液相色谱法测定车用尿素中缩二脲含量*

孙 雯，李美华，罗 勇，盛立彦，潘 洁

(上海化工研究院技术开发中心，上海 200062)



液相色谱法测定车用尿素中缩二脲含量*

孙 雯，李美华，罗 勇，盛立彦，潘 洁

(上海化工研究院技术开发中心，上海 200062)

建立一种车用尿素中缩二脲含量的反相高效液相色谱方法。采用Venusil HILIC色谱柱，检测波长为195 nm，乙腈-10 mmol/L醋酸铵水溶液为流动相。方法的线性相关系数R=0.9998，检出限为0.05 μg/mL，定量限为0.17 μg/mL，加标回收率为98.53%～100.88%，相对标准偏差RSD值为0.42%～0.58%。结果表明，该方法具有较高的灵敏度与准确度，且操作简单、快速、重现性好，准确度高，是尿素中缩二脲检测的一种理想分析方法。

尿素；缩二脲；高效液相色谱

目前，缩二脲常用的检测方法是分光光度法[7-8]及液相色谱法[9-11]，如：GB/T 22924-2008中分别介绍了分光光度法及液相色谱法测定复混肥料中缩二脲含量的方法，其中液相色谱法采用甲醇-10 g/L磷酸二氢钾水溶液(pH=6.0)做流动相[12]，该方法的回收率98.8%～106.8%，相对标准偏差0.5%～0.8%[13]；文献报道，以水-氨水-高氯酸为流动相，采用L-column ODS柱，在190 nm下测定尿素中缩二脲含量，该方法回收率99.0%～102.5%，相对标准偏差0.18%～1.08%[14]；近期有文献采用Venusil HILIC柱，以乙腈-水为流动相，在200 nm下测定乳制品中缩二脲含量，该方法回收率95.0%～101.0%，相对标准偏差2.2%～6.4%，方法的检出限为0.2 mg/kg[15]。由此可见，目前国内对缩二脲的检测，大多使用高浓度缓冲盐体系的流动相或在流动相中使用强酸性试剂，这对仪器及色谱柱的影响较大；而采用乙腈-水做流动相方法的精密度则不及前者。

本文采用HILIC色谱柱，以乙腈-10 mmol/L醋酸铵水溶液为流动相，对缩二脲、尿素分离方法进行了探索研究。该法不但避免了离子对试剂的使用，而且可获得更低的检测限，具有简便、快速、准确性好的特点，可满足车用尿素中微量缩二脲杂质的控制分析。

1 实 验

1.1 仪器与试剂

岛津LC-20AT液相色谱仪，N2000工作站；Sartorius CP225D十万分之一电子天平；KQ-300VDE超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司。

醋酸铵，HPLC，上海安谱科学仪器有限公司；醋酸，HPLC，美国Tedia公司；乙腈，HPLC，上海强顺化学试剂有限公司；缩二脲标样，纯度>99.0%，日本TCI公司；尿素标样，纯度>99.0%，北京百灵威科技有限公司；实验用水为超纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Venusil HILIC(4.6 × 150 mm，5 μm)，艾杰尔科技有限公司；检测波长：195 nm；流动相：乙腈：10 mmol/L醋酸铵水溶液(pH=5)=95：5(V/V)，流速1.0 mL/min，进样量：20 μL；柱温：30 ℃。

“用曲的话来说，这难道不是老公的义务吗？但这打死也不能说。Y反复强调，S跟她说过的，跟曲的婚姻没有爱情，也几乎没有性生活，曲对S没有热情，而S也不渴念她的身体——就是因为这句话，Y才决定跟他好的，否则，她还搞什么呢，绝不会让S碰她。”

1.3 溶液的配制

1.3.1 标准溶液的配制

称取缩二脲标样0.05 g(准确至0.0002 g)于100 mL容量瓶中，加入适量流动相，超声振荡10 min，使标样完全溶解后冷却至室温，定容，摇匀备用。分别移取上述溶液0.5 mL、0.8 mL、1.3 mL、1.8 mL、2.5 mL于10 mL容量瓶中，以流动相稀释定容，摇匀，经0.45 μm滤膜过滤后备用。

1.3.2 试样溶液的配制

移取100 μL样品溶液，于10 mL容量瓶中，加入适量流动相定容，摇匀，经0.45 μm滤膜过滤后备用。

1.4 测定

1.4.1 标准曲线的绘制

在1.2所述色谱条件下，每个浓度的标样重复进样3次，以缩二脲含量为横坐标，三次平行测定的峰面积平均值为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程。

1.4.2 试样的测定

将1.3.2中配制的样品溶液，在与标准曲线相同的条件下进行试样测定。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的筛选

分别选用Venusil HILIC(E)(2.1 m × 150 mm，5 μm)及Venusil HILIC (4.6 m ×150 mm，5 μm)进行检测，结果发现：前者不能实现基线分离；后者分离效果较好，实现了缩二脲及尿素的有效分离，且色谱峰尖锐。其色谱图如图1所示。

图1 使用不同色谱柱缩二脲、尿素液相色谱图

2.2 检测波长的确定

对同一样品，在190～210 nm波长范围内选取5个点分别进行实验，结果如图2所示。从图2中可看出，检测波长为195 nm时，缩二脲及尿素峰面积最大，因此，选择195 nm为检测波长。

图2 检测波长和峰面积的关系

2.3 流动相的选择

为达到较好的分离度，从而满足定量分析的要求，本文分别考察了乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-10 mmol/L醋酸铵水溶液(醋酸调pH=6.5～4.0)等不同流动相体系对分离效果的影响。结果表明，采用乙腈:10 mmol/L醋酸铵水溶液(pH=5)=95：5(V/V)的流动相体系时，尿素、缩二脲的分离效果较好。

2.4 线性关系与检出限

配制5个不同浓度的缩二脲标准溶液，按1.2所述色谱操作条件，测定相应的峰面积，以缩二脲含量为横坐标，峰面积为纵坐标做图，其线性方程为y=25909x+56065，相关系数R=0.9998。取适量缩二脲标准溶液，采用逐级稀释法，按进样后所得谱图中缩二脲色谱峰信噪比S/N=3计算方法的检出限，S/N=10计算方法的定量限，得出检出限为0.05 μg/mL，定量限为0.17 μg/mL。

2.5 回收率及精密度的测定

在已知缩二脲含量的车用尿素样品溶液中，分别加入8.18 μg/mL、24.53 μg/mL和39.88 μg/mL的缩二脲标准溶液，每个浓度样品重复测定5次，结果如表1所示。由实验结果可见，样品的回收率为98.53%～100.88%，相对标准偏差为0.42%～0.58%。

表1 回收率与精密度(n=5)

3 结 论

随着相关机动车排放法规的进一步实施，车用尿素作为柴油车SCR系统的尾气净化液的应用日益广泛。本文采用对强极性、强亲水性化合物具有良好保留效果的HILIC柱，建立了车用尿素产品中微量缩二脲的液相色谱定量方法。通过对流动相条件进行优化，使尿素与缩二脲达到良好的分离效果。该方法避免了高浓度缓冲盐的使用对仪器所造成的影响，且操作简单、快速、重现性好，准确度高，是车用尿素产品质量检测的一种理想分析方法。

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Determination of Biuret in Automobile Urea by High Performance Liquid Chromatography*

SUNWen,LIMei-hua,LUOYong,SHENGLi-yan,PANJie

(Shanghai Research Institute of Chemical Industry, Shanghai 200062, China)

A reversed-phase HPLC method was established to determine the biuret content in automobile urea. The Venusil HILIC column was used and the wavelength was 195 nm, using methyl cyanide-10 mmol/L ammonium acetate solution as mobile phase. This method had high sensitivity and precision with a linear correlation of 0.9998, the minimum determination concentration of 0.05 μg/mL, the minimum quantitation concentration of 0.17 μg/mL, the recovery of standard addition of 98.53%～100.88%, and the RSD values of 0.42%～0.58%. The results showed that it was characterized by good precision and accuracy, simple operation, fast, good reproducibility and higher accuracy. So it was a better method in determination of biuret in urea.

urea; biuret; high performance liquid chromatography

上海市科委优秀技术带头人计划(12XD1421700)。

孙雯(1983-)，女，工程师，主要从事仪器分析与研发工作。

李美华(1968-)，女，高级工程师，主要从事仪器分析与研发工作。

O657.7+2

A

1001-9677(2016)020-082-03