续断种子质量检验方法研究

， ， ， (.湖北省农科院中药材研究所/湖北省农业科技创新中心中药材分中心， 湖北 恩施 445000；.湖北民族学院医学院， 湖北 恩施 445000)

·种子检验·

续断种子质量检验方法研究

艾伦强1，王玭2，由金文1，张美德1
(1.湖北省农科院中药材研究所/湖北省农业科技创新中心中药材分中心， 湖北 恩施 445000；2.湖北民族学院医学院， 湖北 恩施 445000)

目的：建立续断种子的检验方法。方法：参考国际植物种子检验规程和中国农作物种子检验规程的方法。结果与结论：采用分样器法扦样，种子的净度高于90%；种子千粒重测定宜用百粒法；种子水分测定宜选用高温烘干法，时间为3 h；种子发芽率测定宜用纸床作发芽床，温度为25 ℃；种子生活力测定采用TTC染色法，在0.2%四唑溶液中45 ℃避光染色1 h。

续断； 种子； 质量检验方法

药材续断为川续断科植物川续断(DipsacusasperityWall.ex Henry)的干燥根，主要用于肝肾不足，腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤，筋伤骨折[1]。据《湖北中药资源》记载，湖北省的续断主要分布在恩施州，具有产量大，品质优的特点；中国医学科学院药用植物研究所艾铁民教授在对恩施续断进行采样分析后，认为其品质与川东地区相媲美，是续断的主产区之一[2]。目前续断主要来源于野生资源，作为大宗药材，年需求量已达5 000 t左右，野生资源已无法满足市场的需求，人工栽培被提到计事日程上。而建立大规模的规范化中药材种植基地，关键在于种子的质量好坏[3]。川续断在自然环境是用种子进行繁殖的，但由于未进行续断种子检验规程和质量分级标准的研究与制定，无法对其质量进行有效控制，从而影响中药材的质量。开展种子种苗质量检验方法研究与制定相应质量检验规程是国家规范中药材生产工作的一项重要任务[4]，故续断种子质量检验方法研究十分必要。本研究主要对川续断种子进行了扦样、净度、千粒重、水分、发芽率、生活力等主要质量指标的测定方法的研究，为续断种子质量检验提供依据，进而开展续断种子检验规程与质量分级标准研究。

1 材 料

2014年11月收集恩施不同产地、不同生长方式、不同海拔和生态条件下的续断种子，取各产地少量种子混合作为试验样品。种子经湖北省农科院中药材研究所副研究员由金文鉴定为川续断科川续断的种子。

2 方 法

2.1 扦 样

2.1.1 常规扦样方法

参照中华人民共和国国家标准《农作物种子检验规程》GB/T 3543.2-1995扦样的规定执行[5]。

2.1.2 样品保存

试验样品经分取后，装于样品袋内，通风保存。

2.2 净度分析

参照中华人民共和国国家标准《农作物种子检验规程》GB/T 3543.3-1995净度分析规定执行[5]。将试样分离成种子和杂质，其中杂质包括：沙、土、脱落的外皮等。随机取待检测续断种子试样50 g，将种子和杂质分离，将每份试样中各成分分别称重，计算各成分所占的百分率，试样的增失差距未偏离原始重量的5%，测定值有效[6]。

2.3 重量测定

参照中华人民共和国国家标准《农作物种子检验规程》GB/T 3543.3-1995其他项目规定执行[5]。选用百粒法和千粒法测定续断种子的重量，百粒法：用手摇筛和手从试验样品中随机取8个重复，每个重复100粒，计算重复间变异系数，若小于4.0，则测定值有效；千粒法：用手摇筛和手从试验样品中随机取2个重复，每个重复1 000粒，计算2个重复间差数与平均数之比，若小于5%，则测定值有效。

2.4 水分测定

参照中华人民共和国国家标准《农作物种子检验规程》GB/T 3543.3-1995水分测定规定执行[5]。选用低温烘干法和高温烘干法。低温烘干法：将试样放置在温度(105±2)℃ 的恒温真空干燥箱内，分别烘2，4，6，8，10，12，14，16，18 h取出放入干燥器内冷却、称重，计算续断种子含水量(即水分)。高温烘干法：将试样放置在温度(133±2)℃ 的恒温真空干燥箱内，分别烘1，2，3，4 h取出放入干燥器内冷却、称重，计算续断种子含水量(即水分)[6]。

表2 百粒法测定续断种子千粒重结果

样品/份(g)12345678平均值(g)标准差变异系数(%)0．42620．39750．39710．39320．40820．40670．40620．39950．40430．012．4

2.5 发芽率测定

参照中华人民共和国国家标准《农作物种子检验规程》GB/T 3543.3-1995发芽试验的规定执行[5]。发芽床试验：设置纸床、砂床、珍珠岩、海绵及蛭石共5个处理，光照24 h，20 ℃；发芽光照试验：设置黑暗条件、光照12 h、光照24 h共3个处理，纸床，20 ℃；发芽温度试验：设置15，20，25，30 ℃共4个处理，纸床，黑暗条件。上述各个试验每处理重复4次，每重复100粒种子。

2.6 生活力测定

用TTC法对种子进行生活力测定。随机取试样4个重复，每个重复50粒，用解剖刀将种子沿种脊线切开，选用其中一半，浓度梯度设定为0.05%、0.10%、0.20%、0.40%，染色时间为0.5，1，2，4 h，温度为45 ℃，避光染色，观察并记录染色的数目，未被染色的种子为死种子，被染色的即为活种子。

3 结果与分析

3.1 扦 样

扦样采用分样器法，续断种子最大千粒重约为4 g，2 500个种子单位不超过10 g，加上杂质，进行净度分析的样品大约12 g，送检样品应为10倍即120 g。

3.2 净度分析

根据2.2所述的方法测定结果见表1，试样的增失差距偏离原始重量的0.1%，小于规定的5%，故此方法切实可行。

表1 续断种子净度测定结果

分取样品质量(g)净种子质量(g)杂质质量(g)净度后总质量(g)净度(%)47．7444．113．6847．7992．30

3.3 重量测定

选用百粒法和千粒法测定种子千粒重。

百粒法测定的结果见表2。

千粒法测定结果见表3。

表3 千粒法测定续断种子千粒重结果

样品/份(g)12平均值(g)重复间差数差数和平均数之比(%)4．0193．9884．0040．0310．77

此2种测定方法均可测定，由于百粒法测定操作较简单，所以选用百粒法。

3.4 水分测定

3.4.1 低温烘干法

根据2.4所述的方法进行低温烘干，测定结果见图1。

图1 续断种子低温烘干水分测定结果

3.4.2 高温烘干法

根据2.4所述的方法进行高温烘干，测定结果见图2。

图2 续断种子高温烘干水分测定结果

3.4.3 2种烘干方法结果比较

续断种子在高恒温条件下烘干3 h前，含水量有明显的上升趋势，3 h之后种子的含水量趋于稳定，见图2；在低恒温条件下，种子含水量一直呈上升趋势，未趋于稳定，说明种子在实验时间范围内仍然有水分，未完全烘干，见图1。综合2种方法，鉴于低温烘干法所需时间太长且效果不佳，含水量测定方法选用高温烘干法烘3 h。

3.5 发芽率测定

发芽床选择试验测定结果见表4。

表4 续断种子发芽床结果比较

处理发芽率(%)1234平均值差异显著性5%1%纸床7065657869．50aA砂床5651656459．00abA珍珠岩4353576153．50bA海绵6442616858．75abA蛭石5880708272．50aA

光照选择试验测定结果见表5。

表5 续断种子光照条件结果比较

处理发芽率(%)1234平均值差异显著性5%1%黑暗条件7471759077．50aA光照12h7872707072．50aA光照24h7065657869．50aA

温度选择试验测定结果见表6。

表6 续断种子发芽温度结果比较

处理发芽率(%)1234平均值差异显著性5%1%15℃3850403240．00bB20℃9090908488．50aA25℃7894708682．00aA30℃8280828682．50aA

比较5种发芽床，纸床和蛭石作为发芽床都有很好的效果，考虑到纸床操作简单方便，选择纸床作为发芽率检验的发芽床。比较不同光照条件下续断种子的发芽情况，并无显著差异，故可以不考虑光照条件。比较4个温度，20 ℃及以上的温度下，发芽率均达到了80%以上，考虑到25 ℃接近室温，所以选用此温度作为发芽率检验的温度。发芽率最佳检验条件是：纸床为发芽床，在25 ℃的条件下连续观察25 d，可以较好地测定发芽率。

3.6 生活力测定

3.6.1 TTC法

染色溶液浓度试验测定结果见表7。

染色时间试验测定结果见表8。

表7 续断种子染色浓度结果比较

处理号浓度(%)时间(h)温度(℃)着色率(%)10．0514511．3c20．1014535．0b30．2014595．0a40．4014573．8a

表8 续断种子染色时间结果比较

处理号浓度(%)时间(h)温度(℃)着色率(%)10．200．54582．5b20．2014595．0a30．2024598．8a40．2044598．8a

3.6.2 染色结果

用浓度为0.20%的TTC时染色效果能达到90%以上，与在0.05%和0.10%浓度下的染色效果具有显著性差异，与在0.40%浓度下的染色效果无显著性差异，TTC染色1 h时的染色效果即达到90%以上，与染色0.5 h的效果具有显著性差异，与染色3 h和4 h的效果无显著性差异，故选用0.20%TTC染色1 h。

4 讨 论

4.1续断种子在25 ℃，纸床作为发芽床的条件下最适合发芽，萌发需要一定湿度，在种子播种前进行适当浸泡有利于种子萌发，但浸泡时间以10 h左右为宜。

4.2续断种子无后熟现象，采收后的储藏一定要注意水分控制，切不可密封，否则容易造成提前发芽和腐烂。

4.3一般要等到续断种子完全成熟才能采集，时间在10月至12月，海拔1 000 m以下地区在10月底可以开始采集，海拔在1 000 m以上地区要到11月底。

4.4在采用TTC法测定生活力的实验中发现，溶液浓度越大，染色温度越高，染色时间则越短。然而，并不是TTC的浓度越大，温度越高，所测定生活力就越高。染色深浅程度主要表现生活力的强弱，并不是判断生活力有无的标准，浓度过大反而影响染色情况的正确鉴别，温度过高也会破坏种子生活力[3]。

4.5在进行发芽试验过程中，应定期管理和检查，并经常补给适量水分，切不可干燥。如果发现种子发霉，应将霉烂种子取出；如果仅种子表面生霉，则洗净后仍放回发芽床；如果种子内部已腐烂，应予剔除，将情况记录在试验记载本上。

[1]中国药典,一部[S].2015:329-330.

[2]董玉琼.川续断种质资源评价与质量标准研究[D].北京:中医药大学,2007.

[3]何伶俐.白花前胡种子检验规程和分级标准研究[D].武汉:湖北中医药大学,2013.

[4]任德全,周荣汉.中药材生产质量管理规范(GAP)实施指南[M].北京:中国农业出版社,2003:26.

[5]全国农作物种子标准化技术委员会,全国农业技术推广服务中心.GB/T 3543.2《农作物种子检验规程》实施指南[S].

[6]艾伦强,李婷婷,由金文,等.半夏种苗质量检验方法研究[J].中国种业,2012(9):45-46.

Testing Methods for Seed Quality ofDipsaciradix

AILunqiang1,WANGPin2,YOUJinwen1,ZHANGMeide1

2016-04-28

艾伦强(1980—)，男，湖北武汉人；助理研究员，研究方向：药用植物资源调查、育种与栽培。

张美德，E-mail：406572231@qq.com。

10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.09.122

S 567.23+9

A

1001-4705(2016)09-0122-04