紫外可见分光光度法测定酶解桑葚酒中多糖含量*

杨晓东，肖珊美，刁银军，许玲玲，杨彩红

（金华职业技术学院，浙江金华 321007）

紫外可见分光光度法测定酶解桑葚酒中多糖含量*

杨晓东，肖珊美，刁银军，许玲玲，杨彩红

（金华职业技术学院，浙江金华 321007）

采用紫外可见分光光度法测定酶解桑葚酒中的多糖含量。向酶解桑葚酒中加入硫酸，使样品中的多糖水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，加入苯酚作为显色剂，检测波长为490 nm，标准工作曲线线性方程为y=0.056 8x-0.035，相关系数r=0.999 4。测定结果的相对标准偏差为0.03%（n=5），平均加标回收率为98.69%。该方法用于检测酶解桑葚酒中多糖含量，简便、快速。

桑葚酒；酶解；多糖；紫外可见分光光度法

桑葚为桑科多年生木本植物桑树的果实，俗称桑果、桑枣等。桑葚味甘酸，性寒，具有补肝益肾、养血生津、滋阴熄风、滋阴补血、润肠通便、生津止渴等功效，为滋补强壮、养心益智之佳果。桑葚含有丰富的维生素、多种氨基酸及微量元素，同时含有芦丁、白藜芦醇、花青素及多糖等生物活性成分。桑葚多糖是桑葚滋阴补血等补益功用的重要物质基础［1-4］。

由于桑葚没有果皮保护，成熟季节恰逢高温高湿的春夏之交，极易腐烂变质，桑葚酒也就成了民间保存桑葚多糖等功效成分以便常年服用的重要饮品。而桑葚多糖的含量则是衡量桑葚酒品质的重要指标。传统浸泡法制作的桑葚酒，因植物细胞壁的阻碍作用，桑葚多糖难以顺利进入酒体之中。发酵酿制法制作的桑葚酒，因发酵过程中不能避免花青素等活性成分的氧化损失，也存在不足之处。笔者采用复合果胶酶酶解白酒浸提法制作桑葚酒，酒体中可以得到更多的多糖和花青素。

采用酶辅助提取植物多糖与花青素，可降低能耗，减少污染，简化工艺程序。常用的酶有纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶和淀粉酶等［5-6］。如刘晓露等［7］用纤维素酶提取桑葚多糖，平均得率为14.64%；王凤杰［8］采用纤维素酶提取，芦荟多糖含量为9.146 g/L；侯轩等［9］用复合酶（纤维素酶与果胶酶）提取白术多糖，多糖的得率为43.00%。

多糖含量的测定方法主要有高效液相色谱法及苯酚-硫酸分光光度法。高效液相色谱法测定多糖需加衍生试剂进行衍生后才能测定，实验条件难以控制，成本较高，污染较大。苯酚-硫酸分光光度法是利用多糖在硫酸的作用下，水解成单糖分子，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚形成有色化合物，再用分光光度计进行检测，该法简便、快速、准确、灵敏。目前文献中未见酶解桑葚酒中多糖含量测定的报道，酶解桑葚酒含糖量比普通浸泡桑葚高，本实验将苯酚-硫酸法应用于酶解桑葚酒多糖含量的测定并对实验条件进行优化，为酶解桑葚酒的品质保障提供依据。

1　实验部分

1.1主要仪器与试剂

紫外可见分光光度计：TU1901型，配1 cm石英比色皿，北京普析通用有限公司；

酶解桑葚酒：体积分数为28%，自制；

浓硫酸：分析纯，扬州市华富化工有限公司；

苯酚溶液：0.06 g/mL，准确称取3.0 g苯酚固体，加少量蒸馏水溶解，移至50 mL容量瓶中，加水定容至标线，避光保存；

葡萄糖标准样品：分析纯，德州润昕实验仪器有限公司；

葡萄糖标准储备液：500 μg/mL，准确称取标准葡萄糖固体0.1 g，加少量蒸馏水溶解，移至250 mL容量瓶中，加水定容至标线，使用时用蒸馏水稀释成50 μg/mL葡萄糖标准工作溶液。

1.2实验方法

1.2.1葡萄糖的吸收曲线

准确吸取葡萄糖标准溶液1.8 mL，补充蒸馏水至2.0 mL，然后加入0.06 g/mL苯酚溶液0.5 mL及浓硫酸1.0 mL，摇匀，于室温下放置20 min，冷却后以紫外可见分光光度计在400～600 nm之间扫描，得紫外可见吸收曲线如图1。由图1可知，葡萄糖最大吸收波长为490 nm。

图1　葡萄糖标准吸收曲线

1.2.2标准工作曲线的绘制

分别准确移取葡萄糖标准工作溶液0.4，0.6，1.0，1.2，1.5，1.8 mL，均用蒸馏水补充至2.0 mL，然后加入0.06 g/mL苯酚溶液0.5 mL及浓硫酸1.0 mL，摇匀，于室温下放置20 min，冷却后以紫外可见分光光度计在490 nm处测定吸光度。按上述步骤进行试剂空白试验。

1.2.3样品测定

准确移取酶解桑葚酒0.1 mL至10 mL比色管中，依次加入2.9 mL蒸馏水、0.5 mL苯酚溶液、1 mL浓硫酸，摇匀，于室温下放置20 min，冷却后以紫外分光光度计在490 nm处测定吸光度。

2　结果与讨论

2.1样品处理

普通浸泡或酿制桑葚酒中往往含有果肉残渣、未溶解果胶等细小颗粒物。胶体溶液的分散相粒子直径范围是1～100 nm，粗分散系分散相粒子直径大于100 nm。胶体溶液分散相粒子对于入射光会产生散射现象（丁达尔效应），粗分散系分散相粒子则直接阻碍入射光通过。因此用紫外可见分光光度法检测普通浸泡或酿制桑葚酒中某些物质含量时，比色杯内的胶体和粗分散相粒子都会影响测定的准确性。采用滤膜过滤的办法可以除去粗分散相粒子，但是难以除去胶粒，测定结果仍然受到影响。

酶解桑葚酒制作过程中添加了果胶酶和纤维素酶等，能够较好地除去上述细小颗粒物，充分释放桑葚多糖。测定酶解桑葚酒可以直接取样，无须滤膜过滤，不影响测定结果的准确性。

2.2线性方程与检出限

按照1.2.2绘制标准工作曲线，以葡萄糖标准溶液的质量浓度对测得吸光度进行线性回归，葡萄糖标准工作溶液在0.92～15.25 μg/mL范围内呈良好线性关系，回归方程为y=0.056 8x-0.035，相关系数r=0.999 4。在本实验条件下，采用3倍于空白值的标准偏差（n=7）计算得检出限为0.090 μg/mL。

2.3精密度试验

分别精确移取酶解桑葚酒样0.1 mL于5只10 mL比色管中，依次加入1.9 mL蒸馏水、0.5 mL苯酚溶液、1.0 mL浓硫酸，摇匀，于室温下放置20 min，冷却后以紫外可见分光光度计在490 nm处测定吸光度，测定结果见表1。由表1可知，该方法测定结果的相对标准偏差为0.03%，表明精密度良好。

表1　精密度试验结果

2.4稳定性试验

精确移取酶解桑葚酒样0.1 mL于10 mL比色管中，依次加入2.9 mL蒸馏水、0.5 mL苯酚溶液、1.0 mL浓硫酸，摇匀，于室温下放置20 min，冷却后于490 nm处测定吸光度，每隔30 s测一次，结果表明在25 min之内测定结果稳定。

2.5加标回收试验

分别精确移取酶解桑葚酒样0.1 mL于2只10mL比色管内，其中一只比色管加入葡萄糖标准溶液0.1 mL，然后加水至2.0 mL；另一只直接用蒸馏水补充至2.0 mL。然后各加入0.5 mL 苯酚溶液、1.0 mL浓硫酸，摇匀，于室温下放置20 min，冷却后以紫外可见分光光度计在490 nm处测定吸光度，测定结果见表2。由表2可知，该方法测定桑葚多糖的回收率在95.90～101.40%之间，平均回收率为98.69%，方法准确度满足测定要求。

表2　加标回收试验结果

3　结语

用苯酚-硫酸紫外可见分光光度法测定酒中多糖含量，方法可行且简便快速。该方法是针对酶解桑葚果汁果酒中的多糖的测定建立起来的，也可应用于其它果汁果酒中多糖及花青素的分析测定。

［1］ 王晓杨，张媛，张志琴，等.桑葚提取物对动物实验性高脂血症预防作用的研究［J］.心血管康复医学杂志，2009，18（5）： 494-497.

［2］ 刘玉玲，纪国力.桑葚中多糖的提取及含量测定［J］.中国医药科学，2012，2（18）： 109-110.

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［4］ 黄正勇，梁贵秋，黎书明，等.桑葚果酒酿造质量控制的研究［J］.广西蚕业，2013，50（2）： 53-58.

［5］ 陈小婕，阴文娅.植物中花青素提取方法探讨［J］.食品科技，2013，34（2）： 395-399.

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［7］ 刘晓露，刘胜利，郭立强，等.酶法提取桑葚多糖的工艺研究［J］.中国野生植物资源，2012，31（1）： 30-32.

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［9］ 侯轩，周家容，田允波.复合酶法提取白术多糖的工艺研究［J］.广东化工，2008，35（12）： 91-94.

一种质谱分析仪器的自动进样装置

公布号：CN105304450A 公布日：2016.02.03

申请人：南京华欣分析仪器制造有限公司

本申请涉及一种质谱分析仪器的自动进样装置。主要由调速电机、联轴器、传动装置、样品托架、直流变压器，直流变压器与调速电机连接，传动装置通过联轴器连接到调速电机，样品托架连接在传动装置上，所述传动装置包括丝杠，可采用精密滚动丝杠；调速电机上带有调速旋钮。调速电机上还有控制开关，该控制开关通过正转、反转、停止3个方向控制电机，从而带动丝杠上的样品托架正转、反转或停止。通过设置调速电机和传动装置可有效控制自动进样的精确性；通过调节进样的速度，确保每次进样的可重现性，工作效率高，运行安全可靠。

一种柴油机尾气检测分析仪器

公布号：CN105334297A 公布日：2016.02.17

申请人：南京华欣分析仪器制造有限公司

本申请涉及一种柴油机尾气检测分析仪器，包括外壳及显示屏、外壳内安装供电装置、外壳上设有进气口和出气口，在进气口后方的通气管路上安装冷凝器，冷凝器后方的通气管路上通过一三通阀分别连通管路一和管路二，管路一接通用于检测气体中粉尘含量的粉尘检测仪，管路二内安装粉尘滤网，在粉尘滤网后方，管路二通过四通阀分别连通管路三、管路四和管路五，管路三接通用于检测气体中氮氧化合物含量的氮氧化合物检测仪，管路四接通用于检测气体中碳氧化合物含量的碳氧化合物检测仪，管路五接通用于检测气体中硫氧化合物含量的硫氧化合物检测仪。该仪器提高了在线测量结果的准确性。

一种智能化免疫层析及光谱分析一体化装置及其分析方法

公布号：CN105277680A 公布日：2016.01.27

申请人：北京倍肯华业科技发展有限公司

本发明公开了一种智能化免疫层析分析装置及其分析方法，用于食品药品化妆品及饮用水中的一些有毒有害物质的筛查。包括壳体、人机交互模块、光源系统、图像采集模块、数据分析处理模块和数据上传模块，其中人机交互模块主要包括液晶显示触摸屏和控制电路，在壳体上设有液晶显示触摸屏和电源开关键，在壳体右侧面设有样本检测窗，在壳体后面设有电源插口、USB插口和网络插口，图像采集模块主要包括面阵式CCD摄像头。由于采用面阵式CCD摄像头解决了定量检测仪体积大的问题，另外配合上位机软件可以实现测试卡的精确定标，解决了检测结果稳定性差的问题，另外还可以对测试区域进行图像采集、存储和重现。

一种尿液中段分析系统及分析方法

公布号：CN105334338A 公布日：2016.02.17

申请人：扬州大晟药用玻璃有限公司

Determination of Polysaccharide by UV-Vis Spectrometry in Mulberry Wine Made by Enzymatic Method

Yang Xiaodong， Xiao Shanmei， Diao Yinjun， Xu Lingling， Yang Caihong
（Jinhua Polytechnic，Jinhua 321007， China）

The content of polysaccharide in Mulberry wine made by enzymatic method was determined by UV spectrometry. Sulphuric acid was added in Mulberry wine sample， and polysaccharide in the sample was hydrolyzed to monosaccharide which was dehydrated to geberate furfural derivatives， then phenol was added as chromogenic agent， the detection wave length was 490 nm. The standard curve regression equation was y=0.056 8x-0.035 with the correlation coefficient of 0.999 4. The relative standard deviation of the detection results was 0.03%（n=5）， and the average recovery was 98.69%. This method is simple and fast， it can be used to determine polysaccharide in Mulberry wine.

Mulberry wine； enzymatic method； polysaccharide； UV-visible spectrophotometry

本发明公开了一种尿液中段分析系统及分析方法，所述分析系统包括条形码读取装置、取样装置、多关节机械臂、分析装置和控制器。取样装置的尿液漏斗上设有具有身份信息的条形码，当条形码读取装置初次读取到某个条形码时，控制器开始执行取样及分析操作，当之后读取不到该条形码时，进行清洗、吹扫操作。本发明的分析系统及方法操作简单，能够实现全自动分析。

O657.3

A

1008-6145（2016）02-0034-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.02.010

*浙江省科技厅分析测试科技计划项目（2014C37057）

联系人：杨晓东；E-mail： jhyxd@163.com

2015-12-31