某猪场CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的报道

某猪场CSFV、PRRSV、PCV2和PRV多重感染病例的报道

徐 国，代振江，曾智勇＊，叶百川，张爱琼，咸 文，何小莉
(贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和（或）产死胎症状，猪场工作人员向笔者实验室送检同窝流产死胎4只。根据流行情况和临床特征，初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原，本实验室将送检死胎组织混合样品分别对CSFV、PRRSV 、PCV2、PRV、PPV 和JEV六种常见病毒进行病原核酸检测，结果显示该猪场发病猪存在CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。

CSFV；PRRSV；PCV2；PRV；多重感染

母猪繁殖障碍又称繁殖障碍综合征，其病因有非传染和传染性两类，猪瘟病毒（CSFV）、猪蓝耳病毒（PRRSV）、圆环病毒2型（PCV2）、猪伪狂犬病毒（PRV）等是引起母猪繁殖障碍疾病的主要病原微生物[1]。猪瘟是由CSFV引起的猪的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病，其特征为发病急、高热稽留和细小血管变性，引起全身泛发性小点出血，脾脏梗死；猪繁殖与呼吸综合征是由PRRSV引起的猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病，其特征为厌食、发热、怀孕后期发生流产，产死胎和木乃伊胎，幼龄仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡；猪圆环病毒病是指以PCV2为主要病原、单独或继发或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的总称，其临床症状特征主要为体质下降、消瘦、贫血、黄疽、生长发育不良、腹泻、呼吸困难、母猪繁殖障碍、内脏器官及皮肤的广泛病理变化；猪伪狂犬病是由PRV引起的一种急性传染病，临床特征为体温升高，新生仔猪表现神经症状，成年猪常为隐性高感染，妊娠母猪感染后可引起流产、死胎及呼吸系统症状[2]。

贵州省某种猪场一周内连续发生30余头母猪早产和（或）产死胎。据述，该猪场2016年8月份对CSFV、口蹄疫（FMDV）和PRV进行了普免。该猪场保育猪中出现体温升高、嗜睡、皮肤发红、食欲废绝、喘气、被毛粗乱、精神沉郁、喜卧等症状。病猪剖检可见皮下大量出血点；肾脏布满针尖状出血点；肺脏存在间质性肺炎、胸腔积液、心包积液。根据上述情况，怀疑该起病例与病毒感染相关。为了进一步确诊，对CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等6种常见病原进行了实验室核酸检测，现将检测过程报道如下。

1 材料

1.1 病料

贵州省某种猪场送检的母猪流产死胎。

1.2 试剂

根 据GenBank中 关 于CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV序列设计并合成6对特异性引物引物（预扩增条带大小分别为 CSFV 508 bp、PRRSV 434 bp、P C V 2 3 5 3 b p、P R V 3 0 5 b p、PPV 271 bp和JEV 1 015 bp），核酸提取试剂盒，PrimeScript One Step RTPCR Kit Ver.2.0等。

图1 样品中6种病毒的PCR/RT-PCR检测结果

2 方法

通过该养殖场送检人员了解饲养情况、免疫接种、发病死亡情况、药物治疗和临床症状之后将送检流产死胎进行解剖观察并记录。将采集的组织混合样品研磨匀浆，液氮反复冻融3次后12 000 r/min离心10 min，取上清，用 TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。

按 照 一 步 法PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2.0试剂盒说明书对CSFV、PRRSV、PCV2、PRV、PPV和JEV进行检测。反应总体系为50 µL：2×1 Step Buffer 25 µL， 模板7.0 µL，上下游引物各1.0 µL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 µL，Release Free H2O 14 µL；反应条件均为：95 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。

3 结果

该猪场2016年8月份对猪瘟、口蹄疫和猪伪狂犬病进行了普免，该猪场保育猪发生体温升高、嗜睡、皮肤发红、食欲废绝、喘气、被毛粗乱、精神沉郁、衰弱、喜卧等症状，发病率约60%，病死率约30%～40%，多于45日龄前后发病。该种猪场1周内连续发生30余头母猪早产和（或）产死胎症状的情况，且仔猪有神经症状。

将送检流产死胎进行解剖观察。解剖后可见，皮下有出血点；肾脏表面布满针尖状出血点、剖开肾脏见有不同程度损伤；肺脏存在间质性肺炎；胸腔积液；心包积液。

将送检流产死胎组织病料混合后，提取病料核酸。以提取的核酸为模板，应用一步法RT-PCR试剂盒，对病料进 行CSFV、PRRSV、PCV2、JEV、PPV和PRV等6种病毒的核酸检测，结果见图1。检测结果表明，组织样品中CSFV、PRRSV、PCV2、PRV为阳性，PPV和JEV检测结果为阴性。

4 结果分析与讨论

检测结果表明，送检流产胎儿存在SCFV、PRRSV、PCV2和PRV的多重感染。引起母猪繁殖障碍疾病既有传染性因素，也有非传染性疾病因素，而CSFV、PRRSV、PCV2和PRV等都是引起母猪繁殖障碍疾病的主要因素[1，2]。本文送检病样的猪场已对CSF和PR进行了免疫，但未进行相应的抗体监测，而本次病原筛查结果也间接表明该猪场CSF、PR免疫失败。免疫失败的原因是多方面的，如疫苗的接种途径、用法用量和效价，动物应激，遗传因素，患免疫抑制疾病等。所以，养猪场应从多方面查找免疫失败的原因，采取措施提高抗体免疫水平并定期进行疫苗免疫抗体水平的监测。同时，对PCV2、PRRS等进行疫苗免疫，改善圈舍卫生，进行严格彻底的清洁和消毒以减轻感染压力，加强综合管理防控，坚持自繁自养。此外，剖检时发现胎儿肾脏存在损伤，可能与发病母猪群的药物保健有关，故建议暂停，同时在饲料或饮水中适当添加电解多维，饲喂优质饲料。

针对母猪繁殖障性疾病的治疗有文献报道可采取激素疗法，如王金鹏等[3]所采用的催情散疗法治愈率可达90%以上。另外，张艳丰等[4]报道的“三联疗法”也有一定效果，即先用西药(防腐消毒剂)冲洗子宫并进行药物灌注(青链霉素)，同时配合益母生化散混饲，修复受损子宫和卵巢，治疗炎症和产后感染，最后用催情散刺激卵泡发育，诱其发情，促其排卵。

[1] 宣长和.猪病学[M].3版.北京：中国农业大学出版社， 2010：177.

[2] 陈溥言.兽医传染病学[M].5版.北京：中国农业出版社，2006：210-231.

[3] 黄利权，蔡荣湘，陈晓清.催情散治疗母猪不孕症的试验[J].中国兽医杂志，1998，24（4）：44-45.

[4] 王艳丰，张丁华，曹智高，等.母猪繁殖障碍治疗效果观察[J].动物医学进展，2014，35(12)：161-163.

2016-11-23）

省校合作计划项目，黔科合LH字[2014]7670号

徐国，男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学。E-mail：576144546@qq.com

曾智勇（1978—），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究