两种多糖对小白鼠机体免疫力效果的影响

薛梅

摘 要：天然活性多糖对机体没有明显的毒副作用，不但具有免疫调节、抗肿瘤等生物功能，还具有抗炎症、抗氧化等多种生物功能。而在畜禽保健中，植物多糖具有毒副作用小、无残留等优点，属于一种天然的产品。为了比较2种多糖对提高小白鼠机体免疫力效果的影响，本文以枸杞多糖和黄芪多糖为例，对小白鼠进行灌胃，并测试了外周血IgG、IgM含量，同时对其免疫器官指数等也进行了测量，从而以期能够以这种多糖作为功效成分的动物保健品的开发，提供一些质量控制、合理配方和制定质量标准提供科学依据。

关键词：枸杞多糖；黄芪多糖；小白鼠；机体免疫力

中图分类号：Q629.12 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170532004

进入21世纪以来，畜牧养殖业进入了工业化生产中，畜牧养殖业得到了快速的发展。但同时在畜禽中往往无法建立充分的免疫环境，受许多因素的影响，畜禽免疫力下降，预防免疫效果不佳。大量研究认为，多糖及多糖复合物能够参与免疫功能的调节，参与和介导了细胞各种生命现象的调节。而机体的免疫力系统及其免疫应答不但对各种正常生理功能的提高具有重要作用，还对机体的健康成长具有重要作用。根据相关研究表明，枸杞多糖能明显提高小白鼠足跖肿胀度、脾脏生成抗体细胞数等，对小白鼠淋巴细胞增殖能力无显著影响，并且对正常小白鼠的细胞免疫、体液免疫力及巨噬细胞功能都有明显的增强作用。而黄芪含有氨基酸多糖、黄茂皂贰、黄酮类、微量元素等多种生物活性物质，是临床上用于扶正固本的一种常用中药。其中黄芪多糖具有较强的免疫活性，是黄芪的主要药用活性成分。根据相关研究表明，黄芪多糖能显著增大小白鼠脾脏指数、腹腔巨噬细胞指数、胸腺指数，能够显著提高小白鼠的免疫功能，同时还能促进T淋巴细胞增殖。为了比较2种多糖对提高小白鼠机体免疫力效果的影响，本文以枸杞多糖和黄芪多糖为例，对小白鼠进行灌胃，并测试了外周血IgG、IgM含量，同时对其免疫器官指数等也進行了测量，从而以期能够以这种多糖作为功效成分的动物保健品的开发，提供一些质量控制、合理配方和制定质量标准提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料和试验动物

选用了北京生态尔生物科技有限公司生产的黄芪多糖，选用了百瑞元枸杞产业发展有限公司生产的枸杞多糖，黄芪多糖的含量为70%，枸杞多糖的含量为30%。试验动物购自某医科大学实验动物中心，4～6周龄、雄性的ICR小白鼠，小白鼠属于SPT级，共90只，饲养于SPF级屏障环境中，符合国建实验动物饲养及管理条例，并且饲养的时候选用了进口独立通风笼具。

1.2 主要试剂和主要仪器

主要试剂购自R&D公司，包括小白鼠免疫球蛋白G（IgG），批号为2014-5cx-2014-11AZ免疫球蛋白M（IgG）定量检测卡。主要仪器选自上海安亭科学仪器有限公司生产的离心机；上海科华仪器有限公司生产的酶标仪、自动洗板机；天津泰斯特有限公司生产的电热恒温器；圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产的血常规分析仪。

1.3 实验动物分组与给药

随机将90只小白鼠分为3组，每组30只，按照体重140mg/kg将小白鼠分为试验组，并进行多糖灌胃，其中，将枸杞多糖灌于A组小白鼠的胃中，将黄芪多糖灌于B组小白鼠胃中；将枸杞多糖和黄芪多样等量复配后灌于C组小白鼠胃中，连续灌胃30d，小白鼠自由采食。

1.4 检测指标

1.4.1 检测生长状况及增重率

试验开始前及试验开始后，每隔10d对小白鼠的体重进行测量1次。不但要观察小白鼠毛色、饮食等情况，还要观察小白鼠的精神状况如何和活动情况。

1.4.2 血常规检测

在试验开始后，在各组取10只小白鼠，每隔10d对这些小白鼠进行称量体重。屠宰前在小白鼠的尾部，静脉采血20μL，并放置到稀释液中进行分析，分析的时候选用血常规分析仪，不但对白细胞、淋巴细胞的数量进行测定，还要对红细胞数量进行测定。

1.4.3 外周血IgG、IgM含量的检测

屠宰前，各组小白鼠要摘眼球采血0.5mL，并且要在室温条件下放置1h。同时为了使血清充分析出，要将凝固血与管壁剥离。收集血清要在2000r/min离心10min，检测的时候选用小白鼠IgG/IgM酶联免疫分析（ELISA）试剂盒。

1.4.4 免疫器官指数的测定

小白鼠处死的方法采用脱颈椎方法，为了计算出胸腺指数和脾脏指数，解剖后取出胸腺和脾脏，并分别对小白鼠的尸体进行称重。计算公式为：胸腺或脾脏指数=胸腺重或脾脏重（mg）/体重（g）。

2 结果与分析

2.1 血液IgG、IgM含量受枸杞多糖、黄芪多糖及其组合的影响

根据上述试验得出枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液IgG、IgM含量的影响结果（表1）。

由此可见：在灌服10d的时候，在IgG 含量方面，A组与C组进行比较P<0.05，差异显著。灌服20d的时候，在IgG 含量方面，A组与C组比较p<0.01，差异极其显著；在灌服30d的时候，在IgG 含量方面，A组与B组进行比较P<0.05，差异显著。在灌服10d的时候，在IgM含量方面，A组、B组与C组进行比较P<0.05，差异显著；在灌服30d的时候，在IgM含量方面，A组与B组进行比较P<0.05，差异显著。充分说明，枸杞多糖效果优于其他多糖，在枸杞多糖灌服的10d、20d、30d的时候，IgM含量最终达到了一个较高的水平，但是逐渐增加的状态，而IgG 含量始终维持在一个较高的水平上。

2.2 枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血细胞的影响

根据上述试验，得出了枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液白细胞、淋巴细胞、红细胞的影响（109·L-1），灌服枸杞多糖、黄芪多糖及其组合10d的时候，A组、B组、C组分别为8.04±1.73、6.24±1.46、7.93±3.61；灌服20d的时候，A组、B组、C组分别 为：4.95±0.92、7.37±2.27、7.75±3.91；灌服30d的时候，A组、B组、C组分别为： 4.85±0.49、3.63±0.81、4.93±1.53。由此可见，在灌服10d的时候，白细胞数量方面：B组和C组略低于A组；而在灌服20d的时候，白细胞数量方面：A组明显低于B组和C组；在灌服30d的时候，白细胞数量方面：各组都比前期降低。

2.3 枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液淋巴细胞的影响

根据上述试验，得出了枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液淋巴细胞的影响（109·L-1），灌服10d的时候，A组、B组、C组分别为：6.38±1.45、 5.12±1.39、6.13±2.22；灌服20d的时候，A组、B组、C组分别为：3.62±1.20、3.57±0.90、3.52±1.40；灌服30d的时候，A组、B组、C组分别为： 2.65a±0.35、2.76a±0.50、3.93b±1.27。（注：没有肩标或字母相同表示差异不显著P>0.05，同列数据肩标字母不同表示差异显著P<0.05）。由此可见，淋巴细胞数量在灌服10d、20d的时候，A组略高于B组和C组，但各组差异不显著（P>0.05），在灌服30d的时候，C组数量高于A组和B组，并且A组和B组细胞数量与C组比较差异显著（P<0.05）。

2.4 枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液红细胞数量的影响

根据上述试验，得出了枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液红细胞数量的影响（1012·L-1），灌服10d的时候，A组、B组、C组分别为9.36a±0.40、 7.80b±1.54、9.39a±0.23；灌输20d的时候，A组、B组、C组分别为8.62±0.47、9.85±0.32、9.30±0.88 ；灌输30d的时候，A组、B组、C组分别为 8.43±0.99、9.03±0.11、9.54±0.17。（注：没有肩标或字母相同表示差异不显著P>0.05，同列数据肩标字母不同表示差异显著P<0.05）由此可见，在灌服枸杞多糖、黄芪多糖及其组合10d的时候，A组和C组的红细胞数量与B组比较差异显著（P<0.05）；在灌服枸杞多糖、黄芪多糖及其组合20d的时候，各组间的红细胞数量差异不显著（P>0.05）。

2.5 枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对小白鼠胸腺指数、脾脏指数的影响

根据上述试验，得出枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对小白鼠免胸腺指数和脾脏指数的影响（ mg·L-1）。灌服10d的时候，A组、B组、C组胸腺指数分别为： 2.44a±0.02、2.22a±0.02、2.44a±0.02，脾脏指数分别为： 4.01a±0.15、4.15a±0.06、 4.01a±0.14；灌服20d的时候，灌服10d的時候，A组、B组、C组胸腺指数分别为2.45a±0.01、 2.37a±0.03、2.47a±0.01，脾脏指数分别为： 4.39a±0.07、4.60a±0.07、4.39a±0.07；灌服30d的时候，灌服10d的时候，A组、B组、C组 胸腺指数分别为：2.59a±0.10、 2.59a±0.04、2.59a±0.09，脾脏指数分别为：4.84a±0.11 、4.67a±0.05、 4.83a±0.10。（注：同列数据肩标字母相同表示差异显著P>0.05）。由此可见，在灌服枸杞多糖、黄芪多糖及其组合10d、20d、30d的时候，各组间的胸腺指数和脾脏指数差异不显著（P>0.05）。

3 讨论

3.1 枸杞多糖和黄芪多糖及混合多糖对小白鼠血细胞数量的影响

通过吞噬和产生抗体等方式，包细胞具有抵御和消灭入侵病原微生物的作用。本试验结果表明：在灌服枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖的第10天的时候，具有较好效果的是枸杞多糖；在灌服枸杞多糖和黄芪多糖及其组合的第20天的时候，具有较好效果的是混合多糖；在灌服枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖的第30天的时候，具有较好效果的也是混合多糖。根据殷海成的研究证实：将免疫多糖添加到饲料中，能够使中华倒刺鲃血液中的白细胞数量得到增加；并且血液白细胞通过广泛的动员之后，能够具有吞噬作用，能够提升非特异性免疫功能，同时也大大增强了吞噬的能力。而淋巴细胞是由淋巴器官而产生的，属于白细胞中的一种，是机体免疫应答功能的重要细胞成份。本试验中，在灌服枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖的第10天的时候，A组淋巴细胞数量最多，并且在灌服枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖的第20天的时候，A组淋巴细胞数量也是最多，由此可见，对于淋巴细胞的增值来说，枸杞多糖具有很好的效果。

3.2 枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖对小白鼠血清中IgG、IgM含量的影响

IgG能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用，能够调理巨噬细胞，是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体。根据本试验统计结果显示，在对提高小白鼠血清中IgG水平的作用上，黄芪多糖和混合多糖明显低于枸杞多糖。肖征忠等研究发现，小白鼠血清中的IgG水平在饲喂低剂量灰树花多糖后，得到了显著地提升，由此可见，对于小白鼠体液免疫来说，灰树花多糖具有增强的作用。与IgG相比，在杀菌、溶菌等方面，IgM高出500～1000倍，并且在促吞噬和凝集方面也高出很多，是高效能的抗生物抗体，是抗原刺激诱导体液免疫应答中最先产生的免疫球蛋白。张志军等研究证实，在IgM水平方面，茯苓多糖处理组高于生理盐水对照组。本试验中，在灌服枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖第10天、20天、30天的时候A组的IgG水平始终维持在一个较高的水平，而IgM水平也会最终达到一个较高的水平，但是呈现逐渐升高的态势，充分说明，与黄芪多糖和混合多糖相比，枸杞多糖效果最优。

3.3 枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖对小白鼠生长状况、体重及其免疫器官指数的影响

一定程度上，免疫器官指数能够反应出动物机体的免疫能力。本试验说明，枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖都可以提高小白鼠的体重，并且与黄芪多糖和混合多糖相比，枸杞多样明显具有最优的作用；但是由于本次试验采用灌服方式，与黄芪多样和缓和多样相比，枸杞多糖比较差异不显著（P>0.05），具有提高免疫器官指数最明显的效果。从药物代谢动力学角度考虑，采用灌服或注射等方式，会影响到枸杞多糖和黄芪多糖及其混合多糖的吸收。

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