％的速度上升，该病发病后病情凶险，病死率较高［2-3］。流行病学研究发现，脓毒血症患者的病死率已超过心肌梗死，成为重症监护病房（ICU）中非心脏病死亡的主要原因之一。该病的发病机制目前还没有准确的定论，涉及到复杂的全身性病变，主要有全身炎症网络效应、基因多态性、免疫功能障碍及凝血功能异常等。凝血系统的活化加重脓毒血症患者病情的发展，而血小板在炎症和凝血间占据着最主要的作用。本文研究脓毒血症患者的血小板膜糖蛋白CD62P、CD63表达及变化，并与正常人进行对比，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取浙江省舟山医院2014年6月至2015年6月收治的脓毒血症患者40例，均符合美国胸科医师学会（ACCP）/危重病医学会（SCCM）中关于脓毒血症的新诊断标准［4］，且自愿参加；排除：（1）患病前有血栓性疾病及可引起血小板变化的疾病，（2）入院前10 d内接受过血小板抗凝药物治疗或是3 d内有过肝素抗凝病史。根据患者的发病程度将器官功能正常患者和器官功能不全患者分为A组和B组，A组23例，满足严重脓毒血症的诊断标准，其中男12例，女11例，平均年龄（46.7±8.9）岁；B组患者17例，均未达到严重脓毒血症的诊断标准，其中男10例，女7例，平均年龄（46.1±9.2）岁；正常对照组40例，其中男23例，女17例，平均年龄（44.9±8.8）岁。3组性别、年龄差异均无统计学意义（均＞0.05），具可比性。

1.2方法抽取患者肘静脉血5 ml，将其分别加入2 ml、3 ml的两只抗凝试管中，分别在试管中注入1％依地酸钠，去抗凝血2 ml进行离心，800 r/min速度离心5min后取上层富含血小板血浆（PRP）［5］，在3 500 r/min速度离心15 min后去上清液，加入磷酸盐缓冲液（PRP），再通过3 000 r/min速度离心10 min后洗涤2次，加入1％的多聚甲醛固定30 min后制成血小板悬液，放入4℃的冰箱中待测。剩余3 ml的抗凝血在低温下以速度3 000 r/min的速度离心20min后，将血浆分离出保存于-20℃的冰箱中待测。将固定后的血小板悬液通过1 500 r/min的速度离心10 min后去除上清液，在其中加入抗血小板膜受体的荧光标记抗体，在常温下放置30 min后加入PBS离心10 min，除去上清液，再加入1 ml PBS将血小板悬浮，采用美国Becton-Dickinson公司生产的Calibur型流式细胞分析仪进行检测［6］。采用双抗夹心免疫放射分析法检测血浆血栓素B（2TXB2）和6-酮-前列腺素F1（6-keto-PGF1）。

1.3统计方法采用SPSS21.0统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用检验；计数资料比较采用2检验。＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组外周血中各项检测指标比较

脓毒血症患者中死亡13例，病死率为32.5％。脓毒血症患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于正常组（均＜0.05），6-keto-PGF1浓度低于正常组（＜0.05），见表1。

2.2器官功能正常与不全患者外周血中各项检测指标比较B组在血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于A组（均＜0.05），6-keto-PGF1低于A组（＜0.05），见表2。

3　讨论

脓毒血症是危害人类健康疾病之一，该病的发生是由于各种病危患者所发生的并发症［6］。研究发现，进入21世纪以来，脓毒血症高病死率并未得到有效解决，相反该病的发病率在逐年上升，已成为了ICU病房中非心脏病死亡的主要疾病［7-8］。本文显示，脓毒血症患者病死率为32.5％。

表1　脓毒血症患者与正常组外周血中各项检测指标比较

表2　器官功能正常与不全患者外周血中各项检测指标比较

血小板中CD62P又称GMP140或PADGM蛋白，在静止血小板中定位于颗粒，活化的血小板中定位于质膜上。在静止的血小板中平均每个血小板表面仅能表达900～1120个CD62P分子；当凝血酶活化时，此时血小板中颗粒与质膜会发生融合，在短时间内会使血小板质膜上表达的CD62P分子增至（10～13）×103个［9-10］。它介导血小板在血管内皮细胞上滚动及黏附作用，增强血小板与单核细胞间的作用［11］，血小板活化后CD62P分子大量表达于表面，并与pSGL-1d的受体结合参与血小板黏附白细胞反应，血小板活化后CD62P分子大量表达于表面，并与pSGL-1d的受体结合参与血小板黏附白细胞反应。TXB2和6-酮-前列腺素F1降低见于各种原因所致血管内皮细胞及其下层组织损伤时导致PGI2合成酶减少。Vardi等［12］研究发现，在脓毒血症患者外周血中CD62P分子表达增加，同时该病的严重程度与CD62P分子表达呈正相关。本文显示脓毒血症患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P明显高于正常人，同时器官功能不全患者也明显高于器官功能正常患者（＜0.05）。CD63是血小板内溶酶体颗粒的膜蛋白，在机体处于正常状态下时，血液中血小板表面仅有少量表达，当血小板处于活化状态时，CD63会跟随颗粒反应而在血小板表面大量表达，同时能够介导中性粒细胞对活化内皮的黏附，也是一种理想的检测血小板活化程度的指标。本文也证明CD63的表达与脓毒血症的发生有关，也与病情严重程度呈正相关。

综上所示，脓毒血症患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63的检测，可以直观显示膜糖蛋白CD62P、CD63水平与脓毒血症的关系，为该病的治疗和预后提供了一个有效的依据。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.08.006

R692

A

1671-0800（2016）08-0991-03

2016-02-25

（本文编辑：孙海儿）

316000浙江省舟山，舟山医院

黄君华，Email：46571466@qq.com