我国猪源牛病毒性腹泻病毒的感染现状及检测技术

祖立闯，李娇，谢金文，李峰，沈志强，

（1.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600）

我国猪源牛病毒性腹泻病毒的感染现状及检测技术

祖立闯1，李娇1，谢金文2，李峰2，沈志强1，2

（1.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600）

牛病毒性腹泻病毒的宿主范围广泛，除感染牛外，还可以感染猪、羊、鹿及其它野生动物。猪感染BVDV后会出现类似慢性猪瘟的临床症状和病理变化，同时由于BVDV与猪瘟病毒的交叉反应性，BVDV还可降低猪瘟疫苗的免疫效果，猪群中BVDV的感染不但增加了BVD的防控难度，还使猪瘟的防控难上加难。笔者查阅相关文献资料并结合自身多年临床工作经验，将我国猪源BVDV的发病概况以及常用检测技术进行了全面的总结与概述，以期为我国猪源BVDV综合防控措施的制定提供参考依据。

猪；牛病毒性腹泻病毒；感染现状；检测技术

牛病毒性腹泻（Bovine viral diarrhea,BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）引起的多种动物易感的传染病[1]。BVDV与猪瘟病毒、羊边界病病毒同属于黄病毒科（Flaviridae）瘟病毒属（Pestivirus），三者具有免疫学交叉反应[2]。世界动物卫生组织将BVD列入必须报告的动物疾病名录，但仅将其作为牛报告疾病名录，这样可能使人们忽略BVDV还可引起猪、羊、鹿以及其它野生动物等感染发病[3]。猪感染BVDV后表现出类似慢性猪瘟的临床症状和病理变化，增加了临床中猪瘟鉴别诊断的难度，且猪感染BVDV后产生的抗BVDV抗体对猪瘟病毒具有一定的抑制作用，对猪瘟疫苗的免疫产生干扰作用，降低猪瘟疫苗的免疫效果[4]，故猪群中BVDV的感染不但增加BVD的防控难度，还使猪瘟的防控难上加难。鉴于此，笔者查阅相关文献资料并结合自身多年临床工作经验，将我国猪源BVDV的流行与发生情况以及常用检测技术进行全面的总结与概述，以期为我国猪源BVDV综合防控措施的制定提供参考。

1 病原特征

BVDV为单股、正链RNA病毒，在分类学上属于黄病毒科瘟病毒属，BVDV成熟的病毒粒子为球形或圆形颗粒，有囊膜，大小为40～60 nm。病毒基因组全长约12.5 kb，包含单一开放阅读框（ORF），ORF两侧分别为5'-UTR和3'-UTR。根据5'-UTR序列，BVDV可分为BVDV-1和BVDV-2两个基因型[5]。

2 我国BVDV发病情况

如表1所示，自从王新平等[6]于1995年在吉林成功分离鉴定出第一株猪源BVDV后，我国研究学者先后在广西、山东、福建、青海等地感染的病例中陆续检测出BVDV阳性核酸或分离鉴定出病毒，目前猪源BVDV已在我国养猪密集地区呈地方性发生与流行。

表1 我国部分地区BVDV发病情况

3 我国BVDV流行病学调查情况

如表2所示，自2004年至2014年猪源BVDV在我国不同地区猪群中的感染率在0～80.48%之间，表明猪源BVDV已在我国猪群中呈散发性、地方性流行，个别地区的阳性感染率较高，猪源BVDV在我国猪群中的流行现状不容忽视，应加强重视。

表2 我国部分地区BVDV流行病学调查概况

4 检测技术

猪感染BVDV后，表现出类似猪瘟的临床症状和病理变化，且临床中BVDV常与猪瘟病毒混合感染，仅凭临床特征很难实现猪源BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断，故对于猪源BVDV的确诊需借助实验室诊断技术。随着现代免疫学和分子生物学技术的快速发展与推广应用，猪源BVDV的实验室诊断技术得到了快速发展和完善，目前常用的猪源BVDV诊断技术主要有病毒分离鉴定、RT-PCR、荧光定量RT-PCR、ELISA等。

4.1 病毒分离鉴定

该方法是将疑似BVDV感染的临床病料接种BVDV易感细胞，再通过细胞病变观察、生物学特性鉴定、电镜观察、中和试验、RT-PCR检测、序列分析等方法对分离毒株进行鉴定。杨小燕等[9]采集福建省疑似猪瘟病毒感染的仔猪病料，将其接种MDBK细胞72 h后可产生明显的细胞病变，该分离毒株可被BVDV阳性血清中和，对氯仿、乙醚、胰酶、酸敏感，不耐热，RT-PCR可检测出325 bp BVDV片段，该片段的核苷酸序列与BVDV NADL株标准种毒的同源性为89.02%，表明分离毒株为猪源BVDV。邓宇等[8]将BVDV阳性仔猪病料样品接种MDBK细胞，该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变，在直接免疫荧光试验中与BVDV阳性血清呈阳性反应，电镜观察显示病毒粒子略呈圆形、有囊膜、直径约50 nm，5'-UTR序列进化分析显示病毒属于BVDV-1型，表明成功分离鉴定1株猪源非致病变型BVDV-1。病毒分离鉴定方法一直是BVDV诊断方法的“金标准”，但该方法中涉及到细胞培养、电镜观察、RT-PCR等方法，试验周期较长，操作较复杂，往往受到试验条件和专业技术人员水平等限制。

4.2 RT-PCR方法

RT-PCR方法检测快速、操作简单、敏感性和特异性较高，是最常用的动物疫病快速确诊技术，目前在BVDV的快速诊断中得到了推广应用。朱紫祥等[19]建立的猪源BVDV PCR诊断方法检测猪源BVDV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、PK15细胞，只有猪源BVDV为阳性，其余均为阴性，具有较高的特异性。邓宇等[20]建立的猪源BVDV套式PCR检测方法能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198 bp的特异性片段，扩增猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均为阴性，敏感性可检测到0.195 fg RNA模板量，具有敏感、特异和稳定等特点，可用于猪源BVDV的临床诊断和流行病学调查。RT-PCR方法特异、灵敏、快速，适合于一般实验室使用。

4.3 荧光定量RT-PCR方法

实时荧光定量PCR是在常规PCR技术基础上发展起来的一种核酸定量检测技术，与常规PCR方法相比具有能够准确定量、敏感性更强、不需要核酸电泳等优点。邓宇等[21]建立的猪源BVDV实时荧光定量PCR检测方法检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均为阴性，最低可检测到每个反应相当于10拷贝的标准品DNA，重复性试验的批内变异系数为0.20%～0.95%，与常规RT-PCR方法的符合率为86.7%，具有特异、敏感、快速、重复性好等优点，可用于猪感染BVDV的监测。荧光定量RT-PCR方法能够对样品中的病毒核酸进行定量检测，但该方法对仪器设备、试验试剂、操作人员技术水平等要求均较高，一般实验室由于受试验条件限制较难开展。

4.4 ELISA方法

ELISA方法具有操作简单、检测快速、高通量、价格低廉、敏感性和特异性高等优点，成为当前动物疫病诊断中最常用的血清学检测技术。曾亮明等[18]建立的猪源BVDV ELISA抗体检测方法中最佳包被质量浓度为31.25 μg/L，最佳封闭液为10%马血清，待检血清的最佳稀释度为1∶50，该方法检测猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性，与中和试验方法的符合率为97.9%，该方法特异性强、符合率高、重复性好，适合用于猪源BVDV的血清学抗体监测。ELISA方法简单、快速、特异、敏感、经济，非常适合于临床大规模样品的检测。

5 结语

猪群中BVDV的感染增加了动物疫病流行的复杂化，对猪群危害很大。同时由于BVDV与CSFV的交叉反应性，以及BVDV感染与CSFV感染的临床相似性，给猪瘟的诊断和防治提出了新的课题，增加了猪瘟综合防控的难度，引起了研究学者的极度重视，尤其引起了已经消灭或控制了猪瘟国家的极大关注。猪感染牛病毒性腹泻的原因很多，很重要的一点就是生物污染问题。一些猪瘟细胞疫苗的生产过程中使用大量的胎牛血清，制备血清的胎牛常常含有BVDV病原，在细胞的生产过程中，有些血清灭活不彻底导致BVDV在细胞生成，用这样的细胞制备的猪瘟疫苗存在生物安全问题。此外，饲喂污染BVDV的饲料也可以成为猪源BVDV的感染来源，一些牛的脏器等废料被加工成饲料，牛群中BVDV普遍存在，造成了BVDV的污染来源。猪源BVDV感染目前尚没有较好的治疗方法，只能采取以预防为主的综合性防控措施，故全面掌握我国不同地区猪群中BVDV的感染现状以及常规检测技术对我国不同地区猪源BVDV综合防控措施的制定至关重要。猪源BVDV已在我国猪群中呈散发性、地方性流行，个别地区的阳性感染率较高，其流行现状不容忽视。猪源BVDV的几种常规检测技术各有优缺点，研究人员可根据不同地区猪源BVDV的感染情况以及自身试验条件合理选择其中的一种，或者选择几种联合使用，务必确保诊断结果及时、准确，对于BVDV阳性感染猪应逐步淘汰、净化，进而保障我国养猪业的健康、稳定与可持续发展。

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[21]邓宇，张荣，丛雁方，等.猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].畜牧兽医学报，2011，42（7）：1046-1050.

（编辑：郭玉翠）

读书能让人长寿

【英国《泰晤士报》网站8月5日报道】题：寻找长寿的新方式？选一本书试试吧

研究发现，爱读书的人比不爱读书的人具有明显的“生存优势”。而且他们似乎比爱看杂志或报纸的人更长寿。研究人员指出，在长达数百页的阅读过程中，读者一直追随作者的思路、人物或情节，而不会忘记谁是甘道夫或者为什么全世界的工人要联合起来。这种“深度阅读”所付出的智力努力让大脑一直保持活跃，并帮助人们在未来的生活中更好地作出决定。

此外，书籍还能增强“同情心、社会认知和情商”。此前的研究表明，“同情心、社会认知和情商”与延长寿命有关，也许是因为它们可以缓解压力。

耶鲁大学的公共健康专家进行了一项长期调查，在过去11年中，他们跟踪记录了3 600名50岁以上男性和女性的健康与阅读习惯。研究期间，超过1/4的研究对象死亡。研究表明，每天读书的时间越长（哪怕只有半小时），寿命就越长。数据显示，截至1/5的研究对象死亡时，爱读书的人比不爱读书的人平均寿命长近2岁。

这种效果也许是可以预期的，因为爱读书的人往往更富有，教育程度也更高。因此，他们可能选择更好的饮食、避免吸烟，并做一些有益健康的事。

不过，即使在研究人员将这些因素从数据中剔除后，爱读书本身似乎仍能对健康产生显著影响。

研究报告发表在英国《社会科学与医学》月刊上。

（转自参考消息[N]，2016-08-08）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0078-03

2016-07-14

山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目（SDAIT-06-022-15）

祖立闯（1981-），男，黑龙江宾县人，助理研究员，硕士，主要从事动物疫病诊断技术研究.E-mail：zulichuang2008@126.com