HPLC法测定枸骨叶中金丝桃苷的含量

蔡　伟（武汉市中医医院　武汉430014）



HPLC法测定枸骨叶中金丝桃苷的含量

蔡伟（武汉市中医医院武汉430014）

摘要：目的：建立HPLC法测定枸骨叶中金丝桃苷含量。方法：色谱柱Kromasil-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸（28:72）；流速1.0mL·min-1；检测波长356nm；柱温25℃。结果：金丝桃苷在0.20～4.00μg范围内线性关系良好（r=0.9998），平均回收率为100.17%，RSD为1.10%；枸骨叶中金丝桃苷的平均含量为1.18mg·g-1。结论：本法操作简便，准确性高，重现性好，可用于测定枸骨叶中金丝桃苷的含量。

关键词：HPLC枸骨叶金丝桃苷含量测定

枸骨叶始载于《本草拾遗》，又名猫儿刺、枸骨刺，为冬青科植物枸骨Ilex cornuta Lindl.ex Paxt.的干燥叶，具有清热养阴、益肾、平肝之功效，临床上常用于肺痨咯血、骨蒸潮热、头晕目眩等症[1]。现代药理学研究表明，枸骨叶还具有降血脂、抗心肌缺血、抗氧化等作用。枸骨叶的化学成分复杂，主含黄酮及三萜类成分[2]。关于枸骨叶化学成分的含量测定，国内学者做了研究，已有报道。本文采用HPLC法建立枸骨叶中金丝桃苷的含量测定分析方法，现报道如下。

1　仪器与试药

LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津）；XS205型分析天平（瑞士梅特勒）。

枸骨叶（安徽亳州药材市场，经鉴定符合现行药典标准）；金丝桃苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111521-201205）；乙腈（色谱纯），水为自制蒸馏水。

2　方法与结果

2.1色谱条件：色谱柱为：Kromasil-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（28∶72），流速1.0mL·min-1，检测波长356nm，柱温25℃。

2.2对照品溶液的制备：取已干燥的金丝桃苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成含金丝桃苷0.2mg·mL-1的溶液，摇匀，即得。

2.3供试品溶液的制备：取粉碎至中粉的枸骨叶药材约2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入75%甲醇100mL，称定，超声提取1h，放冷，再称定重量，用75%甲醇补重，摇匀，滤过（0.45μm），取续滤液，即得。

2.4线性关系考察：精密吸取金丝桃苷对照品溶液1μL、2μL、4μL、10μL、20μL，进样测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程Y=548378X+1398.2，r= 0.9998，结果显示金丝桃苷进样量在0.20～4.00μg范围内线性关系良好。

2.5精密度考察：精密吸取金丝桃苷对照品溶液10μL，重复进样6次，测定色谱峰面积，RSD为0.63%，结果显示仪器精密度良好。2.6稳定性考察：精密吸取枸骨叶供试品溶液，分别于0、2、4、6、12、24h进样，测定色谱峰面积，RSD为1.13%，结果显示枸骨叶供试品溶液中金丝桃苷在24h内稳定。

2.7重复性考察：分别取同一份枸骨叶药材粉末样品，照“2.3”项下制备方法，制备6份供试品溶液，测定色谱峰面积，RSD为1.69%，表明该方法重复性良好。

2.8加样回收率考察：分别取已知含量的枸骨叶药材粉末样品6份，精密称定，分别加入金丝桃苷对照品适量，照“2.3”项下制备方法，制备供试品溶液，分别测定色谱峰面积，计算加样回收率，结果显示金丝桃苷平均回收率100.17%，RSD为1.10%。

2.9枸骨叶药材含量测定：取3批次枸骨叶药材，粉碎至中粉，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定色谱峰面积，计算金丝桃苷含量，结果显示3批枸骨叶药材样品中金丝桃苷含量分别为1.10、1.19、1.25mg·g-1，平均含量为1.18mg·g-1。

3　讨论

金丝桃苷是一种从天然植物中提取的黄酮醇苷类化合物，普遍存在于金丝桃科、蔷薇科、唇形科等植物的果实与全草中，具有明显的抗炎、抗血栓以及抗肝损伤等作用[3～5]。

现行药典收载了枸骨叶，但尚未对所含成分进行含量测定。本文采用HPLC法建立了枸骨叶中金丝桃苷含量测定分析方法，该方法操作简便，准确性高，重复性好，可为今后对其质量控制提供数据依据。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京:中国医药科技出版社，2010：233.

[2]李国文，吴弢，谢燕，等.中药枸骨叶研究进展[J].国际药学研究杂志，2011，38（5）：356-361.

[3]KU SK，KWAK S，KWON O J，et al.Hyperoside inhibits highglucose-induced vascular inflammation in vitro and in vivo[J]．Inflammation，2014，37（5）：1389-1400.

[4]KU S K，KIM T H，LEE S，et al.Antithrombotic and profibrinolytic activities of isorhamnetin-3-O-galactoside and hyperoside [J].Foodchem toxicol，2013，53：197-204.

[5]黄明春，陈剑鸿，胡小刚，等.金丝桃苷对CCl4诱导大鼠急性肝损伤抗氧化应激研究[J].局解手术学杂志，2013，22（6）：588-590.

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1672-8351（2016）01-0003-01