奶牛隐性乳腺炎诊断技术研究概况

李 朝

(云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201)

奶牛隐性乳腺炎诊断技术研究概况

李 朝

(云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明 650201)

目前，奶牛乳腺炎诊断检测技术大致可分为临床诊断和实验室检测。奶牛隐性乳腺炎诊断检测包括乳汁病原微生物分离鉴定、乳汁体细胞计数、乳汁pH检测、乳汁电导率检测、乳汁酶活性检测、乳汁主要致病菌PCR检测，以及检测乳清总蛋白、血清白蛋白、被毛微量元素含量检测等方法。本文对当前奶牛隐性乳腺炎诊断检测技术研究进展作简明概述，以供参考。

奶牛 隐性乳腺炎 诊断方法 检测技术 进展

奶牛乳腺炎（mastitis）又称乳腺炎，是奶牛乳腺受到物理、化学、微生物等因素刺激所引起的奶牛乳腺炎症，主要表现为乳汁发生理化性质及细菌学变化、乳腺组织发生病理学变化，是奶牛养殖中最为常见、最难防治、花费最多、严重影响奶牛业发展的疾病之一[1]。在当前奶牛乳腺炎的治疗中，大量使用抗生素，导致牛奶的产量和品质下降，我国乳制品新增消费的80%为进口产品所占，养殖效益受损，严重制约我国奶牛养殖业的发展。为促进奶业振兴发展，保障优质安全乳品有效供给，加快建设现代奶业，2016年12月26日，根据《乳品质量安全监督管理条例》，农业部、国家发展改革委、工业和信息化部、商务部、食品药品监管总局共同组织制定了《全国奶业发展规划（2016－2020年）》，奶牛乳腺炎防治及其诊断检测技术成为奶牛养殖过程中的重要环节。

美国乳腺炎委员会（NMC）在1978年，根据乳汁和乳房的肉眼可见变化情况，将乳腺炎分为隐性乳腺炎和临床型乳腺炎两种，其中隐性乳腺炎占总发病的77%～79%，临床型乳腺炎占奶牛总发病的21%～23%[2]。我国奶牛乳腺炎的发病率一般在20%～75%，其中临床型乳腺炎发病率在9.7%～55.6%，而隐形乳腺炎发病率却高61.03%～79.62%，给我国奶牛养殖业、奶制品加工企业带来较大经济损失。奶牛乳腺炎是由多种致病性病原微生物感染而引发，致病菌包括球菌、杆菌、支原体及病毒等多达150多种，临床上较常见的约有23种，其中主要以链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为主，约占总致病菌的90%～95%[3-5]。

当前，对奶牛乳腺炎的预防和治疗有大量的试验和报道，由于隐性乳腺炎的特殊性，多无肉眼可见的临床症状，前期不易发现，容易延误治疗，随着病情发展成为临床型乳腺炎。本文将从诊断技术方面对奶牛乳腺炎研究概况作讨论。

1 临床诊断

1.1 临床观察诊断

肉眼观察乳房的皮肤色泽、乳区形状、乳汁性质以及全身反应。乳房皮肤表现为红热肿胀，乳区形状不对称，乳汁色泽异常，出现凝块、絮片或脓汁，有时也出现染血。乳汁出现凝块、絮片时，时常出现颜色的变化，表明乳腺有严重的炎症。发生乳腺炎时，因病因、病程的不同，可出现发热、肿胀、纤维化等症状[6]。

1.2 临床触摸诊断

用手触摸待检乳区质地、温度异常，对比四个乳区之间有明显的温度差异，乳房内是否有肿块，观察奶牛触诊时疼痛是否敏感。

2 实验室检测

2.1 乳汁病原微生物分离鉴定

采集奶牛乳汁，用鉴定培养基和选择培养基，进行培养分离和纯化，观察菌落形态，进行革兰氏染色、镜检以及生化实验等，对所含病原菌进行初步判断。详细的病原菌分离可参考文献[7]进行。袁永隆等报道，奶牛隐性乳腺炎的主要病原菌为无乳链球菌、停乳链球菌、金色葡萄球菌，大肠杆菌和乳房链球菌等，建立了dBASEⅢ“奶牛乳腺炎常见病原菌研究资料数据库检索系统”，制定了“奶牛乳腺炎细菌的分离和鉴定程序”，为乳汁的病原菌监测提出可靠的检验方法[7]。高潮等报道，引起奶牛隐性乳腺炎的主要病原菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、表皮葡萄球菌以及克雷伯菌[8]。该方法分离到的致病菌种类较多，但有些不是致病菌，存在一定的随机性。

2.2 乳汁体细胞计数法

体细胞是指来源于身体的细胞，主要是白血细胞（中性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞等）和乳房组织的分泌细胞，国际上通常以每毫升奶中体细胞数SCC/ml表示。正常体细胞数（SCC）牛奶中含2万/ml～20万/ml，国际上规定以50万/ml以上的体细胞数定为乳腺炎的基准[9]。体细胞计数法分为直接计数法和间接计数法。直接计数法常用显微镜及电子对体细胞直接计数。间接计数法原理是对体细胞裂解，使DNA释放出来，产生沉淀或者形成凝胶，体细胞数量和产生的沉淀和凝胶正相关，间接计算乳汁中体细胞数量和判断奶牛乳腺炎[10]，包括以加州乳腺炎CMT检验法为基础的中国农业科学院兰州中兽医研究所LMT法、吉林乳腺炎JLT检验法、北京奶牛研究所BMT检测法、上海奶牛研究所SMT检测法、 西北农林科技大学YMT诊断液、黑龙江省兽医科学研究所HMT检测法，以及浙江大学HMT诊断粉检测法、 山东省农业科学院畜牧兽医研究所JMT诊断粉检测法。以上检测方法大多都制成试剂盒，使用时根据实际情况合理选用，按照使用说明书操作即可。其中LMT检测法，结果误差较小，且较为方便快速，是进行流行病学调查的良好方法[11]。

2.3 乳汁pH检测

正常乳汁pH值在6.2～6.6之间，随着炎症反应的加重，血管渗透性增加，pH值变化与体细胞和炎性细胞的含量呈正相关，导致牛乳pH逐渐升高，趋向于血液pH值。该方法可用酸度计或者用特制的试纸进行，操作简单快速，但结果可能会受环境温度、胎次等因素影响，而出现较大误差。如果pH值在6.6～6.8之间，不能直接判定为阳性，必须结合使用其他的检测方法，综合诊断。

2.4 乳汁电导率检测

当奶牛患乳腺炎后，乳腺上皮组织细胞制造乳糖能力下降，乳汁渗透压下降，Na+、K+、Ca2+和Cl-等离子的浓度升高，乳汁电导率（EC）的升高。从20世纪40年代开始，日本率先研制出便携式袖珍电子诊断仪，赫庆铭推出SX-Ⅰ型乳腺炎诊断仪，可区分健康乳、可疑乳、隐性乳腺炎轻度乳、中度乳、重度乳等五类乳汁，还可初步测定出乳汁的营养成分。CN乳腺炎诊断仪体积小，除能区分上述五种奶外，还可区分牛奶的品质，分别为最佳健康乳、一般健康乳和次健康乳。XND-A型奶检仪，是一种导电极为传感器的便携式奶检仪，体积小，能快速、准确的检出掺假奶（如掺水）、酸败奶、有抗生素奶和乳腺炎奶[12]。但是，在实际的运用中，由于电导率受到饲料成分、泌乳期、月份和胎次等因素影响，变动范围较大，应对具体因素进行区分研究，掌握变化规律，制定具体细化检测标准，提高诊断检测准确率。

2.5 乳汁酶活性检测

在乳腺细菌感染时，很多内在的酶含量会有所上升。目前常用于奶牛隐性乳腺炎诊断的酶指标主要有乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、谷氨酸草酰乙酸转氨酶、乳过氧化物酶和脂酶等。酶活性的影响因素较多，温度、时间、pH、介质中的离子浓度、底物等均可造成酶活性的巨大差异[13]。郭昌明等报道检测奶样中髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）的浓度的方法更符合快速、简便、高灵敏度、高特异性的现代诊断方法要求[14]。

2.6 乳汁主要致病菌PCR检测

蒋成砚等用巢式PCR技术能检测出乳房链球菌16S rRNA保守区的可变区序列，与生理生化鉴定结果一致，该方法能快速有效检测出奶牛隐性乳腺炎乳房链球菌[15]。陈亚明等对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌三种主要致病菌的检测灵敏度分别为 0.1pg/μl、0.01pg/μl、0.1pg/μl[16]。该方法结果灵敏准确，可以检测出早期的奶牛隐性乳腺炎。

2.7 其他方法

此外，除上述方法外，还可以通过检测乳清总蛋白、血清白蛋白、被毛微量元素含量等来诊断奶牛隐性乳腺炎。这几种方法，在国内外报道较少，由于操作难度大，仪器设备要求高，操作流程复杂，检测技术不够完善等原因，临床运用相对较少。

3 展望

目前，广泛用于奶牛隐性乳腺炎检测的方法有LMT法、体细胞计数法、电导率检测法、pH测定等，其中LMT法操作更方便，运用更广泛。现有的诊断检测技术相对滞后，受到检测费用、仪器设备和养殖地区等现实问题的制约，难以在临床养殖中广泛推广。同时，快速准确、便捷实惠、特异灵敏和自动化的奶牛隐性乳腺炎诊断检测技术是未来研究开发的重点、热点和难点，对于深入全面实施《全国奶业发展规划（2016-2020年）》具有重要意义。随着科研的不断深入，诊断检测技术不断进步，减少奶牛隐性乳腺炎的发生，提高牛奶的产量和质量，提升中国奶牛养殖业和加工业在国内和国际竞争力的目标必将实现。

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