葡聚糖凝胶色谱法测定盐酸头孢替安中聚合物

张立娟

摘 要：本文采用高效液相测定了盐酸头孢替安中聚合物的含量，固定相为葡聚糖凝胶Sephadex G-10柱（300mm×15mm），流动相A为pH7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸氢二钠溶液：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（60：40）]，流动相B为水；流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为254nm。头孢替唑钠质量浓度在10.0～320.0mg/mL范围内与聚合物峰面积之间线性关系良好。盐酸头孢替安样品溶液的质量浓度在10.0～40.0mg/mL范围内与聚合物峰面积之间线性关系良好。此方法简便、准确、重现性好，可用于盐酸头孢替安中聚合物的含量测定。

关键词：盐酸头孢替安；含量；高效液相

盐酸头孢替安适应症为主要用于对本品敏感的普通变形杆菌，葡萄球菌属、流感杆菌、克雷白杆菌属、肠道菌属、大肠杆菌、肺炎球菌、枸橼酸杆菌属、奇异变形杆菌，雷特格氏变形杆菌，摩根氏变形杆菌等所致下列感染：脓胸，胆管炎，烧伤感染，骨髓炎，胆囊炎，膀胱炎，败血症，化脓性关节炎，支气管炎，术后感染，肺化脓症，尿路炎，前列腺炎，脑脊膜炎，子宫内膜炎，前庭大腺炎、中耳炎、副鼻窦炎等[1]。高分子化合物是由千百个原子彼此以共价键结合形成相对分子质量特别大、具有重复结构单元的有机化合物，也称为高分子、大分子等。由于高分子多是由小分子通过聚合反应而制得的，因此也常被称为聚合物或高聚物。样品相对分子质量的差异进行分离的凝胶色谱法具有明显的优势。因此本文采用高效液相法对制剂中聚合物进行含量测定，为盐酸头孢替安的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）； 实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；SCQ？-8201B全不锈钢数控加热超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；EX1700S-HPLC超高效液相色谱仪（上海伍丰科学仪器有限公司）；PA225型DCPA卓越电子分析天平（上海金鹏分析仪器有限公司）；R-1001-VN旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）；UV2800双光束紫外可见分光光度计（四川汇巨仪器设备有限公司）。盐酸头孢替安对照品（中国药品生物制品检定所提供）。甲醇（北京京科瑞达科技有限公司）、乙腈（广州自力色谱科仪有限公司）、冰醋酸（广州自力色谱科仪有限公司）、磷酸氢二钠（天津市正化化工公司）、磷酸二氢钠（北京京科瑞达科技有限公司）、三乙胺（天津市正化化工公司）、磷酸（北京京科瑞达科技有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱为葡聚糖凝胶Sephadex G-10柱（300mm×15mm），流动相A为pH7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸氢二钠溶液：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（60：40）]，流动相B为水；流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为254nm[2-5]。

2.2 供试品溶液的制备

精密量取盐酸头孢替安适量，置10mL量瓶中，加水适量，超声处理5分钟，放置至室温，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取盐酸头孢替安对照品适量，用水配置成每1mL溶液中含盐酸头孢替安0.1mg。

2.4 标准曲线的制备

制备浓度为10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0mg·mL-1的头孢替唑钠对照品溶液，分别吸取上述对照品溶液注入HPLC，以流动相B为流动相进行测定，记录色谱图，以吸收峰面积对质量浓度进行线性回归，得标准曲线方程。试验表明，头孢替唑钠质量浓度在10.0～320.0mg·mL-1范围内与聚合物峰面积之间线性关系良好。制备浓度为10.0、15.0、20.0、25.0、30.0、35.0、40.0mg·mL-1的头孢替唑钠样品溶液，分别吸取上述对照品溶液注入HPLC，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图，以吸收峰面积对样品质量浓度进行线性回归，得线性方程。结果表明盐酸头孢替安样品溶液的质量浓度在10.0～40.0mg/mL范围内与聚合物峰面积之间线性关系良好。

2.5 精密度试验

精密吸取盐酸头孢替安对照品溶液，以流动相B为流动相连续进样5次测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.96%。结果表明，本方法具有良好的精密度。

2.6 重现性试验

分别称取同批盐酸头孢替安样品6份，依照含量测定项下方法，测定含量，并计算样品的RSD值为1.32%。结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.7 稳定性试验

取盐酸头孢替安样品，分别在0，2，4，8小时注入高效液相色谱仪，以流动相A为流动相，进样测定。结果表明聚合物质量分数随着时间增加很快，因此样品溶液应现用现配。

2.8 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的聚合物，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为98.1%，RSD为1.22%。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定盐酸头孢替安三批样品中聚合物的含量，结果三批样品的含量分别为0.15%、0.16%、0.18%。

3 讨论

本实验还对实验温度进行了考察，分别采用15摄氏度、20摄氏度、25摄氏度、30摄氏度、35摄氏度进行实驗。结果发现温度升高对分离度影响较大，当温度由15℃升高到25℃过程中分离度变化较大，当温度由25℃升高到35℃过程中分离度变化较小，所以选择30摄氏度为实验温度。本文对盐酸头孢替安中的聚合物进行含量测定的试验方法，结果表明该法不受其它成分的干扰，分离度好，精密度、重现性佳，可用于盐酸头孢替安中聚合物的含量测定。聚合物的含量应小于0.5%。

参考文献

[1]韩彬，刘立涛，邵振俊，柏杨，周黎明.进口头孢替安酯体内外抗菌作用的实验研究[J].四川生理科学杂志，2016（02）.

[2]任凤英，李强，杨晨，黎鹏，秦川蓉.RP-HPLC法测定盐酸头孢替安酯的含量及有关物质[J].国外医药（抗生素分册），2012（06）.

[3]常明，周冉，郧海丽，胡瑞省，张占飞，孟小龙，吕磊.注射用盐酸头孢替安高分子聚合物测定方法研究[J].中国抗生素杂志，2014（08）.

[4]唐群星，刘明东，颜有仪，叶懿，王智慧，詹兰芬，廖林川.HPLC-MS/MS分析盐酸头孢替安酯中未知杂质的结构[J].四川大学学报（医学版），2013（03）.

[5]周顺光，杨定勇，李勇，李荣东.反相高效液相色谱法测定盐酸头孢替安酯含量及有关物质[J].中南药学，2011（10）.