缺氧诱导因子-1α在前置胎盘组织中的表达及临床意义

胥 数

（朝阳市中心医院妇产科，辽宁 朝阳122000）

缺氧诱导因子-1α在前置胎盘组织中的表达及临床意义

胥 数

（朝阳市中心医院妇产科，辽宁 朝阳122000）

目的 检测缺氧诱导因子 -1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）在前置胎盘组织的表达水平，分析其临床意义。方法选取我院产科诊治的 121 例前置胎盘患者作为观察组对象，选举同期 120 例正常孕妇胎盘组织作为对照组，应用免疫组化法和 RT-PCR 法检测胎盘组织中 HIF-1α 阳性表达水平，对比分析两组间 HIF-1α 阳性表达率和表达量的差异性。结果观察组患者 HIF-1α 阳性表达率、IOD 均值以及 HIF-1α mRNA/β-actin 比值均显著高于对照组，经统计学分析，P＜0.05，差异具有显著性。结论HIF-1α 在前置胎盘孕妇的胎盘组织中阳性表达率显著升高，其可作为早期诊断前置胎盘的指标之一。

缺氧诱导因子 -1α；前置胎盘组织；妊娠

HIF-1α作为体内重要的转录激活因子，主要由细胞应激缺氧形成，其能够通过调节种靶基因表达水平，对血管生成、疾病发生发展过程产生重要影响。目前相关研究发现[1-2]胎盘组织中HIF-1α阳性表达水平与妊娠期疾病具有密切关联。本文通过对比正常胎盘组织和前置胎盘组织中HIF-1α表达水平的不同，旨在为临床早期诊断前置胎盘提供新思路，现将结果总结如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象：选取我院产科在2013年11月至2015年10月期间收治的121例前置胎盘孕妇作为观察组对象，年龄22～41岁，平均年龄（30.41±4.15）岁，孕周35～41周，平均孕周（37.9±2.2）周，选取同期在我院产科进行生产的120例正常孕妇作为对照组对象，年龄20～42岁，平均年龄（31.43±4.21）岁，孕周36～42周，平均孕周（38.1±2.4）周，病例选择标准：①均为初产妇，且选择剖宫产进行生产；②均为单活胎，且孕周超过32周；③观察组病例产前经影像学检查确诊为前置胎盘；④对照组孕妇经全面检查证实为健康人群；⑤排除合并糖尿病、高血压、心脏病等基础疾病的孕妇；⑥排除合并盆腔炎、宫颈炎等妇科疾病者；⑦患方在知情同意的基础上，自愿参与并配合完成。

1.2 实验方法

1.2.1 采集标本：所有孕妇在惊涛公产将胎盘组织完全娩出后，在胎盘母体面的中央区域立即切除1块组织（大小为10 mm×10 mm×10 mm），应用DECP溶液冲洗干净后放置到-80 ℃冰箱中保存备用，此组织用作检测RNA水平；在胎盘母体面再另取1块组织（大小为10 mm×10 mm ×10 mm），应用4 ℃生理盐水将组织冲洗干净后，应用10%中性甲醛溶液浸泡24 h完成固定，常规进行石蜡包埋处理后，连续切片（切片厚度为5 μm），此块组织用作免疫组化法检测。

1.2.2 免疫组化检测法：采用SP法（即过氧化物酶-抗生物素蛋白链菌素）对胎盘组织中HIF-1α表达水平进行检测，将组织切片进行泼辣和脱水处理之后，利用微波修复抗原，将组织切片放置到0.3%H2O2溶液中浸泡10 min，取出后用PBS（即磷酸盐缓冲液）反复冲洗3次，添加兔抗人多克隆抗体（即一抗，福建迈新生物科技公司），将PBS缓冲液作对照，在4 ℃恒温下静置一夜。次日取出复温至30 ℃，滴加羊抗小鼠IgG抗体二抗（即二抗，福建迈新生物科技公司），静置15 min，PBS缓冲液冲洗，添加DAB显色剂（武汉博士德生物科技公司）、复染、脱水、封片后，放置在显微镜下观察，每张切片选取5个高倍视野，利用ImageS000分析仪采集分析图像后，测定积分光密度（即IOD值）代表表达量。

1.2.3 RT-PCR法：RT-PCR法对胎盘组织中的HIF-1α mRNA进行检测，mRNA引物为上海生工生物工程有限公司完成，扩增产物片段长度205 bp，扩增反应条件为：94 ℃下预变30 min→94 ℃下变性30 s→59 ℃下退火30 s→72 ℃下延伸1 min，在完成35个循环后在72 ℃下延伸5 min，获得的产物进行琼脂糖凝胶电泳，以HIF-1α和内参照条带之间的灰度值比作为HIF-1α mRNA表达量。

1.3 阳性评价标准[3]：选取5个高倍镜头视野进行阳性标准评价，细胞核着黄色作为阳性判断标准，根据着色深度和阳性细胞比例进行评分，无色计0分，淡黄色计1分。棕黄色计2分，棕褐色计3分，阳性比例＜5%计0分，5%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分，两项评分相加后≤2分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学处理：数据分析用SPSS15.0统计学软件，计量资料采用t检验分析，计数资料采用卡方检验分析，α=0.05作为数据的检验水准，P＜0.05，具有显著性差异。

2 结 果

免疫组化结果显示，观察组中共有85例组织为HIF-1α阳性表达，阳性率为70.83%，IOD值为（204.9±24.5），对照组中共有22例组织为HIF-1α阳性表达，阳性率为21.67%，IOD值为（113.4± 15.6），RT-PCR检测结果显示观察组HIF-1α mRNA/β-actin比值为（1.24±0.27），对照组HIF-1α mRNA/β-actin比值为（0.55± 0.12），两组HIF-1α阳性表达水平相比经统计学分析，P＜0.05，具有显著性差异。

3 讨 论

胎盘前置主要是指在妊娠28周之后胎盘低于胎先露部，其作为妊娠晚期常见疾病之一，是引起妊娠晚期阴道流血的首要原因，如处理不当，能够对母胎生命安全造成严重负面影响[4]。在现今医学研究水平中，对于前置胎盘发生的原因和发病机制尚未十分清楚，因此，就前置胎盘进行深入研究具有重要的临床意义。在妊娠期，氧分压对于滋养细胞浸润、子宫动脉重铸以及新生血管发育等具有重要作用，HIF-1α作为HIF-1的重要亚基之一，是人体重要的氧感受和信号转导因子，其能够通过改变把基因表达水平来调节氧张力，从而影响滋养细胞分化、胎盘血管发育等过程。正常情况下，在孕早期，由于胚胎滋养细胞种植等原因宫腔内多表现为缺血缺氧状态，HIF-1α处于较高水平以提高，胚胎在店环境中的耐受能力，为滋养细胞正常发育提供有利环境，而随着滋养细胞发育成熟，宫腔内氧浓度不断提高，HIF-1α随着不断降低。但是HIF-1α过度表达，则能够引发内皮素活性增强、胎盘血管重铸障碍，从而参与前置胎盘、子痫等妊娠期疾病形成过程[5-7]。本实验结果显示前置胎盘孕妇的胎盘组织中HIF-1α阳性表达水平显著高于正常孕妇的胎盘组织，表明HIF-1α异常升高与前置胎盘具有重要关联，其可能参与了前置胎盘形成过程。总而言之，HIF-1α在前置胎盘组织呈异常高表达，可以将其作为前置胎盘诊断的参考指标。

[1]李翠丽,万俐. HIF-1α及其 靶 基因VEGF在双 胎输血综合征患者胎盘组织中的表达[J].中国妇幼保健,2015,30(7):1112-1114.

[2]杨晓菊,孙 玲 玲,张萌,等.糖尿病患者妊娠后胎盘组织缺氧诱导因子-1α及内皮素-1的表达及与妊娠结局关系[J].中华实用诊断与治疗杂志,2014,28(1):15-17.

[3]严小丽,陈诚,常青,等.凶险性前置胎盘20例临床分析[J].实用妇产科杂志,2013,29(9):704-707.

[4]Jang WK,Lim SY,Park JC,et al.Surgical impact on serum anti-Mullerian hormone in women with benign ovarian cyst: A prospective study[J].Obstet Gynecol Sci,2014,57(2):121-127.

[5]谢家滨.缺氧诱导因子-1α在 前置胎盘患者胎盘组织中的表达及意义[J].海南医学,2012,23(13):37-38.

[6]La MA,Sunkara SK.Individualization of controlled ovarian stimulation in IVF using ovarian reserve markers: from theory to practice[J].Hum Reprod Update,2014,20(1):124-140.

[7]吕艳关,臧 晓 娟,范广来,等.胎 盘组织缺氧诱导因子-1α的 表 达和血管内皮生长因子及其受体-1水平在子痫前期的作用研究[J].中华临床医师杂志(电子版),2013,7(11):116-117.

R714.56

B

1671-8194（2017）02-0130-02