超高效液相色谱法测定美白、祛痘化妆品中4种禁用激素

周江，黄艳美，龚越飞，季倩祎

［1.义乌市产品（商品）质量监督检验研究院，浙江义乌 322000；2.浙江大学医学院附属第四医院，浙江义乌 322000］

超高效液相色谱法测定美白、祛痘化妆品中4种禁用激素

周江1，黄艳美2，龚越飞1，季倩祎1

［1.义乌市产品（商品）质量监督检验研究院，浙江义乌 322000；2.浙江大学医学院附属第四医院，浙江义乌 322000］

建立了超高效液相色谱同时测定美白、祛痘化妆品中4种糖皮质激素氢化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯的方法。样品采用甲醇涡旋超声提取，色谱柱采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），流动相为乙腈-水溶液，梯度洗脱，流量为0.5 mL/min，用PDA检测器检测，检测波长为240 nm。方法检出限以3倍空白噪音计，氢化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯的检出浓度分别为0.12，0.18，0.30，0.30 mg/kg。在质量浓度为1.0～40.0 mg/L时，标准工作曲线相关系数r＞0.999 8，4种激素的回收率为85.3%～102.8%，测定结果的相对标准偏差为2.1%～5.0%（n=6）。该方法前处理简单，分离效果好，且灵敏度高，速度快，能满足美白、祛痘化妆品中4中糖皮质激素的检测需要。

糖皮质激素；美白、祛痘化妆品；超高效液相色谱

美白、祛痘化妆品一直以来深得女性青睐，为了提高产品的美白、祛痘效果，有些不法商家在化妆品中违禁添加糖皮质激素类物质。2015年8月22日国家食品药品监督管理总局关于11批次面膜类化妆品不合格的通告（2015年第56号）中，通报11批次面膜类产品存在非法添加糖皮质激素，被检测出的激素有氯倍他索丙酸酯（Clobetasol 17-propionate）、倍他米松双丙酸酯（Betamethasone dipropionate）、曲安奈德醋酸酯（Triamcinolone acetonide acetate）和氢化可的松（Hydrocortisone）［1］。

糖皮质激素可抑制纤维细胞增生、减少5-羟色胺形成，因而对皮肤具有一定的嫩白作用［2］。但长期使用糖皮质激素可能产生激素依赖，一旦停用，用药局部则出现红斑、炎性水肿，还可能伴有红色丘疹及脓疱等。许多患者还会出现不同程度的表皮萎缩、色素减退或色素沉着、毛细血管扩张等症状［3］。因此《化妆品卫生规范》（2007）［4］和欧盟化妆品法规（EC）NO1223/2009［5］均将其列为禁用物质。

化妆品中糖皮质激素检测方法主要有液相色谱-串联质谱法［6］、薄层层析法［6］、液相色谱法［7-15］、分光光度法［16］。而关于使用超高效液相色谱法对氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯、曲安奈德醋酸酯和氢化可的松这4种物质进行检测的文献比较少。相对于普通高效液相色谱法，超高效液相色谱法在分析速度、分离度和灵敏度方面有更好的表现。笔者采用超高效液相色谱法对这4种糖皮质激素进行测定，目的是建立一种简单、快速、准确检测糖皮质激素的方法。

1　实验部分

1.1主要仪器与试剂

超高效液相色谱（UPLC）仪：Waters Acquity型，带PDA检测器，Empower 色谱工作站，美国Waters公司；

涡旋混匀器：MS 3digital型，德国IKA集团；

高速离心机：H1650型，长沙湘仪离心机仪器有限公司；

超声波清洗器：AS3210型，天津奥特赛恩斯仪器有限公司；

糖皮质激素：氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯、曲安奈德醋酸酯和氢化可的松，纯度为97%～98%，上海安谱实验科技股份有限公司；

甲醇、乙腈：色谱纯，德国Merck公司；

乙酸：优级纯，国药集团化学试剂有限公司；

乙酸铵：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

糖皮质激素单标溶液：1 000 mg/L，准确称取各激素标准物质10 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容；

糖皮质激素混合标准溶液：准确移取各糖皮质激素单标溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得各组分质量浓度均为100 mg/L的糖皮质激素混合标准溶液；

化妆品样品：维C保湿活肤营养霜，义乌市浪漫化妆品有限公司；

实验用水为超纯水，由Mili-Q Water system（MILLIPORE公司，美国）制备，电阻率不小于18.2 MΩ·cm。

1.2标准溶液的配制

分别取0.1，0.2，0.5，1.0，4.0 mL糖皮质激素混合标准溶液，用甲醇定容至10 mL，配制成质量浓度分别为1.0，2.0，5.0，10.0，40.0 mg/L的系列混合标准溶液。

1.3色谱条件

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；保护柱：VanGuard保护柱；检测器：PDA检测器；检测波长：240 nm；流动相：乙腈-水；梯度洗脱程序：乙腈-水初始体积比为20∶80，乙腈所占比例在5 min内线性增长至80%，从5～6 min线性增长至100%，6 min后恢复为初始配比，保持2 min；流量：0.5 mL/min；进样体积：5 μL；柱温：30℃。

1.4样品预处理

准确称取约0.5 g样品于具塞比色管中，用甲醇定容至10 mL，涡旋2 min，常温超声提取20 min，以10 000 r/min离心5 min，取上清液过0.22 μm滤膜备用。

2　结果与讨论

2.1样品提取条件的选择

美白、祛痘化妆品主要形态有膏霜、乳液、溶液状等，考虑到膏霜、乳液状样品不宜分散，笔者采用涡旋超声提取方式对样品进行提取。样品先通过涡旋分散，再通过超声提取，能提高提取效率。同时考察不同的提取剂（甲醇、乙腈、无水乙醇）、不同涡旋时间（1，2，4 min）和不同提取时间（10，20，25 min）等提取条件的提取效果。试验结果表明，以甲醇为提取剂，涡旋2 min，超声20 min时，待测成分提取完全。

2.2色谱条件的选择

2.2.1色谱柱

分别考察了ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱和ACQUITY UPLC HSS T3 C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色谱柱，结果表明，4种激素在两种色谱柱中均能获得理想的分离效果，笔者选用（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）色谱柱进行分析。

2.2.2洗脱条件

分别对乙腈-水、甲醇-水、甲醇-乙酸铵溶液和甲醇-乙酸溶液等流动相进行考察，结果表明乙腈-水作为流动相更有利于待测物的分离。考虑到激素种类较多且极性差较大，等度洗脱容易产生干扰，不利于各激素的分离。采用乙腈-水梯度洗脱的方法，并对梯度条件进行优化，6 min内可完成分离检测。

2.2.3检测波长

利用PDA检测器扫描，氢化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯的最大吸收波长分别为245，240，239，239 nm，因此综合考虑选取240 nm作为检测波长。

2.3色谱分离效果

在1.3色谱条件下，4种糖皮质激素混合标准溶液的色谱图见图1。由图1可知，氢化可的松、曲安奈德醋酸酯、氯倍他索丙酸酯、倍他米松双丙酸酯分离良好。该方法保留时间重现性好，结合光谱图能够对检出峰进行有效识别。阳性样品色谱图见图2。由图2可知，本方法干扰少，能够有效分离4种激素，对于干扰可通过比较光谱图进行鉴别。

图1　4种糖皮质激素混合标准样品色谱图

图2　阳性样品色谱图

2.4线性方程

分别将1.0，2.0，5.0，10.0，40.0 mg/L糖皮质激素混合标准溶液依次进样，以各组分的色谱峰面积为纵坐标、各组分的质量浓度为横坐标，进行线性回归，标准工作曲线线性方程见表1。各组分线性范围均为1.0～40.0 mg/L，由表1可知，在此浓度范围内，线性相关系数均大于0.999 8。

表1　标准工作曲线线性方程和相关系数

2.5检出限和定量限

根据《化妆品卫生规范》（2007）对检出限和定量下限的定义，检出限以3倍空白噪音、定量限以10倍空白噪音计算。各激素的检出限、定量限及取0.5 g样品时的检出浓度和最低定量浓度见表2。由表2可知，本方法的检出限远低于薄层分析法的检出限［6］，可有效满足检测要求。

表2　4种糖皮质激素的检出浓度、定量浓度 mg/kg

2.6加标回收和精密度试验

在0.5 g化妆品中，按高中低3个水平添加糖皮质激素标准样品，添加量分别为100，50，20 μg，每组分别重复添加6次。回收率和精密度测定结果见表3。由表3可知，4种糖皮质激素加标回收率为85.3%～102.8%，测定结果的相对标准偏差为2.1%～5.0%，表明本法测量精密度和准确度均较高。

表3　加标回收和精密度试验结果

3　结语

采用甲醇涡旋超声提取，超高效液相色谱法同时测定美白、祛痘化妆品中4种糖皮质激素，该方法样品前处理简单，被测组分之间及其与样品基质之间分离效果好，检测灵敏度高，6 min完成测定，适于化妆品中4中糖皮质激素的快速测定。

［1］ 国家食品药品监督管理总局.国家食品药品监督管理总局关于11批次面膜类化妆品不合格的通告（2015年第56号）［R/OL］.［2015-08-22］.http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0087/127700.html.

［2］ 郑星泉，周淑玉，周世伟.化妆品卫生检验手册［M］.北京：化学工业出版社，2003： 294.

［3］ 陆洪光.面部糖皮质激素依赖性皮炎［J］.临床皮肤科杂志，2006，35（10）： 682-684.

［4］ 中华人民共和国卫生部.化妆品卫生规范［M］.北京：军事医学科学出版社，2007： 34.

［5］ The European Parliament and of the Council. Regulation（EC） No 1223/2009［J］. Official Journal of the European Union，2009：L342/91.

［6］ GB/T 24800.2-2009 化妆品中四十一种糖皮质激素的测定液相色谱/串联质谱法和薄层层析法［S］.

［7］ 赵晓亚，林雁飞，胡小钟，等.反相高效液相色谱法同时测定化妆品中的9 种糖皮质激素［J］.分析试验室，2009，28（2）： 111-115.

［8］ 王超，马强，王星.反相高效液相色谱法同时测定化妆品中的16种激素［J］.色谱，2006，24（6）： 654-655.

［9］ 徐春祥，仓义鹏，车文军，等.高效液相色谱法测定洗发产品中5种违禁添加药物［J］.日用化学工业，2009，39 （6）： 442-444.

［10］ 何笑荣，邹定，刘文芳，等.高效液相色谱法-二极管阵列检测器同时分析测定11种糖皮质激素［J］.中国医学院药学杂志，2008，28（2）： 109-111

［11］ 吴大南，郑和辉，李洁.高效液相色谱法检测化妆品中6种糖皮质激素［J］.中国卫生检验杂志，2006，16（3）： 309-310.

［12］ 李娟，商少明，陈新，等.固相萃取-高效液相色谱法同时测定化妆品中［J］.分析试验室.2013，32（5）： 77-80.

［13］ 马强，王超，王星，等.超高效液相色谱法同时测定化妆品中的15种激素［J］.色谱，2007，25（4）： 541-545.

［14］ 刘家溍，席绍峰， 郭长虹，等.超高效液相色谱法快速测定生发育法产品中丙酸氯倍他索［J］.广东化工，2013，40（11）：187-188.

［15］ 吴大南，郑和辉，王萍，等.超高效液相色谱法检测化妆品中8种糖皮质激素［J］.中国卫生检验杂志，2008，18（2）： 197-198.

［16］ 刘军.分光光度法测定化妆品中甾体激素含量［J］.中国卫生检验杂志，2000，10（5）： 571-572.

大卖场童装检出致癌染料

在湖北武汉市质监局最近进行的童装产品质量安全风险监测中，14%样品不合格，有的样品竟检出高含量可分解致癌芳香胺染料，被列为严重不合格。质监人士提醒家长：购买童装时要闻一闻是否有刺激性气味或异味，如有，可能是产品残留的化学品，应谨慎购买。

此次风险监测样品总计50个，主要来自武汉各实体店（包括批发市场、超市、商场专柜）和电商网店（淘宝网、天猫商城、京东商城），主要监测指标为可分解致癌芳香胺染料、甲醛含量、pH值、耐汗渍色牢度等。

可分解芳香胺的毒性和致癌性远强于甲醛。因为甲醛有刺激性气味，易分辨，而且易溶于水，消费者买回纺织品后，一般用水洗一下就可去除大部分甲醛；但可分解芳香胺染料制成衣服后，不但不溶于水，而且无色无味，从纺织品外观上无法分辨，只有通过技术检验才能发现，而且无法消除，这种染料在与人的皮肤接触后，可引发多种恶性疾病、吸收致癌。

其它不合格样品的不合格项主要为色牢度指标不合格即易掉色、耐汗渍色牢度不合格等。质监人士提醒，家长购买童装时，应查看商品及包装上是否有中文标注，以及安全类别、产品质量等级、质量检验合格证。购买婴幼儿服装应选择注明婴幼儿用品的产品，以轻软保暖、浅色、亲肤的纯棉制品较好。新购买的贴身衣物最好洗了再穿，不仅卫生，还可以洗掉产品浮色及其它化学残留物。

（林）

欧盟加强汽车检测和认证制度避免尾气排放丑闻重演

德国大众汽车尾气排放丑闻不仅严重打击了消费者对欧洲汽车业的信心，也暴露出欧盟及其成员国在汽车检测和认证制度方面存在很多漏洞。主管就业、投资和增长的欧盟委员会副主席卡泰宁在新闻发布会上说，大众汽车尾气排放丑闻说明欧盟目前有关汽车业的法规过于宽松，“德国大众的所作所为迫切地说明需要做出改变，我们要确保不再发生此类事件，这关系到欧洲的竞争，关系到消费者，关系到我们的环境。”

欧盟委员会当天提出的全面改革方案名为“欧盟各类汽车认证框架”，目的是确保汽车制造商严格遵守所有欧盟有关汽车安全、环境和生产方面的要求。卡泰宁说：“根据新建议，未来汽车的检验将更加独立，并且要加强对已经进入流通领域的汽车的监督。在单一市场中，货物可以自由流通，因此每个人都必须遵守规则。”

（国际在线）

国家咖啡检测重点实验室在普洱开建

从云南省出入境检验检疫局获悉，经过地方政府和检验检疫局积极筹备，国家咖啡检测重点实验室（普洱）在普洱市正式开工建设。

国家咖啡检测重点实验室（普洱）建成后，将填补我国咖啡产品专业实验室的空白，为普洱咖啡产业检验检疫、仲裁、科研、人员培训和对外技术交流搭建起多功能服务平台，为咖啡产品的对外贸易提供有力的技术支撑。

（林）

Determination of Four Prohibited Substances in Whitening or Acne Cosmetics by Ultra-performance Liquid Chromatography

Zhou Jiang1， Huang Yanmei2， Gong Yuefei1， Ji Qianyi1
［1. Yiwu Product （Commodity） Quality Supervision and Test Institute， Yiwu 322000， China；2. The Fourth Affiliated Hospital， Zhejiang University School of Medicine， Yiwu 322000， China］

An ultra-performance liquid chromatography method was established for simultaneously determination of four glucocorticoids： hydrocortisone， triamcinolone acetonide acetate， clobetasol 17-propionate and betamethasone dipropionate in whitening or acne cosmetics. After methanol extraction， glucocorticoids were separated on Waters ACQUITY UPLC BEH C18Column （100 mm×2.1 mm， 1.7 μm） by gradient elution using acetonitrile-water as the mobile phase at a flow rate of 0.5 mL/min， and detected by PDA detector at detecting wavelength of 240 nm. The detection limits as S/N=3 were 0.12， 0.18， 0.30， 0.30 mg/kg for hydrocortisone， triamcinolone acetonide acetate， clobetasol 17-propionate and betamethasone dipropionate， respectively. Within a glucocorticoid concentration range of 1.0-40.0 mg/L， the average recoveries for glucocorticoids were 85.3%-102.8%， the correlation coefficients of linear calibration curve were all more than 0.999 8， the relative standard deviations were 2.1%-5.0%（n=6）. The pretreatment is simple and the separation is quick and effective. The method is satisfactory for determination of four glucocorticoids in whitening or acne cosmetics.

glucocorticoids； whitening or acne cosmetics； ultra performance liquid chromatography

O657.7

A

1008-6145（2016）02-0052-04

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.02.015

联系人：周江；E-mail： 8849409@qq.com

2016-01-11