乳与乳制品中硫氰酸盐的测定

乳与乳制品中硫氰酸盐的测定

胡利敏 赵翠琴 柴艳兵 张耀广 李 飞 石家庄君乐宝乳业有限公司

本文利用紫外分光光度法测定乳与乳制品中硫氰酸钠的质量浓度。样品经沉淀过滤后，硫氰酸根遇铁盐反应生成血红色的硫氰酸铁，在450 nm下测其吸光值，用标准曲线法定量。本方法的线性范围为0.00～10 mg/kg，相关系数R=0.999 817，鲜奶的检出限为1.00 mg/kg，奶粉的检出限为2.00 mg/kg，回收率为90.76%～104.59%，相对标准偏差0.199%～0.366%。该方法具有操作简单、结果准确等特点，对乳与乳制品中硫氰酸盐的控制具有重要意义，适合在大中小企业推广。

紫外分光光度计；硫氰酸钠；乳；乳制品

硫氰酸盐是硫氰酸根离子SCN-形成的盐，天然存在于各类食品（包括乳）中[1]，其毒性主要来自体内释放的氰根离子。在原料乳或乳制品中掺入硫氰酸钠后可有效抑菌、保鲜，是不法奶户的掺假物质之一，即使少量食入也会对人体造成极大伤害。2008年12月，国家卫生部发布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批）》中明确规定乳及乳制品中的硫氰酸钠属于违法添加物。

常见的硫氰酸盐检测方法有分光光度法[2]、电位滴定法[3]、动力学光度法[4]、化学滴定显色法[5]、毛细管电泳法[6]和高效液相色谱法等。卫生部食品整治办[2009]29号文件《关于全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治》中规定，牛奶中的硫氰酸钠检验方法为离子色谱法。但该方法检测时间较长，且离子色谱仪尚未普及，无法在部分中小型企业推广使用。本文采用紫外分光光度法，简单、快速、准确性高，重复性好，可在各大中小乳制品企业推广。

1 实验方法

1.1 原理

样品经60 ℃水浴后离心沉淀去除蛋白质等干扰物质，滤液经硝酸酸化后，加入硫酸铁铵溶液进行显色，滤液中的硫氰酸根遇铁盐反应生成血红色的硫氰酸铁，利用紫外分光光度计在450 nm下测其吸收值，从而测定样品中含有硫氰酸根的含量。

1.2 试剂

除另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-2008规定的一级水。

三氯乙酸溶液（200 g/L）：精确称取20.00 g三氯乙酸，以蒸馏水或纯净水溶解定容至100 mL，2～8 ℃保存，保存时间不得超过2个月。

硫氰酸根标准溶液（1 000 mg/ L）：精确称取硫氰酸钠标准品0.139 7 g（以纯度为99.99%的标准品计算）或称取纯度≥98.5%的分析纯硫氰酸钠0.141 8 g，以蒸馏水或纯净水溶解至100 mL，2～8 ℃保存，保存时间不得超过2个月。

硫酸铁铵溶液（160 g/L）：精确称取硫酸铁铵16.00 g，加入蒸馏水80 mL溶解后加浓硫酸1 mL，再加水定容至100 mL，该溶液需现用现配。

过氧化氢溶液（1 mL/100 mL）：移取1 mL30%过氧化氢并用水定容至100 mL，该溶液需现用现配。

硝酸为优级纯。

1.3 仪器

紫外-可见分光光度计，分析天平，高速离心机。

1.4 方法

1.4.1 标准曲线

分别吸取0.00、0.02、0.04、0.06、0.08 mL和0.10 mL硫氰酸根标准溶液于10 mL刻度试管中，加入5 mL灭菌乳、0.1 mL过氧化氢溶液，并用三氯乙酸（200 g/L）溶液定容至10 mL，充分振摇使样品分散完全。此系列液即为浓度为0.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mg/L和10.00 mg/L的标准系列液。将此标准系列液放置于60 ℃水浴锅中水浴10 min。转移至离心管，7 000 r/ min离心10 min。

分别移取标准系列液上清液4 mL，加入0.5 mL硝酸和0.5 mL 160 g/L硫酸铁铵溶液，摇匀后在450 nm下，以零管作为参比测定吸光度。以测出的吸光度对硫氰酸根浓度绘制标准曲线。一次曲线，截距不设置为零，R2≥0.995。

1.4.2 样品处理

精确称取2.00 g奶粉或5.00 g液态奶于10 mL刻度具塞试管中，加入1 mL/100 mL过氧化氢溶液0.1 mL，用200 g/L三氯乙酸溶液定容至刻度，充分震摇使样品分散完全，并于60 ℃水浴放置10 min。转移到离心管中，离心沉淀。移取4 mL上清液，加入0.5 mL硝酸和0.5 mL 160 g/L硫酸铁铵溶液，摇匀后在450 nm下测定吸光值。取一样品以相同方法处理，加入0.5 mL硝酸，不加入显色剂作为样品空白。以测出的吸光度在标准曲线上查得样品溶液中的硫氰酸根的含量。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线及线性

由表1数据可知，样品中硫氰酸钠的浓度在0～10 mg/kg内标准曲线成线性范围，硫氰酸钠的标准曲线回归方程为A=0.020 53C+0.130 88，相关系数为R2=0.999 817。

表1 标准曲线

2.2 检出限

按国际理论与应用化学家联合（IUPAC）规定。仪器达到稳定后对空白溶液进行n次（n≥20）测量，根据L=Ks/b计算，液态奶（包括灭菌乳、调制乳、发酵乳、生乳等）中硫氰酸钠检出限为1.00 mg/kg，乳粉（包括全脂乳粉、脱脂乳粉、乳清粉等）中硫氰酸钠检出限为2.00 mg/kg。

2.3精密度

对三个浓度的位置样品分别重复测定8次，计算相对标准偏差。结果见表2。由表2数据得出，硫氰酸钠精密度在0.199%～0.367%。

表2 精密度试验（n=2×10）

2.4 方法回收率

选用灭菌乳、花色奶、发酵乳为本底分别配制5个不同浓度的加标样品进行检测，检测数据见表3。

表3 方法适用性及加标回收率

由表3数据得出，灭菌乳中硫氰酸钠加标回收率为90.76%～100.47%，调制乳中硫氰酸钠加标回收率为92.31%～101.01%，发酵乳中硫氰酸钠加标回收率为93.60%～104.59%。总体硫氰酸钠加标回收率在90.76%～104.59%。

2.5 验证显色剂对样品的影响程度

按表4设计验证显色剂本身颜色是否对检测结果造成影响，检测结果见表4，由表4数据得出，选取硫酸铁铵作为显色剂，对检测结果不造成影响。

表4 显色剂对样品干扰试验

3 小结

卫生部在食品安全方面的工作力度逐年加大，2008年12月12日发布的《食品中可能违法添加的非食用物质和和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批）》中明确规定，乳及乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。为确保食品安全，迫切需要一种简便、快捷、准确的方法对乳与乳制品中硫氰酸钠的进行测定。本方法以硫酸亚铁为显色剂，采用紫外分光光度计法测定乳与乳制品中硫氰酸钠的含量。硫氰酸钠的标准曲线相关系数为0.999 817，方法检出限为液态奶（包括灭菌乳、调制乳、发酵乳、生乳等）中硫氰酸钠检出限为1.00 mg/kg，乳粉（包括全脂乳粉、脱脂乳粉、乳清粉等）中硫氰酸钠检出限为2.00 mg/kg，精密度为0.199%～0.366%，加标回收率在90.76%～104.59%。加标回收率、方法检出限、精密度等均符合食品理化检测[7]相关要求。通过样品加标回收率、检出限及精密度检测说明，本法准确度高，重复性好，操作简单，检测时间短，且紫外分光光度计成本低，维护方便，便于在小型乳制品企业中推广使用。

[1]顾欣,黄土新,李丹妮,等.乳中硫氰酸盐对人类健康的风险评估[J].中国兽药杂志，2010，44(9):45-49，52.

[2]王丹慧,高娃,李梅.原料乳中硫氰酸钠掺假定性检测方法[J].中国乳品工业,2008(7):57-58.

[3]曾云龙,唐春然.直接电位法测定工业废水中硫氰酸根的研究[J].分析测试实验室,2001,20(3):66-68.

[4]江海山,李飞.动力学分光光度法测定痕量硫氰酸根的研究[J].高等化学学报,1999,20(1):47-49.

[5]王丹慧,高娃,李梅.中国乳品工业,2008,36(7):57-58.

[6]吴剑平,顾欣,李丹妮,等.毛细管电泳法检测牛奶中硫氰酸钠质量浓度[J].中国乳品工业,2012(3):53-56.

[7]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.中华人民共和国国家标准实验室质量控制规范食品理化检测(GB/T 27404-2008)[S].北京:中国标准出版社,2008.