梅毒联合检测在梅毒首诊中的应用

蒲涛

摘要：目的 通过梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST），梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）3种方法的对比，评价梅毒联合检测在梅毒首诊中的运用。方法 收集住院及门诊7224例血清标本同时用3种方法检测。结果 7224例血清标本中TP-ELISA阳性325例，阳性检出率4.50%；TRUST法阳性260例，阳性检出率3.60%；TPPA阳性检出率320例，阳性检出率4.43%。结论 3种检测方法在方法学上各有其优缺点，同时3种检测技术可以互补方法学上的缺点，减少梅毒诊断和治疗中的误差。

关键词：梅毒；ELISA；TRUST；TPPA；误差

梅毒是由苍白螺旋体苍白亚种即梅毒螺旋体引起的一种慢性性传播疾病，可以侵犯皮肤、粘膜及其他多种组织器官，可有多种多样的临床表现，病程中有时呈无症状的潜伏状态。目前我院采用ELISA、TRUSAT、TPPA三种血清学试验联合检测梅毒，这3种检测方法在梅毒的诊疗过程中各有不同的作用，常需联合检测才能满足临床的诊疗需求。

1 资料与方法

1.1标本来源 标本来源于医院门诊梅毒疑似患者和住院感染性疾病筛查患者血清样本。

1.2检测试剂

1.2.1 ELISA 检测试剂与仪器：上海万泰生物药业有限公司 上海科华ST-36W型酶标仪（450 nm和630 nm双波长）及洗板机。

1.2.2金标法 英科新创科技有限公司。

1.2.3 TRUSAT检测试剂 上海荣盛生物药业有限公司。

1.2.4 TPPA检测试剂 日本富士赛乐迪亚TP-PA。

2 结果

7224例梅毒联合检测结果中，TP-ELISA法检测出325例阳性标本，阳性检出率4.50%；TRUST法检出阳性260例，阳性检出率3.60%；TPPA法检测出阳性320例，阳性检出率4.43%。三种血清学方法检测梅毒结果的临床意义见表1。

3 讨论

我院以往临床医师为了减少患者就诊的经济负担，要求对梅毒感染者只用ELISA一种方法或和TRUSAT同时对患者血清标本进行筛查，二者阳性再用TPPA确诊。但是单一梅毒项目的检测常由于假阴性或假阳性结果引起诊断误差导致漏诊和误诊，引起不必要的医疗纠纷。现在我院对门诊疑似梅毒感染者和住院患者做感染性疾病筛查时，均采用TP-ELISA、TRUST和TPPA法三种方法同时检测，提高了梅毒的诊断率，降低误诊率和漏诊率。常用的梅毒检测方法都存在技术性和生物性的假阳性和假阴性，如何有效避免和控制需要我们不断探索。我们只有了解每一种实验方法的优缺点和适用范围，了解假阳性和假阴性的影响因素才能有效避免差错事故的发生。

梅毒螺旋体侵入人体后，机体可针对梅毒螺旋体产生非特异性抗心磷脂抗体和特异性抗梅毒螺旋体抗体。非特异性抗心磷脂抗体是螺旋体半抗原与宿主蛋白结合，刺激机体产生抗磷脂的自身IgM和IgG抗体，即反应素。特异性抗梅毒螺旋体抗体主要是IgM和IgG抗体，IgM抗体出现时间早持续时间短，IgG抗体较IgM抗体出现时间晚且持续时间长，因此梅毒IgG抗体在有效的抗梅毒治疗后相当长时间仍可持续存在，有些患者甚至终身抗体阳性，适用于梅毒的早期诊断和治疗，但其抗体浓度较低不能预防再次感染为非保护性抗体。现在临床实验室常用的血清学试验主要就是针对这两种抗体的非螺旋体抗原试验和螺旋体抗原试验[1]。非密螺旋体抗原试验为非特异性试验，多用牛心类脂质作为抗原，测定患者血清中的反应素（抗脂质抗体）。密螺旋体抗原试验是用密螺旋体抗原检测患者血清中的特异性抗梅毒螺旋体抗体[1]。因此，为了提高梅毒的检出率，降低梅毒假阳性和假阴性结果，我们针对这两种抗体采用ELISA，TRUSAT，TPPA三种方法来协助临床梅毒的辅助诊断和治疗以及疗效观察。

ELISA：梅毒血清學的初筛试验。现在ELISA采用双抗原夹心法，主要是用基因重组体外表达的梅毒螺旋体特异抗原包被，包括螺旋体四种膜抗原检测患者血中的特异性抗梅毒螺旋体抗体，由于ELISA检测的是梅毒IgG和IgM混合抗体，因此该检测方法对早晚期梅毒有较高的诊断特异性和敏感性，但阳性结果只能解释病原体曾经感染过或正在感染机体，不能对梅毒疾病活动情况做出判断，所以不能作为抗梅毒治疗效果的监测手段[1]。同时血清中高浓度的梅毒特异性抗体常引起前带现象，导致ELISA检测的假阴性结果，此血清标本经倍数稀释后可出现阳性反应，若同时用TRUAT和TPPA方法检测结果均为阳性，这种情况常常出现在二期梅毒患者中，应该引起我们高度重视。检测中还发现5例老年人假阳性结果，可能是少数老年人血清中存在干扰ELISA反应的白蛋白抗体或一些异常蛋白[5]。

梅毒金标法是新近发展起来的快速体外诊断技术，根据双抗原夹心免疫层析原理，检测梅毒螺旋体特异性抗体，操作简单快速[2]。我们主要用于ELISA法阳性结果的复查，特别是前带现象引起的ELISA法假阴性结果的确定。缺点是梅毒特异性抗体滴度较低的标本，由于测定值低于试剂的测定下线金标法结果往往为阴性。

TRUSAT：主要用于检测血清中的反应素，操作简单快速常作为梅毒的筛查试验。但是此试验特异性不高，检测结果易受多种因素影响，除感染梅毒和其他螺旋体感染出现阳性外，某些自身免疫性疾病和生理状况的改变如急慢性感染、怀孕、麻风、吸毒、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等也可能产生低滴度的抗类脂质抗体引起交叉反应，造成生物学假阳性[4]，一般滴度小于1∶8，因此不能单独根据此项检测结果阳性诊断梅毒，可以用特异性较强的TPPA法来证实结果。同时为了避免TRUST假阴性或弱阳性结果，我们在检测过程中梅毒TRUSA滴度常做到1∶8。另外肉眼观察结果，其漏检率也较高，故特异性和敏感性较低。同时由于抗心磷脂抗体较特异性抗体出现晚，而在梅毒晚期可以转阴，因此该方法不适合一期和三期梅毒诊断[4]。TRUST滴度在临床上主要用于患者驱梅治疗后的疗效观察，有效治疗后其检测滴度表现为逐渐下降甚至转阴，复发时又可出现，滴度变化与梅毒有效治疗呈正关系。因此，该方法既可用于梅毒病原诊断，又可用于梅毒疗效观察、随访和复发的辅助诊断[2]。

TPPA：具有较高的特异性和敏感性，并且检测方法快速、简便。梅毒特异性抗体在感染梅毒螺旋体后血中出现时间及1、2期梅毒中的检出率几乎等同于非特异性抗体，感染者一旦感染后该抗体有可能终身检测为阳性，因此不能作为梅毒的疗效评估、复发和再感染诊断。梅毒特异性抗体生物学假阳性极低，可以利用此试验排除非梅毒螺旋体抗原血清试验所致的生物学假阳性。总之，在梅毒抗体检测方法特异性上优于TRUST法，适用于梅毒ELISA和TRUST测定阳性后的确诊试验[4]，但不适合大批量标本的筛查。

由此可见，不同梅毒血清学检测方法联合运用能够提高梅毒检出的准确率[3]，同时在临床工作中对待特殊结果应积极与医生和患者沟通，做出合理的解释。在操作过程中，除了生物学影响因素外，标本的溶血、细菌污染、保存不当、洗板时洗液溢孔污染等都会引起结果假阳性，这些情况都要注意避免。梅毒血清学检查是诊断梅毒的重要依据，但不是唯一依据。因此，为了避免梅毒检测方法学上的误差，我们针对上述情况与医生协商沟通，要求医生对于疑似患者最好进行三种方法的联合检测，以提高梅毒血清学检测结果的准确性，同时对梅毒的诊断除依据化验结果外，更要详细了解患者的生活史和既往病史，结合患者临床表现、年龄等因素综合分析后慎重做出判断，这样才能从根本上减少实验方法学缺陷造成的假阳性和假阴性误差，降低梅毒个体的漏检和误诊。

参考文献：

[1]张会平.联合检测方法检测梅毒的效果评价[J].实用预防医学，2012，19（9）：1141-1142.

[2]王华，李代渝，雷刚明.梅毒螺旋体血清学检测方法比较[J].中华检验医学杂志，2007，30（6）：660-661.

[3]钟晓芬，毛凌哲.不同梅毒血清学试验联合运用价值分析[J].检验医学，2016，31（3）：217-219.

[4]曹龙古，欧阳丹明，周志雄，等.梅毒螺旋体四种血清学检测方法比较及检测模式初探[J].实验与检验医学，2015，33（5）：571-573.

[5]王红枫，方芳.老年梅毒155例临床分析[J].皮肤性病学杂志，2015，29（1）：58-60.

编辑/王海静