动物肌肉组织中硝基呋喃原药HPLC-MS/MS的测定

□ 袁丽红 陈 玉 肖竹青 华测品标检测技术有限公司

动物肌肉组织中硝基呋喃原药HPLC-MS/MS的测定

□ 袁丽红 陈 玉 肖竹青 华测品标检测技术有限公司

建立动物肌肉组织中硝基呋喃类原药的固相萃取-超高效液相色谱串联质谱分析方法。样品用乙酸乙酯溶液提取，经HLB柱净化，甲醇和5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相，经BEH-C18柱分离，在HPLC-MS/MS多反应监测模式下进行定性定量分析。加标回收率为80%～98%，相对标准偏差均小于10%。

材料与方法

试剂与设备

呋喃唑酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃它酮标准品：纯度≥99%；甲醇、乙腈、正己烷、乙酸乙酯、乙酸铵：色谱纯；滤膜：PTEE，0.22 μm；用甲醇配成浓度为1 mg/mL的原药标准储备液，0～4 ℃保存。

LC-MS/MS 8050，配电喷雾离子源；BEH-C18；涡旋混合器；超声仪；离心机；氮吹仪；旋转蒸发仪。

实验方法

1 HPLC-MS/MS检测条件

1.1 色谱条件

色谱柱为BEH-C18，柱温：30 ℃；进样量：5 μL；流速：0.2mL/min，流动相A：5 mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱。

1.2 质谱条件

ESI，正离子扫描+负离子扫描，多反应监测，毛细管电压：4.0 kV；离子源温度：300 ℃，定量离子对：FZD（m/z226.2/122.1）、FTD（m/z325.0/281.1）、NFT（m/z 2 3 7.2/1 5 2.1）和N F Z（m/z197.2/124.2）；定性离子对：FZD（m/z226.2/252.1）、FTD（m/z3 25.0/13 9.0）、NFT（m/z 2 3 7.2/1 2 4.1）和N F Z（m/z197.2/80.1）

1.2.2 样品前处理

称样10 g于离心管中，加10 mL乙酸乙酯，涡旋混合1 min，超声10 min，4 000 r/min离心5 min，转移上层液，重复提取1次，合并提取液，30 ℃氮吹仪吹至干，加入10 mL 5%甲酸溶液，涡旋振荡使全部溶解，然后用HLB小柱进行净化，先用5 mL水、5 mL甲醇和5 mL 5%甲酸溶液平衡，再用5 mL 5%甲醇淋洗，最后用5 mL甲醇洗脱，35 ℃水浴氮气吹至近干。用流动相复溶，过滤后供上机。

1.2.3 回收率和精密度的测定

称取猪肉、鸡肉、鱼肉空白样品10 g作为空白基质，分别添加硝基呋喃原药标准品，使得样品中含量分别为1 μg/kg、5 μg/kg和20 μg/kg，按照样品前处理进行操作，每个浓度水平做3次平行实验，上机，测定该方法的回收率及精密度。

结果与讨论

质谱条件的选择

分别用ESI+和ESI-两种扫描方式对4种药物进行扫描，显示FZD和FTD在正模式下有较好的灵敏度，而NFT和NFZ在负模式下有较好的灵敏度，因此选择两种模式同时扫描。以信号最强的碎片离子作定量离子，信号次强的作定性离子。

提取净化条件的选择

分别选择乙酸乙酯、乙腈、甲醇3种提取剂，震荡提取、超声提取和涡旋提取3种提取方式研究了4种硝基呋喃原药提取效率最高的提取条件。结果表明：采用乙酸乙酯作为提取剂、超声作为提取方式时，提取效率最高。另外，本文分别研究了硅胶、C18和HLB三种萃取小柱的净化效果。结果表明，HLB小柱的净化效果最好，杂质峰少，回收率高。因此，本文采用HLB小柱进行净化。

精密度与回收率

本文分别测试了猪肉、鸡肉、鱼肉中硝基呋喃原药检测的精密度与回收率，见表1，四种药物的回收率为80%～98%，相对标准偏差＜10%。

表1 加标回收率和精密度测定结果

结论

本文建立了动物源性食品中硝基呋喃原药的HPLC-MS/MS检测方法，对动物源性食品中硝基呋喃原药的提取及检测条件进行了研究。本方法操作简便、灵敏度高，精密度与回收率符合国家标准检测要求。