不同培养条件对瞿麦诱导愈伤组织的影响

李兴桃+任佼佼

（山西农业大学园艺学院，山西太谷 030801）

摘 要 试验以瞿麦叶片为材料，通过对其进行不同消毒时间，不同激素配比浓度和不同光照条件处理，探究瞿麦组织培养的最佳培养条件。试验结果表明：酒精浸泡30s、NaClO浸泡15min的处理可以极大降低外植体的污染率和褐化率；MS+1.0mg/L6·BA+0.4 mg/L NAA的培养基愈伤组织诱导率最高，为90%；接种后先暗培养25d，然后在光照下进行培养的外植体，其愈伤组织比接种后直接在光照条件下培养的外植体要出现的快且生长状况较好。

关键词 瞿麦；组织培养；消毒时间；激素配比浓度；光照

中图分类号：S567.239 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.068

瞿麦（Dianthus superbus L）为石竹科石竹属多年生草本植物，近年来，由于其花观赏价值高，抗性强，开始应用在园林绿化上。瞿麦的繁殖方式多样，但传统繁殖技术很难在较短的时间内获得大量性状整齐的优质种苗[1]。本试验通过对瞿麦组培材料进行不同的灭菌时间，激素配比，光照条件的处理，选择出最佳的培养条件，促进优良变异品种的开发利用。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料为太谷县窑子头的野生瞿麦，2014年引种到山西农业大学试验田。

1.2 方法

在组织培养过程中，外植体的消毒、培养基激素的配比和接种后的培养条件对组培成功都有很大的影响[2-3]。这些因素会导致外植体生理生化状态和愈伤组织的改变[4]。

1.2.1 消毒处理

取幼嫩的瞿麦叶片作为外植体，用75%的酒精浸泡30s后，再用浓度为0.5%的NaClO分别浸泡12、15、18min，接种后进行培养并统计外植体的污染率、褐化率。

污染率=（污染的叶片数/接种的叶片数）×100%

褐化率=（褐化的叶片数/接种的叶片数）×100%[5-6]。

1.2.2 激素处理

选用MS（4、74g/L）为愈伤诱导培养基，在愈伤诱导培养基上进行激素NAA和6-BA组合的双因素完全随机试验设计（见表1）。观察愈伤组织的诱导情况并记录愈伤组织生长状况。

愈伤组织诱导率=（出愈苗数/接种数）×100%[7-9]

1.2.3 光照处理

分别对培养基（MS+1.0mg/L 6·BA+0.4mg/LNAA）进行光照处理和黑暗处理：Ⅰ、接种后直接进行光照；Ⅱ、接种后进行黑暗处理，25d后给予光照。

表1 培养基激素浓度配比

处理组 激素 浓度/（mg/L） 激素 浓度/（mg/L）

1 6-BA 0 NAA 0

2 6-BA 0 NAA 0.2

③ 6-BA 0 NAA 0.4

④ 6-BA 0 NAA 0.6

⑤ 6-BA 0.5 NAA 0

⑥ 6-BA 0.5 NAA 0.2

⑦ 6-BA 0.5 NAA 0.4

⑧ 6-BA 0.5 NAA 0.6

⑨ 6-BA 1.0 NAA 0

⑩ 6-BA 1.0 NAA 0.2

? 6-BA 1.0 NAA 0.4

? 6-BA 1.0 NAA 0.6

? 6-BA 1.5 NAA 0

? 6-BA 1.5 NAA 0.2

? 6-BA 1.5 NAA 0.4

? 6-BA 1.5 NAA 0.6

2 结果与分析

2.1 消毒时间对瞿麦叶片污染率和褐化率的影响

由表2可知，适当的延长消毒时间可以在一定程度上降低外植体的污染率，外植体消毒15min比12min污染率下降了16.67%。褐化率和消毒时间是呈正相关的，消毒18min比消毒15min褐化率增长了32.22%。由此可见，用0.5%的NaClO浸泡瞿麦叶片15min消毒效果最好。

表2 不同消毒时间对瞿麦叶片污染率和褐化率的影响

时间/min 污染率/% 褐化率/%

12 36.67 17.78

15 20.00 21.11

18 16.67 53.33

2.2 不同激素配比对瞿麦叶片愈伤组织诱导率的影响

愈伤组织体积大，结构疏松且颜色浅的为生长良好；体积小，结构紧密且颜色深的为生长差[7]。本试验中，诱导5d后开始产生愈伤组织，10d后愈伤组织明显。由表3知，6-BA和NAA对愈伤组织的生长都起着促进作用，1.0mg/L6-BA和0.4mg/L NAA处理下，诱导率最高，愈伤组织的生长状况最佳。当NAA浓度为0.4mg/L，叶片愈伤组织诱导率较其他处理高，由此可见，NAA对瞿麦叶片愈伤组织的诱导起主要作用。

表3 不同激素配比对瞿麦叶片愈伤组织诱导率的影响

处理组 诱导率/% 愈伤组织生长情况

16.67 差

30.00 差

③ 73.33 差

④ 60.00 差

⑤ 63.33 差

⑥ 53.33 良好

⑦ 86.67 好

⑧ 56.67 良好

⑨ 43.33 差

⑩ 76.67 良好

? 90.00 好

? 70.00 好

? 50.00 差

? 46.67 良好

? 80.00 好

? 83.33 好

2.3 不同光照处理对瞿麦叶片愈伤组织诱导率的影响

光照对植物的细胞、组织、器官的生长和分化有着至关重要的作用，光照下愈伤组织极易分化形成维管组织而不能形成大量的愈伤组织，避光培养条件下有利于愈伤组织的积累[10-11]。由表4可知，处理Ⅱ的愈伤组织出现时间、生长状况均优于处理Ⅰ，且愈伤组织诱导率明显高于处理Ⅰ。

表4 不同光照条件对瞿麦叶片愈伤组织诱导率的影响

光照处理 诱导率/% 愈伤生长状况

Ⅰ 72 愈伤出现慢，生长状况较差

Ⅱ 87 愈伤出现快，生长状况好

3 讨论

外植体消毒时间长短，直接影响到外植体的成活率[12]。本试验中，采用75%酒精消毒30 s，0.5%的NaClO消毒

15 min，可以达到较好的消毒效果；当0.5%的NaClO处理时间延长，会降低外植体的活性，导致死亡率升高。激素的配比对愈伤组织的诱导有着明显的影响[13]。本试验中，0.4mg/LNAA和1.0mg/L6-BA条件下，愈伤组织的诱导率最高。由此可见，NAA和6-BA的浓度不宜过高或过低。

黑暗条件对愈伤组织的产生有明显促进作用[10]，本试验中，外植体先在黑暗条件下培养25d后再给予光照，愈伤组织的诱导率和生长状况都优于直接在光照条件下进行培养。

参考文献

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[2]韦三立.花卉组织培养[M].北京：中国林业出版社，2001.

[3]谭文澄，戴策刚.观赏植物组织培养技术[M].北京：中国林业出版社，1991.

[4]曹孜义，刘国民.试用植物组织培养技术教程[M].兰州：甘肃科学技术出版社，1996.

[5]刘庆昌，吴国良.植物细胞组织培养教程[M].北京：中国农业大学出版社，2003.

[6]加古舜治.园艺植物的器官与组织培养[M].郑州：河南科技出版社，1987.

[7]奚元龄，颜昌敬.植物细胞培养手册[M].北京：中国农业出版社，1992.

[8]裘文达.园艺植物组织培养[M].上海：上海技术出版社，1986.

[9]謝从华.柳俊.植物细胞工程[M].北京：高等教育出版社，2004.

[10]倪德祥.光在植物培养中的调控作用[J].自然杂志，1986，9（3）：35-40.

[11]文涛，梁莉，曾杨，等.不同光照强度对虎杖愈伤组织的影响[J].中国中药杂志，2007，32（13）：1277-1280.

[12]鲁旭东.植物组织培养中褐变的发生与防止[J].农业与技术，1999，19（4）：9.

[13]韩得元.植物生长调节剂原理及应用[M].北京：科学技术出版社，1997.

（责任编辑：刘昀）