猪原发性水疱病与塞尼卡病毒A

郭效珍，何启盖

（华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉430070）

猪原发性水疱病与塞尼卡病毒A

郭效珍，何启盖

（华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室，湖北武汉430070）

自2007年加拿大发生猪原发性水疱病（PIVD）并认为与塞尼卡病毒A（Senecavirus A,SVA）有关，随后巴西和美国先后暴发该病，其特征是感染猪可出现水疱性变化和新生仔猪死亡[1]。该病与口蹄疫（FMD）、猪水疱病（SVD）、猪水疱疹（VES）及水疱性口炎（VS）极为相似，临床上很难区分[2]。在2016年国际猪病会议（IPVS）中成为讨论交流的热点疾病之一。本文简要综述了该病的研究现状，希望对同行有帮助。

1 流行情况

猪原发性水疱病早前在澳大利亚、新西兰和美国就有报道，但是直到2007年加拿大暴发PIVD，才将SVA与猪原发性水疱病联系到一起。巴西和美国分别于2014年和2015年先后暴发该病[3]。

2015年初，巴西暴发SVA，对暴发该病的5个猪场进行调查，有的病猪发病第1周临床症状表现为肌无力、昏睡、流涎、皮肤充血、神经症状和腹泻等，症状持续3～10 d。有的仔猪突然死亡，死亡率可达20%～30%。剖检10头突然死亡的仔猪发现，肾脏点状出血、间质性肺炎、舌和冠状垫溃疡、舌炎，组织学变化见膀胱尿路上皮细胞球状变性等。比较有趣的是，神经症状死亡的仔猪免疫组织化学方法（IHC）检测发现，SVA分布于脑部脉络层的上皮细胞和周围血管内皮细胞中，推测可能是通过改变血管上皮细胞的完整性，进而感染神经脉络层，随后传递到相邻的神经纤维网从而导致神经症状的产生。同时，IHC结果表明所有感染仔猪的尿道上皮细胞中均能检测到SVA，提示尿液可能是该病的一种传播方式和猪场感染的污染源。此外，IHC和RT-PCR鉴定发现SVA存在于腹泻仔猪的肠道，表明SVA可以在肠道上皮细胞增殖。该研究表明，SVA是一种泛嗜性病毒，在感染早期造成多系统性疾病[4]。

自2015年7月，猪原发性水疱病在美国爱荷华州和南达科塔暴发，随后在其它州市也有报道。患病猪临床表现为，由于脚垫和蹄冠水疱破损而导致的急性跛行，伴随食欲不振和发热。眼观病理变化主要表现为蹄冠充血、皮肤水疱破裂导致溃疡，鼻口部和口腔产生水疱。爱荷华州立大学兽医诊断实验室检测发现SVA阳性，而FMDV（口蹄疫病毒）、VSV（水疱性口炎病毒）和SVDV（猪水疱病病毒）阴性。

对美国和巴西发生水疱病和新生仔猪死亡的猪场，采集临床样品和环境样品进行SVA检测，包括猪群病变部位，环境中从人行通道、排气扇等采集的拭子，鼠粪便及鼠小肠等，结果老鼠和蝇类飞虫中都携带SVA，表明它们在SVA的传播中发挥重要作用[5]。

2 临床症状与病理学特点

SVA感染后猪只蹄部形成水疱（图1，摘自Nestor Montiel等，EID，2016）。2015年巴西仔猪感染SVA后的病理变化（图2，摘自Raquel A.Leme等，EID，2016），眼观多灶点舌炎（图2-A），蹄冠处形成溃疡（图2-B），病理组织学显示舌上皮细胞球样变性（标尺：20 μm）（图2-C），膀胱尿路上皮细胞SVA阳性（图2-D）（标尺：10 μm）。

图1 美国SVA案例的病变

图2 巴西SVA案例的病变

3 病毒特点

塞尼卡病毒A（SVA），原名塞尼卡谷病毒，是一种无囊膜的单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科。基因组约7.2 kb，编码4个结构蛋白（VP1-4）和7个非结构蛋白（2 A-C，3 A-D），其中VP1被公认为是小RNA病毒科免疫原性最强的蛋白[1]。

爱荷华州立大学兽医诊断实验室将SVA毒株VP1和全基因组测序发现，所有的新分离毒株之间同源性高达99%～100%，但是与早期SVA（1988—2001年）序列差异显著。美国SVA毒株与巴西SVA毒株同源性达97%～98%。进化树分析表明，SVA在近30年来已发生变异，致病性增强[2]。

2015年，我国广东某猪场暴发了猪水疱性疾病，表现为感染猪只鼻部和口腔形成溃疡，厌食、跛行，新生仔猪急性死亡，后证实是感染塞尼卡病毒A所致。从阳性病料中成功扩增获得SVA全基因组，并命名为CH-01-2015，该病毒与其它8株分离自加拿大、巴西和美国的SVA同源性高达94.4%～97.1%，这是中国关于该病毒的首次报道[6]。

4 SVA病例的复制

根据科赫法则，分离到的SVA接种猪群可以成功复制PIVD。9周龄猪（29头）鼻腔接种SVA15-41901 SD毒株（5×107pfu/头），感染前5 d，对其中12头猪（Dex-SVA）注射地塞米松，定期采集血清和水疱液进行PCR、SVA抗体检测和病毒分离，分别于感染后2、4、6、8、10 d随机选择SVA感染猪进行剖检。感染后3 d，所有猪只血清PCR检测，SVA阳性，感染后5 d，取自水疱液处的棉拭子呈阳性。感染后5 d，剩余的27头猪（感染后2 d已经剖杀了2头）中有24头在蹄冠和趾间形成水疱，10 d后部分猪只下唇和鼻口部糜烂，而注射地塞米松的猪只呈现更为严重的水疱。间接免疫荧光试验检测显示，所有猪只于感染后15 d血清抗体转阳。水疱液中可以分离到SVA[3]。

5 病原检测

5.1 PCR技术

SVA的诊断主要依靠PCR检测与临床病变相结合。PCR检测包括常规PCR和实时荧光定量PCR两种。PCR主要扩增VP1和VP3基因[7]。

5.2 新型RNA原位杂交技术

原位杂交技术可以检测组织切片中特异的RNA或DNA序列。新型的原位杂交RNA-based显色技术（RNAScope）与杂交信号放大系统相结合来检测SVA。美国明尼苏达大学兽医诊断实验室保存的30份SVA PCR检测阳性，且由福尔马林固定的石蜡包埋组织。样本取自发生水疱病的母猪和急性死亡的仔猪。探针靶向SVA的VP1基因。杂交信号呈现红色，随后苏木精复染。同时设立10份阴性对照。水疱病组织检测结果显示，SVA存在于患病母猪的表皮组织，主要位于表皮棘细胞层，小泡性损伤。对于新生仔猪急性死亡案例检测结果显示，皮肤、脾脏、肝脏、心脏、小肠和淋巴结ISH-RNA检测均呈阳性，对照组检测阴性。虽然PCR和ISH-RNA检测均呈阳性，但是急性死亡仔猪呈现的唯一病理变化就是坏死性舌炎，且该部位可以检测到SVA。ISH-RNA是用于SVA快速诊断的一个有效手段[8]。

综上所述，SVA与最近猪场暴发的PIVD关系密切，临床上与给养猪生产造成巨大威胁的FMD症状极为相似，所以在对临床上出现水疱为特征的疾病检测时，应将SVA与FMD、SVD、VES及VS作鉴别诊断。

[1]Gimenez-Lirola L G,Rademacher C,Linhares D,et al.J Clin Microbiol[J],2016,54(8):2082-2089.

[2]Guo B,Rademacher C,Zheng Y,et al.Yoon Identification of novel Senecavirus A from pigs with vesicular disease in the US[C].24th International Pig Veterinary Society Congress(IPVS),2016:109.

[3]Montiel N,Buckley A,Guo B,et al.Vesicular Disease in 9-weekold Pigs Experimentally Infected with Senecavirus A[C].24th International Pig Veterinary Society Congress(IPVS),2016:110.

[4]Leme R A,Oliveira T E,Alcantara B K,et al.Emerg Infect Dis[J],2016,22(7):1238-1241.

[5]Joshi L R,Mohr K A,Clement T,et al.J Clin Microbiol[J], 2016,54(6):1536-1545.

[6]Wu Q,Zhao X,Chen Y,et al.Genome Announc[J],2016,4(1): e01509-15.

[7]Bracht A J,O'Hearn E S,Fabian A W,et al.PLoS One[J], 2016,11(1):e0146211.

[8]Resende T,Marthaler D,Vannucci F,et al.Novel RNA-based in situ hybridization for detection of Senecavirus A in pigs[C]. 24th International Pig Veterinary Society Congress(IPVS), 2016:109.

（编辑：柳青）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0061-02

2016-07-28

国家生猪现代产业技术体系（CARS-36）

郭效珍（1989-），女，山东潍坊人，在读博士研究生，主要从事猪传染病诊断与致病机制研究. E-mail:guoxiaozhen@webmail.hzau.edu.cn

何启盖，教授，博士生导师.E-mail:he628@mail.hzau.edu.cn