制备手工浓缩血小板数量收集影响因素的分析

王国芳+杨明霞

摘要：目的 探讨富血小板血浆法制备手工浓缩血小板数量收集和红细胞混入量的影响因素。方法 选取600袋血液分成1个观察组，2个对照组，采用相同的离心时间、温度、离心机，不同的离心转速进行手工血小板制备，对比血小板和红细胞含量。结果 相同离心温度、相同离心时间、不同离心转速制备的手工血小板含量、红细胞含量不同。结论 400 ml全血，转速1980 rpm、10 min、22℃、加速档位9、刹车档2；300 ml全血，转速2070 rpm、5.5 min、22℃、加速档位9、刹车档2离心作为第一次轻离心制备的手工浓缩血小板效果最好。

关键词：离心；转速；血小板；红细胞

Abstract：Objective To investigate the factors influencing the accumulation of platelet count and the amount of red blood cells mixed with platelet-rich plasma.Methods 600 bags of blood were divided into one observation group and two control groups.The same centrifugation time， temperature， centrifuge and different centrifugal speed were used to prepare the platelet and erythrocyte.Results The same centrifugal temperature，the same centrifugal time，different centrifugal speed prepared by the manual platelet content，red blood cell content is different.Conclusion 400 ml whole blood， speed 1980 rpm，10 min，22 ℃，acceleration gear 9，brake file 2；300 ml whole blood，speed 2070 rpm，5.5 min，22 ℃，acceleration gear 9，brake file 2 centrifugal as the first light centrifugal preparation of hand-concentrated platelets the best effect.

Key words：Centrifugal；Speed；Platelets；Red blood cells

浓缩血小板对治疗出血性疾病有重要作用，血小板含量与纯度直接影响治疗效果。手工血小板与机采血小板相比具有采集时间短、成本低、容易招募的优点，在欧美国家手工浓缩血小板应用较普遍，但其需多人份输注，对机体易产生抗原性。因此，如何提高手工制备浓缩血小板含量与纯度，保证临床疗效，是需要解决的问题，特进行以下研究：

1 资料与方法

从2015年5月1日～2016年4月30日随机抽取600袋血液，其中400 ml的300袋，300 ml的300袋，都分为1个观察组100袋和2个对照组各100袋，采用相同的离心时间、温度、离心机，不同的离心转速进行手工血小板制备。

1.1原料血的选择 从2015年4月1日～2016年3月31日采集的血液中选择符合制备血小板的原料血。

1.2主要仪器设备 大容量低温冷冻离心机（日立CR7）；含CPDA-1抗凝剂的四联采血袋（山东威高，5d保存袋），规格为400 ml、300 ml；配平秤；分浆夹；开口夹子；血小板恒温震荡保存箱（美国HELMEL）；全自动血细胞分析仪（MEDONIC AC620）。

1.3方法

1.3.1静脉采血 为使采血顺利，血流通畅，尽量选择清晰可见、粗大、充盈饱满、弹性好、较固定的血管。300 ml和400 ml全血要在8 min和10 min内采集完成，采血过程中没有中断现象，轻摇混匀，采集后的血液运输和贮存温度要求（22±2）℃，采血后6 h内制备完成。

1.3.2成分制备 采用富血小板血浆法，将300 ml和400 ml全血分别离心。参数设置：提前将离心机温度调成20～24℃，300 ml全血时间设为5.5 min，400 ml全血时间設为10 min，加速档为9，刹车档为2。第1次轻离心，使红细胞下沉，轻取血袋放于分浆夹上，缓慢分出富血小板血浆于转移袋，热合分离红细胞袋。第2次重离心：将富含血小板血浆的转移袋装罐，离心条件是转速3550 rpm、22℃、6 min、加速档为9，刹车档为5，离心后分出上层血浆，下层即为血小板浓缩液，血小板浓缩液在室温静置1 h（平放无折叠），轻摇解聚后放入（22±2）℃血小板保存箱震荡保存。正常血小板肉眼观察呈黄色云雾状液体，计数越高云雾状越明显，无色泽异常、蛋白析出、气泡及中度以上乳糜。

1.3.3血小板、红细胞计数 通过MEDONIC AC620全自动血细胞分析仪，选择血小板测定模式，完成浓缩血小板计数及混入红细胞计数。

2 结果

见表1，表2。

3 讨论

影响手工制备浓缩血小板数量收集和红细胞混入量的影响因素有很多，本研究主要讨论了离心速度对血小板收集和红细胞混入量的影响。

从表1中统计分析发现，400 ml全血第一次离心速度1950 rpm、离心时间10 min、离心温度22℃、加速档位9、刹车档位2制备的血小板含量为（4.53±1.25）×1010/袋，与另两种参数相比最少，红细胞含量为（0.68±0.15）×109/袋与另两种参数相比最多；离心速度2030 rpm、离心时间10 min、离心温度22℃、加速档位9、刹车档位2制备的血小板含量为（4.64±1.11）×1010/袋，红细胞含量为（0.37±0.25）×109/袋，两指数均介于中间。离心速度1980 rpm、离心时间10 min、离心温度22℃、加速档位9、刹车档位2制备的手工浓缩血小板数量（4.98±1.36）×1010/袋，与另两种参数相比最多，混入红细胞（0.43±0.18）×109/袋，与另两种参数相比最少，效果较理想。

从表2中统计分析发现，300 ml全血第1次离心速度2020 rpm、离心时间5.5 min、离心温度22℃、加速档位9、刹车档位2制备的血小板含量为（3.68±1.69）×1010/袋，与其它两种参数相比介于中间，红细胞含量为（0.83±0.25）×109/袋，与其它两种参数相比最高；离心速度2120 rpm、离心时间为5.5 min、离心温度22℃、加速档位9、刹车档位2制备的血小板含量为（3.17±1.67）×1010/袋，与另两种参数相比最少，红细胞含量为（0.47±0.21）×109/袋，与其它两种参数相比介于中间；离心速度2070 rpm、离心时间5.5 min、离心温度22℃、加速档位9、刹车档位2制备的手工浓缩血小板（3.77±1.42）×1010/袋，血小板含量最多，混入红细胞（0.30±0.15）×109/袋，量最少，效果最理想。离心转速过快、时间过长，导致血小板下沉，富血小板血浆混入红细胞较少，但血浆内血小板含量少；转速过慢，时间过短，导致红细胞不能很好下沉，分离出来的富含血小板血浆中红细胞严重超标，血小板也不能最大限度分离出来。

操作者手法对制备手工浓缩血小板也是一个重要的影响因素，第一次离心时血袋一定要竖直，血袋上部分尽可能饱满，避免折叠或塌陷，致红细胞紧贴血袋不能下沉。离心完毕取血袋时一定要轻拿轻放，避免上层泛红。分离富血小板血浆时，红细胞与血浆交界处一定要减慢分离速度，避免形成漩涡，将红细胞卷入上层血浆中。

通过以上分析，采用富血小板血浆法制备手工浓缩血小板，不同的离心参数对收集血小板数量和混入红细胞数量均有影响，400 ml全血，转速1980 rpm、10 min、22℃、加速档位9、刹车档2；300 ml全血，转速2070 rpm、5.5 min、22℃、加速檔位9、刹车档2离心作为第一次轻离心制备的浓缩血小板含量最高，红细胞含量较低，收集效果最好。

参考文献：

[1]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社，2002.

[2]中华人民共和国卫生部.血站技术操作规程（2012版）[S].卫医政发[2012]1号附件，2012.

[3]中华人民共和国国家标准.GB18469-2012全血及成分血质量要求[S].北京：中国标准出版社，2012：5.

[4]李顺清，曹文武.不同离心转速和不同离心时间制备的浓缩血小板质量分析[J].四川生殖卫生学院学报，2009（4）：39-40.

编辑/杨倩