早期生长反应-1蛋白和第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因在老年垂体瘤中的表达及其临床意义

党 帅 张 强 张跃欣 马进显

(南阳市中心医院神经外科，河南 南阳 473009)



早期生长反应-1蛋白和第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因在老年垂体瘤中的表达及其临床意义

党 帅 张 强1张跃欣 马进显

(南阳市中心医院神经外科，河南 南阳 473009)

目的 探讨早期生长反应(Egr)-1蛋白和第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)在老年垂体瘤中的表达和意义。方法 回顾性收集25例病理学诊断为非侵袭性垂体瘤，10例诊断为侵袭性垂体瘤的老年患者垂体瘤病理组织学样本及35例正常垂体组织标本。免疫组化法SP法检测Egr-1和PTEN在老年垂体瘤中的表达，并分析其意义。结果 35例老年性垂体瘤患者组织标本Egr-1 和PTEN水平明显增高，与健康垂体组织差异具有统计学意义(P<0.05)；侵袭性垂体瘤中Egr-1水平明显高于非侵袭性垂体瘤(P<0.05)；与非侵袭性垂体瘤相比，侵袭性垂体瘤PTEN的表达明显降低(P<0.05)。结论 Egr-1和PTEN两者联合检测对评价老年垂体瘤的预后有重要作用。

早期生长反应(Egr)-1蛋白；第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)；老年垂体瘤

临床上有明显症状的垂体瘤患者约占颅内肿瘤的10%〔1〕。临床表现为激素分泌异常、肿瘤压迫垂体周围组织、垂体脑卒中和其他垂体前叶功能减退表现〔2〕。早期生长反应(Egr)-1是一种Egr基因-1编码的蛋白质，目前认为，Egr-1在调节早期垂体的增殖、分化、凋亡、胚胎发育及多种良性及恶性肿瘤的发生、发展过程中起重要作用，包括生殖器肿瘤，消化系统肿瘤中等〔3～5〕。第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)是近年来新发现的多种抑制垂体增殖相关基因之一〔6～8〕。本研究探讨二者在垂体瘤发生发展中的作用及其可能机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年1月至2015年9月回顾性收集我院神经外科就诊的35例经病理确诊为老年垂体瘤的患者，其中病理学诊断为非侵袭性垂体瘤25例，侵袭性垂体瘤10例，男20例，女15例，年龄(62.3±15.7)岁。同时术中留取瘤旁正常垂体组织。已经过本院医学伦理委员会批准同意。纳入标准：①需经过病理诊断确诊老年性垂体瘤；②无合并其他部位及组织器官的原发性或继发性良恶性肿瘤；③均为首次确诊；④知情同意。排除标准：①患者及患者家属不能配合检查；②患者拒绝接受病理检查；③患者拒绝接受治疗；④切取病理组织前3～4 w内曾经接受化疗、放疗、靶向治疗及免疫调节治疗；⑤有精神疾病或意识障碍。

1.2 实验试剂 0.9%无菌生理盐水(大冢制药，日本)，鼠抗人Egr-1抗体(博士德生物，武汉)，鼠抗人PTEN抗体(博士德生物，武汉)，免疫组化SP 900染色试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)浓缩型染色试剂盒及Mayer苏木素(中杉金桥，北京)，新鲜二甲苯和35%乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠(天津化学试剂三厂)等。

1.3 实验仪器 微量移液器、海尔制冰机，4℃恒温冰箱，10 ml注射器，5 ml注射器(哈那好，天津)，病理切片机(Leica，德国)EP管(Eppendorff，德国)，水浴锅(北京医疗器械厂)，显微照相机和光学显微镜(OLYMPUS，日本)等。

1.4 病理取材方法 有执业医师资格的临床医师对疑似病变的垂体瘤组织进行完全切除的方式。切取后标本需立刻放在提前准备好的4%多聚甲醛溶液的容器中，并由我院病理科包埋切片，采用连续切片的方法，设置厚度 5 μm，展片，贴片，并记录好患者姓名，病历号，取材时间及取材组织类型后，放入60℃烤箱中1 h，使组织紧密附着玻片，从烤箱中取出标本，并冷却至室温，置入4℃冰箱备用。

1.5 免疫组化SP法〔6〕在免疫组化染色之前，首先需要进行待测病理组织的石蜡切片制作。95℃柠檬酸钠溶液中抗原修复后，使用正常山羊血清封闭液进行封闭处理。辣根过氧化物酶标记的Ⅱ抗(羊抗兔Egr-1/PTEN单克隆抗体)处理，使用DAB复染后，苏木素复染封片，镜检。

1.6 老年性垂体瘤免疫组化染色结果判读方法〔7〕(1)检测阳性：Egr-1和PTEN基因表达产物蛋白阳性主要集中在垂体瘤细胞核中。染色后，在光学显微镜下可以见到，垂体核深染棕色或棕褐色的颗粒，即阳性垂体。(2)垂体计数：用每平方毫米阳性垂体数表示。根据观测到的Egr-1和PTEN阳性垂体的比例(PP)和染色强度(SI)进行评分。(3)评分标准：总分值=SI×PP，总分值≤6和>6分别定义为阴性和阳性。依照垂体染色强度可分为 4 级：评分标准：总分值=SI×PP，总分值≤6 和>6 则分别认为检测阴性和阳性。依照垂体染色强度可分为以下4级：①未见垂体着色为阴性0分；②弱阳性(+)1分；③中等阳性()为2分；④强阳性()3分。 按照PP分为4级：①阴性：未见垂体染色0分；②阳性垂体数≤10%为1分；③阳性垂体数11%～50%计2分;④阳性垂体数为 51%～80%计为3分;⑤阳性垂体数>80%计为4分。标本阳性率由阳性标本数之和占总标本数的百分率来计算。采用低倍和高倍镜下观察，在高倍镜下(400×)随机选择10个视野，计算阳性垂体所占的百分率，即表达强度。

1.7 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行方差分析(ANOVA)检验，T检验和χ2检验，不满足条件者的四格表数据采用Fisher精确概率法，定量数据比较使用方差分析(ANOVA)。

2 结 果

2.1 各组Egr-1和PTEN在组织中阳性率 与正常垂体组织比较，老年性垂体瘤Egr-1和PTEN的阳性率明显增高(P<0.01)。与正常垂体组织比，Egr-1在侵袭性垂体瘤组织(χ2=31.67)和非侵袭性垂体瘤组织(χ2=15.68)均明显增高(P<0.05)，PTEN在侵袭性垂体瘤组织(χ2=41.14)和非侵袭性垂体瘤组织(χ2=20.09)明显降低(P<0.05)，Egr-1(χ2=0.9)和PTEN(χ2=1.6)在侵袭性垂体瘤组织和非侵袭性垂体瘤组织无显著差异(P>0.05)。见表1、图1和图2。

表1 Egr-1和PTEN基因在所取得的组织标本中的阳性率比较〔n(%)〕

分组nEgr-1PTEN侵袭性垂体瘤组织2519(76.0)3(12.0)非侵袭性垂体瘤组织106(60.0)3(33.3)正常垂体组织352(6.06)33(94.3)χ2/P值32.67/0.00743.15/<0.001

图1 各组Egr-1表达情况(SP，×400)

2.2 各组Egr-1 和PTEN的表达强度 与正常垂体组织相比，垂体瘤组织Egr-1和PTEN的表达强度差异均显著(P<0.05)，与正常垂体组织比，Egr-1在侵袭性垂体瘤组织(t=18.50)和非侵袭性垂体瘤组织(t=19.14)均明显增高(P<0.05)，PTEN在侵袭性垂体瘤组织(t=24.51)和非侵袭性垂体瘤组织(t=14.95)明显降低(P<0.05)，与非侵袭性垂体肿瘤组比，侵袭性垂体瘤组的Egr-1(t=4.96)表达强度明显增高(P<0.05)，PTEN(t=15.67)表达强度明显降低(P<0.05)。见表2。

分组nEgr-1PTEN侵袭性垂体瘤组织257.21±2.30.02±0.01非侵袭性垂体瘤组织104.62±1.40.27±0.8正常垂体组织350.01±0.0058.52±1.7t/P值8.44/0.012409.18/0.001

3 讨 论

垂体瘤是常见的颅内肿瘤，人群中发病率约1/10万，仅次于神经表皮性肿瘤和脑膜瘤〔7～9〕。目前在垂体瘤的诊断中，病理诊断仍然是金标准〔10〕，有时借助B超，CT等影像学检查及经鼻内镜等方法作为判断远处侵袭性的方法〔11〕。

研究认为Egr-1〔12〕，PTEN〔13〕等可以作为老年垂体瘤诊断的标志物，尤其在评价恶性肿瘤的侵袭性及预后方面，既往报道在宫颈癌中，早期PTEN水平明显增高，但随着恶性程度的增加，PTEN 水平明显降低〔14〕。PTEN 可以通过与酪氨酸激酶竞争共同的底物而发挥作用，是一种肿瘤抑制因子。可以通过阻止垂体生长，有丝分裂等方式发挥调节作用〔15〕。在人的实体肿瘤中，尚未得到证实。Egr-1〔16〕编码的蛋白结构是一个拥有3个重复锌指结构域的蛋白，在介入外界信号与靶基因耦联中发挥作用。在包括老年垂体瘤在内的多种恶性肿瘤中明显增高，但其增高的程度与肿瘤的发生发展及分化程度无明显相关〔17〕。在垂体瘤发生的早期，由于受到各种理化因素的影响，体内Egr-1基因被激活，并进一步促进癌变发生，同时，作为平衡杠杆的抑癌基因PTEN也被激活，通过抑制肿瘤垂体有丝分裂等方式，抑制了肿瘤垂体的增殖及远处侵袭性，但随着病变的进展，由于体内各种信号通路以及炎症因子的释放，致使的原癌基因被激活，其中可能包含某些可以抑制PTEN信号通路的基因，这就使得抑癌基因PTEN的保护作用减弱，促进肿瘤发生远处侵袭，但这一猜测仍需要进一步的理论实验证实。 综上，在老年垂体瘤患者中，Egr-1和PTEN水平均比健康人明显增高，二者结合对于诊断垂体瘤患者可能发生的潜在侵袭性具有重要作用，在指导临床手术及化疗方案中具有重要意义。

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〔2014-12-19修回〕

(编辑 苑云杰)

郑州市2014年度“常州四药临床药学科研基金”科研项目(No.CZSYJJ14031)

1 郑州大学第二附属医院心血管内科

党 帅(1972-)，男，硕士，副主任医师，主要从事颅脑损伤和脑血管疾病临床研究。

R730.4

A

1005-9202(2016)23-5832-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.026