覆盆子中椴树苷和山奈酚含量测定

占少华

摘要：目的 探讨覆盆子中椴树苷和山奈酚含量测定方法及效果。方法 采用两种不同的药物含量提取方法对覆盆子中椴树苷和山奈酚含量进行测定。结果 不同提取方法覆盆子椴树苷和山奈酚含量差异明显。结论 实验结果为建立覆盆子药材质量标准的制定提供参考。

关键词：覆盆子；高效液相色谱法；椴树苷；山奈酚；测定方法

覆盆子属于蔷薇科植物华东覆盆子（Rubus chingii Hu）的干燥果实，性温、味甘，具有益肾固精缩尿、养肝明目等功效。同时，药物还具有抗诱变、抗氧化、改善记忆、延缓衰老及提高机体免疫活性、抗炎、抑菌等药理作用，可用于遗精滑精等症状的治疗，还具有降血脂、降血糖等作用。目前，中国药典对于覆盆子药材的质量控制方法并不完善，尚缺乏检查和含量的测定项。为了保证药物临床使用的安全性，完善药典相关空缺，本文对覆盆子中进一步完善药典，保证临床用药安全有效，对覆盆子中椴树苷和山奈酚含量进行测定，建立高效液相色谱法测定覆盆子中椴树苷和山萘酚含量方法，报告如下。

1.仪器与材料

1.1实验仪器 SSI PC2000型高效液相色谱仪（美国科学系统公司）；EZChrom Elite Client/Server色谱工作站，ALl04电子天平（梅特勒一托利多仪器有限公司）。510二元汞，996二极管阵列检测器。使用智能药物检测仪。纯净水、金黄膏（由我院自主研制）、甲醇一水（27：23）；色谱柱：Kromasfl C18柱流动相，色谱纯、硫酸二化钠、硫酸钠，分析纯。

1.2材料 覆盆子：江西德兴，对照品：椴树苷对照品（上海永恒生物科技有限公司）；山奈酚对照品（上海永恒生物科技有限公司）。

1.3方法

1.3.1供试品溶液制 备精确称取定量覆盆子，采用粉碎机粉碎成细粉，并过60目筛。同时，称取精密称定1.5 g，置于圆底烧瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30 ml，回流提取1h。放冷后称定质量，采用浓度为80%的甲醇补充减少质量，混合均匀、滤过。

1.3.2对照品溶液的制备

1.3.2.1椴树苷和山奈酚对照溶液的制备 精密称取椴树苷对照品9.98mg和山奈酚对照品11.84mg置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得含椴树苷0.3992 mg/ml的对照品溶液。

1.3.3HPLC测定操作 前期准备：开启高效液相色谱仪后，排气，排气完成后，关上排气阀，先用纯甲醇冲洗色谱柱再用流动相冲洗色谱柱，待柱子平衡后开始进样；进样测定：逐一精密吸取对照品溶液及不同提取方案所得到的供试品溶液50 ul（定量环20 ul），注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。

1.4色谱条件的选择

1.4.1检测波长的选择 将上述获得溶液等进行全波长图谱扫描，确定最大吸收波长。本次研究中，进行三次全波长扫描，且最大波长为316 nm，最大吸收值为2.8，见表1。

色谱柱：Apollo C18（4.6 mmx250 mm，5 um），流动相：A相为乙腈，B相为0.1%磷酸水溶液，检测过程中采用梯度洗脱程序进行。控制流速为1.0 ml/min，检测波长为346 nm，柱温控制在30℃。进样量均为10 uL。

1.4.2色谱流动相比例的选择 采用流动相甲醇-0.1%的磷酸水比例为55：45、52：48、50：50按进行高效液相检测，见图1。

由此看出：当甲醇浓度为0.1%的磷酸水=55：45时，分离效果不好，适当调低甲醇的比例，保留时间延长，分离度增大；当甲醇：0.1%的磷酸水=52：48时分离效果较好，再减小甲醇比例，分离效果变化不大，但保留时间延长较大。因此，选用甲醇：0.1%的磷酸水=52：48作为流动相。

1.4.3色谱条件的确定 覆盆子的HPLC含量测定条件为：高效液相色谱仪（Agflentl260，uv检测器）；色谱柱（C18，5 um，200×4.6 mm）；流动相：甲醇-0.1%的磷酸水=52：48；检测波长：366 nm；柱温：25℃；流速1 ml/min。

1.5提取工艺的考察

1.5.1提取溶媒的考察 精密称取覆盆子粉末（过60目筛）1.5 g两份，置锥形瓶中，分别准确加入80%甲醇25 ml、80%乙醇25 m1，称重，回流提取1 h，取出，放至室温后，再称定重量，用所用的溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤。取续滤液用0.45um微孔滤膜过滤，制得供试品溶液，吸取20ul测定峰面积。

由此看出：乙醇的回流提取效果不如甲醇回流提取效果好，故采用甲醇作为提取溶剂。用甲醇回流方法提取的峰面积比超声方法大，故选用回流提取方法。

1.6含量测定 标准品测定：取混合标准品椴树苷（0.11976mg/m1）山奈酚（0.02368 mg/m1）进行峰面积的测定，见图3。平均峰面积分别为椴树苷2388.4，山奈酚2188.2。

样品测定：取德兴覆盆子粉末，过60目筛。取约1.5 g，精密称定。置于圆底烧瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30 ml，称定质量，回流提取1 h。放冷后称定质量，用80%的甲醇补充减少的質量，混匀，滤过，取续滤液作为供试品的溶液，见图4。

由此看出：平均峰面积分别为椴树苷493.8，山奈酚141.5。得出：德兴覆盆子中椴树苷和山奈酚的含量分别为0.4933 mg/g，0.0302 mg/g。

3.讨论

覆盆子是临床上常用的一线中药，药物作用相对较多，但是对于其质量控制尚缺乏统一的标准。本次研究中，采用甲醇-0.1%的磷酸水（55：45）时，分离度并不是很好，所以尝试减小甲醇的比例，发现当甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）时，椴树苷和山奈酚的分离度都较好，故选用甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）作为流动相。通过全波长扫描确定最佳波长366nm。由上述单因素实验选定，覆盆子的提取条件为：30 ml80%甲醇在80℃条件下回流提取1 h。通过上述研究测定，最终得出以下结果：德兴覆盆子中椴树苷和山奈酚的含量分别为0.4933 mg/g，0.0302 mg/g。

高效液相色谱法测定结果显示：不同地区生长的覆盆子中椴树苷和山奈酚含量差异较大，其中以德兴地区的覆盆子中椴树苷、山奈酚含量最高。所以有必要对覆盆子的种植进行规范化处理，完善质量监管机制。