COX-2和PCNA在膀胱白斑中表达的研究

陈乐仲， 田小园， 徐传彬， 张 宇， 何思挺

(广东省深圳市宝安区中心医院泌尿外科， 广东 深圳 518102)

COX-2和PCNA在膀胱白斑中表达的研究

陈乐仲， 田小园， 徐传彬， 张 宇， 何思挺

(广东省深圳市宝安区中心医院泌尿外科， 广东 深圳 518102)

目的：探讨COX-2和PCNA在膀胱白斑中的表达以及临床意义。方法：采用免疫祖化S-P法，检测26例膀胱白斑患者以及26例正常尿路上皮以及膀胱癌组织中COX-2和PCNA的表达情况。结果：两种蛋白在正常尿路上皮中偶见表达，在膀胱白斑中COX-2的阳性表达为46.15%，膀胱白斑中PCNA的阳性表达为53.84%。在膀胱癌中COX-2的阳性表达为76.92%，PCNA的阳性表达为69.23%。结论：COX-2和PCNA的表达与膀胱白斑的发生相关，膀胱白斑的发生以及进展可以与膀胱癌的发生有一定的相关性。

膀胱白斑； 免疫组织化学； 环氧合酶-2； 增殖细胞核抗原

研究表明肿瘤的的发生可能与多个原癌激活与抑癌基因失活等多阶段的过程。COX-2(环氧合酶2)是催化花生四烯酸氧化合成为前列腺素类过程重要的限速酶,COX-2在正常的组织中较少表达，而在各种肿瘤组织以及炎性反应等情况中表达升高。PCNA(增殖细胞核抗原)是反应细胞增生的指标，在多种肿瘤组织中均有表达增高的情况。本研究通过免疫组化方法，检测COX-2以及PCNA在膀胱白斑中的表达，以探讨COX-2以及PCNA在膀胱白斑发生以及发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2013年1月至2016年8月在我院经过膀胱镜检查并且经活检病理证实为膀胱白斑患者26例，患者均为女性，年龄39～55岁，平均年龄42.25±9.86岁。单发的16例，多发的10例患者，全部活检组织再次经过10%的福尔马林固定以及石蜡包埋固定。选择同时期在我院行膀胱镜检查活检正常的尿路上皮组织以及膀胱癌患者各26例作为对照组。

1.2 免疫组化方法：将包埋的蜡块标本行4μm的连续切片，切片脱蜡后予以过氧化氢阻断内源性酶进行抗原修复。严格按照试剂说明书进行免疫组化染色试验操作流程，使用血清封闭液封闭，室温下20min后移除多余血清，缓冲液清洗后加入一抗后，4℃过夜，缓冲液清洗后再加入2抗，缓冲液清洗后加入显色剂显色，苏木素复染后后中性树脂封片。

1.3 观察指标：根据染色的强度以及显色细胞的比例将染色分为4级：按照染色深浅评分,COX-2细胞质中出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，阳性细胞数为0(-)；阳性细胞数<25%的为(+)；阳性细胞数在25～50%的为(++)；阳性细胞数>50%的为(+++)。PCNA定位于细胞核中，分级如下：细胞无着色，阳性细胞数<10%为阴性(-)；细胞轻度着色至当黄色，阳性反应细胞数目在11%～25%的为弱阳性(+)；细胞着色为黄色，阳性反应细胞数目26%～50%的为阳性(++)；细胞明显着色，呈棕黄色，阳性反应细胞数目>50%的为强阳性(+++)。在显微镜下随机取5个高倍视野，按照以上标准进行评估。以已知的胃癌做阳性对照，以正常的尿路上皮组织做阴性对照。

2 结 果

2.1 三组患者的一般资料比较：由表1可知，三组患者在性别、年龄方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

表1 三组患者的一般资料对比

2.2 COX-2与PCNA在正常尿路上皮，膀胱白斑以及膀胱癌组织中的表达：COX-2是以细胞质内出现黄-棕色颗粒为阳性反应，正常的尿路上皮中少见阳性表达，而膀胱白斑中的COX-2表达明显增多，在膀胱癌的大部分病例中均见COX-2的表达。PCNA定位于细胞核中，正常的尿路上皮中偶见阳性表达，而膀胱白斑中的PCNA表达明显增多，在膀胱癌的大部分病例中均见PCNA的表达(见图1)。

图1 A～E为正常尿路上皮，膀胱白斑以及膀胱癌中COX-2表达情况(其中图A、图B为正常尿路上皮；图C、图D为膀胱白斑；图E、图F为膀胱癌)。图G～M为PACA E为正常尿路上皮、膀胱白斑以及膀胱癌中COX-2表达情况(其中图G、图H为正常尿路上皮；图I、图D为膀胱白斑；图K、图M为膀胱癌)。

2.3 COX-2在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌组织的表达情况：正常尿路上皮中，有1例呈现阳性反应，1例呈现中等强度阳性反应；而在膀胱白斑中COX-2有46.15%(12/26)呈阳性表达，其中8例呈现阳性反应，4例呈现中等强度阳性反应，未发现强阳性表达；在膀胱癌的76.92%(20/26)病例中均见COX-2的阳性表达，但三组组间比较，均无统计学差异(P>0.05)(见表2)。

表2 COX-2在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌的表达

2.4 PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌组织的表达情况：正常尿路上皮中，仅有1例呈现阳性反应，而在膀胱白斑中的PCNA有53.84%(14/26)的病例呈现阳性反应，其中弱阳性10例，中等强度阳性3例，1例强阳性表达。膀胱癌中有69.23%(18/26)的病例阳性表达，其中弱阳性3例，中等强度阳性14例，1例强阳性表达。但三组组间比较，均无统计学差异(P>0.05)(见表3)。

表3 PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑及膀胱癌的表达

3 讨 论

膀胱白斑的形成目前主要认为是由于膀胱移行上皮化生为鳞状上皮，胞核较幼稚，且胞浆内可见较丰富的张力原纤维，在连接部位可见丰富的桥粒结构，表层细胞有明显的角质化，形成角质蛋白[1]，随着医学的进步以及认识的扩展，近年来的报道逐渐增多，因其与慢性膀胱炎在临床症状与体征上无显著的差异，且尿常规以及尿培养也常表现为阴性，因此，常易漏诊以及误诊。膀胱白斑发病机制目前尚不明确，认为可能与长期的膀胱慢性刺激，下尿路感染，梗阻以及增生性病变有关，其诊断主要依靠膀胱镜检、在膀胱镜下主要表现为多见于膀胱三角区的膀胱粘膜白色斑块状隆起，在病理检查上可分为增生型，疣状型以及萎缩型[2,3]。

环氧化酶是催化花生四烯酸氧化合成为前列腺素类过程重要的限速酶,目前发现有两种亚型，COX-1(环氧合酶1)与COX-2(环氧合酶2)，COX-2在人体正常的组织中较少表达或者无表达，而在各种肿瘤组织以及炎性反应等情况中表达升高，如胃癌[4-6]、食管癌[7,8]、前列腺癌、肺腺癌以及乳腺癌、子宫内膜癌等均发现高表达情况，可能与该基因能促进肿瘤细胞的增殖，激活癌基因，抑制抑癌基因、肿瘤细胞凋亡以及机体抗肿瘤免疫相关；研究表明COX-2尚能参与实体肿瘤的血管新生，在膀胱癌中，研究发现COX-2呈现高表达的情况，且与肿瘤的分级以及分期呈正相关。PCNA(增殖细胞核抗原)是DNA聚酶的辅酶，能直接参与细胞内DNA的合成，反应细胞增生的情况，且在增殖的细胞中表达，而肿瘤细胞中均有显著增殖的情况发生，因此PCNA在多种肿瘤组织中均有表达增高的情况。研究表明，在泌尿系统膀胱癌中PCNA的增殖随着分级的逐渐增高而增加，且浸润性的高于浅表性肿瘤，复发性肿瘤高于未复发性肿瘤。

本研究通过免疫组化SP法，以检测COX-2和PCNA在正常尿路上皮、膀胱白斑以及膀胱癌组织中的表达，发现COX-2是以细胞质内出现黄-棕色颗粒为阳性反应，正常的尿路上皮中少见阳性表达，而膀胱白斑中的COX-2表达明显增多，其阳性表达可达46.15%，但低于膀胱癌中76.92%的阳性表达。而PCNA定位于细胞核中，正常的尿路上皮中偶见阳性表达，而膀胱白斑中的PCNA表达明显增多，为53.84%，而在膀胱癌的PCNA的阳性表达为69.23%，但两种蛋白的表达差异情况在三组间均无统计学意义(P>0.05)，表明膀胱白斑不是慢性炎性反应而造成的，而是一种病理性改变，是可能向着膀胱癌发展的癌前病变，在临床发现诊断后均应该积极的及时的治疗。

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Expression of Cyclooxygenase-2 and Proliferating Cell Nuclear Antigen in Bladder Leukoplakia

CHENLezhong,TIANXiaoyuan,etal

(TheCentralHospitalinBaoanDistrictofShenzhen,GuangdongShenzhen518102,China)

Objective:To explore the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen in bladder leukoplakia.Methods: The expressions of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen in 26 cases of bladder leukoplakia and 26 cases of normal urothelium and 26 cases of bladder carcinoma were detected by immunohistochemistry S-P method. Results: Two kinds of protein expression in normal urothelial were occasional, the expression of cyclooxygenase-2 in bladder leukoplakia was 46.15% and bladder cancer was 76.92%, the expression of proliferating cell nuclear antigen in bladder leukoplakia was 53.84% and bladder cancer was 69.23%. Conclusion: The expression of cyclooxygenase-2 and proliferating cell nuclear antigen is correlated with the occurrence of bladder leukoplakia, and the occurrence and progression of bladder leukoplakia may be related to the occurrence of bladder cancer.

Bladder leukoplakia; Immunohistochemistry; Cyclooxygenase-2; Proliferating cell nuclear antigen

1006-6233(2017)04-0659-04

广东省深圳市科技计划项目，(编号：JCYJ20150403150555637)

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.04.037