猪伪狂犬病不同疫苗免疫程序的免疫效果研究

吴志金，吴丹，韦政，何宏宇，杨海，孙龙，伍少钦

（广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西南宁530317）

猪伪狂犬病不同疫苗免疫程序的免疫效果研究

吴志金，吴丹，韦政，何宏宇，杨海，孙龙，伍少钦

（广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西南宁530317）

为寻找更好的疫苗和探索最佳的免疫程序，应对当前猪伪狂犬病的严峻防疫形势，研究选取不同疫苗组合以不同剂量、不同频次在生产猪群中开展免疫对比试验，通过中和抗体滴度评判免疫效果。结果显示，在伪狂犬病活苗免疫的基础上，加强免疫1针灭活苗，能显著提高猪只的中和抗体水平，其效果要比再次免疫活苗的效果好，而且增加灭活苗免疫的次数可以增强这种效果，但在免疫次数相同的情况下，增加免疫剂量并不能明显提高免疫效果，经典的Bartha株疫苗对伪狂犬病经典毒株和国内分离到的变异毒株均有效果。研究可为猪场选择更好的疫苗和制定确实有效的免疫程序提供参考。

猪伪狂犬病；免疫程序；疫苗；中和抗体；变异毒株

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的一种烈性传染病[1]。猪是PRV的天然贮存者和传播者[2]，感染PRV后可引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪大量死亡，肥育猪呼吸困难、生长停滞等，是危害养猪业的重大传染病之一。通过基因缺失疫苗的广泛应用，我国猪伪狂犬病曾得到有效控制。但从2011年开始，我国许多地区出现了新的猪伪狂犬病疫情，一些原本阴性的规模化猪场也纷纷转阳，造成严重的经济损失。研究者们在不同地区分离到了新的PRV流行毒株，经研究，这些新的毒株与之前流行的毒株有一定程度的抗原变异[3-6]。

广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场是我国首批获得农业部疫控中心认证的“猪伪狂犬病净化示范场”，公司自2005年完成猪伪狂犬病净化以来，一直维持猪伪狂犬病阴性。为了更好地应对日益严峻的防疫形势，尤其是PRV变异毒株的流行，维持净化成果，我们以中和抗体滴度为免疫效果评价指标，选取不同疫苗组合以不同剂量、不同频次于2014年7月至2015年5月在猪场生产猪群开展免疫对比试验，以期寻找更好的疫苗和最佳的免疫程序。

1 材料和方法

1.1 疫苗和试验动物

选取3种疫苗，分别为M活苗、H灭活苗和J灭活苗，M和H苗所用毒株均为经典毒株Bartha株，J苗为国内某地区分离株灭活菌的中试产品；试验猪只均从猪场生产猪群随机选取，各个试验所选猪只批次相同。

1.2 试验方法

本研究选取不同疫苗组合以不同剂量、不同频次开展了一系列免疫对比试验，试验方案如下。

1.2.1 不同免疫剂量对比试验1选择妊娠60 d左右不同胎次的母猪，分为两组，A组连续免疫3次2头份M活苗，B组连续免疫3次1头份同批号的M活苗，每次免疫间隔2周，于第3次免疫后2周采集血清-20℃保存。

1.2.2 后备猪加强免疫试验3随机挑选约60头后备猪，按品种各半分为两组，在215日龄免疫1头份M活苗后4周，A组注射生理盐水作为对照组，B组加免1头份H灭活苗作为试验组，免疫后4周分别采集血清-20℃保存。

1.2.3 不同免疫次数对比试验2随机挑选约60头后备猪，分为两组，所有猪只免疫2头份M活苗，A组3周后加强免疫1头份H灭活苗，4周后采集血清保存；B组间隔3周连续免疫2次1头份H灭活苗，4周后采集血清保存。

1.2.4 肥育猪使用不同疫苗二免对比试验随机挑选60头肥育猪，分为两组，于12周龄免疫1头份M活苗后4周，A组加免1头份M活苗，B组加免1头份H灭活苗，4周后分别采集血清-20℃保存。

1.2.5 肥育猪使用不同厂家疫苗二免对比试验随机挑选90头肥育猪，分为3组，于12周龄免疫1头份M活苗后4周，A组加免1头份M活苗，B组加免1头份J灭活苗，C组加免1头份H灭活苗，4周后分别采集血清-20℃保存。

1.3 样品检测

采集的试验猪只血清被送往国内不同的3家高校科研院所，分别使用经典的Bartha毒株和研究所分离到的PRV变异毒株（N5B等）进行细胞中和试验，检测血清中和抗体滴度，评判免疫效果。

2 结果

2.1 不同免疫剂量对比试验

从检测结果看（表1），在免疫次数相同情况下，增加免疫剂量并不能提高免疫效果。

表1 不同免疫剂量对比试验中和抗体检测结果

2.2 后备猪加强免疫试验

后备猪加强免疫试验中和抗体检测结果见表2，在活苗免疫的基础上加强免疫灭活苗，可以明显提高免疫后的中和抗体滴度，且免疫产生的中和抗体对PRV经典株和国内分离的变异株均有效。

2.3 不同免疫次数对比试验从检测结果可以看出（表3），增加灭活苗免疫的次数能够提高中和抗体滴度，尤其是针对变异株。灭活苗的使用，对经典株和国内新分离的变异毒株都有较好保护作用。

2.4 肥育猪使用不同疫苗二免对比试验

从表4的检测数据可以看出，肥育猪在活苗免疫的基础上，使用灭活苗加强免疫比活苗加强免疫获得的中和抗体水平高很多。

2.5 肥育猪使用不同厂家疫苗二免对比试验

试验结果表明（表5），肥育猪在活苗免疫的基础上，使用H灭活苗做二免要比用M活苗好，使用J灭活苗作二免的效果不太理想。

表2 后备猪加强免疫试验中和抗体检测结果

表3 不同免疫次数对比试验中和抗体检测结果

表4 肥育猪使用不同疫苗二免对比试验结果

表5 肥育猪使用不同厂家疫苗二免对比试验检测结果

3 讨论

2011年以前，由于PRV gE基因缺失疫苗的广泛应用，猪伪狂犬病在我国得到了比较好的控制。但从2011年开始，我国多数地区相继暴发PR疫情，许多原本PR阴性的规模化猪场也不能幸免。有研究指出，此次流行的PRV毒株与经典毒株相比，多个基因有较大的变异，毒力也更强，且现有的商品化疫苗对其感染的保护力相对更差[7]。面对如此严峻的防疫形势，有必要进一步筛选更好的疫苗和探索最佳的免疫程序，降低猪群遭受外来变异PRV侵袭的可能。

在本研究中，通过不同免疫程序的对比试验发现，在伪狂犬病活苗免疫的基础上，加免1针灭活苗，能显著提高猪只的中和抗体水平，其效果要比加免活苗的效果好，而且增加灭活苗免疫的次数可以增强这种效果，但在免疫次数相同的情况下，增加免疫剂量并不能明显提高免疫效果。不同厂家生产的PRV疫苗，尽管毒株相同，但其最终诱导产生的中和抗体水平可能会相差很远，这和疫苗毒的传代代次、抗原含量、抗原质量及佐剂等多个因素有关。研究中选用的PRV疫苗毒株有经典Bartha株和变异毒株，其诱导的中和抗体对经典毒株和国内分离到的变异毒株均有效果，这和刘芳等[8]的研究结果相符，但Luo等[7]和赵鸿远等[9]的研究则表明现有的经典毒株疫苗对变异株不能提供完全的免疫保护，到底新的流行毒株抗原性是否发生变异尚有待进一步研究。

[1]殷震，刘景华.动物病毒学[M].第2版.北京：科学出版社，1997：700-713.

[2]斯特劳B E，阿莱尔S D，蒙加林W L，等.猪病学[M].第8版.北京：中国农业大学出版社，2000：195-196.

[3]An T Q,Peng J M,Tian Z J,et al.Pseudorabies Virus Variant in Bartha-K61-Vaccinated Pigs,China,2012[J].Emerging Infectious Diseases,2013,19：1749-1755.

[4]童武，张青占，郑浩，等.免疫后发病仔猪中伪狂犬病病毒的分离和鉴定[J].中国动物传染病学报，2013，21（3）：1-7.

[5]彭金美，安同庆，赵鸿远，等.猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析[J].中国预防兽医学报，2013，35（1）：1-4.

[6]吴云飞，朱玲，徐志文，等.伪狂犬病病毒四川株的分离鉴定及增殖特性[J].中国兽医科学，2013，43（6）：557-564.

[7]Luo Y Z,Li N,Cong X,et al.Pathogenicity and genomic characterization of a pseudorabies virus variant isolated from bartha-k61-vaccinated swine population in china[J].Veterinary Microbiology,2014,174(1-12)：107-115.

[8]刘芳，薛辉，秦树英，等.广西猪伪狂犬病病毒的分离鉴定及gE基因序列分析[J].养猪，2014（5）：105-108.

[9]赵鸿远，彭金美，安同庆，等.猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征[J].中国预防兽医学报，2014， 36（7）：506-509.

（编辑：郭玉翠）

今年“地球超载日”再次提前到来

【美国趣味科学网站8月12日报道】题：2015年“超载日”：地球如今正式进入“赤字”状态

今天是“地球超载日”：在这一时刻，人类对自然资源的消耗量超出了地球生产和再生自然资源的能力。

就像失去了尾巴的壁虎，我们的地球可以自愈：它可以让植物再生长，可以恢复鱼类资源，重新吸收空气中的碳，让干净的水重回湖泊、河流和地下蓄水层。但这些过程需要时间。

自文明发祥以来，地球补充资源的速度快于人类消耗资源的速度。然而，根据世界自然基金会发布的《地球生命力报告》，我们最终跨过了那条看不见的界线。

从1970年开始，我们每年从地球获取的资源比其可以恢复的更多。自那以后，我们消耗资源的速度与地球资源再生的速度之间的差距日渐扩大，从裂缝变成鸿沟。第一个“地球超载日”于当年12月底降临。今年，它于8月13日到来。

温室气体排放和粮食生产是“超载”的首要原因，此外还有气候变化。作为“回报”，它引发了连锁反应：气候变化催生极端天气，极端天气又造成粮食安全问题，最终导致政治和社会冲突。

要解决粮食危机有两个基本战略—缓解和适应。在前一个战线上，世界自然基金会正与一些世界上最大的粮食生产商、贸易商、消费者品牌和零售商合作，使粮食生产更有效率，利用更少的土地、水和能源，同时释放更少的废物和温室气体。

世界自然基金会帮助创建了多种重要大宗商品的标准与认证体系，包括糖、棕榈油、大豆、野生鱼类和养殖鱼类。该机构还努力为牛肉建立类似体系。

这些举措再加上其他努力，可以帮助我们减少粮食对环境的影响，将“地球超载日”延后，直到我们再次在地球力所能及的范围内生活。

适应是个独特的挑战，我们也在追求新的解决办法。11月，世界自然基金会将与美国进步研究中心合作举办模拟及演习“粮食连锁反应”。在这两天里，来自全世界的数十位决策者、科学家、食品公司高管及其他利益相关方将齐聚华盛顿，解决假设出现的粮食短缺危机及其产生的副作用。

我们也许不知道下次粮食短缺将是什么情况，但科学证据和历史证据告诉我们，粮食危机将会到来—它们将愈发严重且持续更长时间。我们还知道，基于数十年的发展轨迹，“地球超载日”明年将更早到来，而后年会比明年还早。

（转自参考消息[N]，2015-08-14）

S858.28

A

1002-1957(2016)01-0105-03

2016-01-05

吴志金（1988-），男，江西鹰潭人，执业兽医师，硕士，研究方向为畜禽传染病的诊断与防治.E-mail：xiesanshao1988@163.com

伍少钦（1975-），男，浙江瑞安人，高级兽医师，硕士，主要从事规模化猪场健康养殖、常见猪病的控制与净化研究. E-mail：wsqin326@126.com