血中mRNA与HBV慢加急肝衰竭预后的相关性研究

马大鹏+吴锋+梁恩富

【摘要】 目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）慢加急肝衰竭（ACLF）患者血中mRNA表达及意义。方法 选取20例HBV所致ACLF患者作为肝衰竭组， 20例健康体检者作为对照组， 分析比较两组临床相关指标[谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ谷氨酰转移酶（γ-GT）、凝血酶原活动度（PTA）、总胆红素（TBIL）、肌酐（Cr）、白细胞计数（WBC）]， 并分析HBV-ACLF患者三种微小RNA（mRNA）和临床指标[ALT、AST、白蛋白（ALB）、乙肝病毒的脱氧核糖核酸（HBV-DNA）、生存时间、PTA、凝血酶原时间的国际标准化比值（INR）、血小板（PLT）、TBIL、直接胆红素（DBIL）、乙肝核心抗体（HBcAb）]的关系。结果 肝衰竭组患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC分别为（156.41±214.08）U/L、（232.59±314.12）U/L、

（21.46±8.97）%、（324.60±164.76）μmol/L、（125.61±101.20）μmol/L、（8.12±5.29）×109/L， 与对照组的（26.67±

30.02）U/L、（24.22±7.60）U/L、（114.00±11.31）%、（12.83±3.25）μmol/L、（61.11±12.84）μmol/L、（5.14±

1.74）×109/L比较， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。HBV-ACLF患者mRNA 150-5P与ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相关， 与生存时间高度相关；mRNA 146a-5P与ALT高度相关， 与AST、PTA、PLT、TBIL中度相关；mRNA 29a-3P与生存时间、PLT 、TBIL中度相关。结论 肝病病情越重， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P水平越低， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P对HBV-ACLF患者的预后评估有着重要意义， 可以作为肝衰竭新的预后判断指标。

【关键词】 乙型肝炎病毒；芯片；慢加急性肝衰竭

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.11.031

慢加急性肝衰竭（acute on chronic liver failure， ACLF）具有起病急、并发症多、预后差的特点， 虽然近几年提倡的多学科重症监护治疗及人工肝治疗均在很大程度上提高了生存率， 但是ACLF的病死率仍然很高， 30%～50%患者会出现肝脏相关并发症， 大多数患者最终因多器官功能衰竭而死亡， 未经治疗的ACLF患者死亡率可达75%。因此对于ACLF的早诊断及早治疗是需要解决的难题[1]。mRNA是一类存在于真核生物中， 其大小长约18～25个核苷酸， 具有多种调控功能的非编码RNA， 越来越多的研究表明mRNA在肝脏的炎症反应中扮演重要角色[2]。为研究HBV导致的慢加急性肝衰竭外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells， PBMC）中mRNA的表达情况， 作者利用人类mRNA OneArray芯片找出表达水平明显改变的mRNA ， 以期探究mRNA在HBV导致的慢加急性肝衰竭中表达情况， 并初步分析其临床意义及应用价值。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2014年8月～2016年8月大连市第六人民医院20例HBV所致ACLF患者作为肝衰竭组， 诊断均符合中华医学会肝病学分会《肝衰竭诊治指南（2012年版》[2]诊疗标准。肝衰竭组中男8例， 女12例， 平均年龄（45.07±8.14）岁。另选20例健康体检者作为对照组， 男11例， 女9例， 平均年龄（33.30±8.34）岁。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 實验方法 以Trizol法（淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物科技有限公司， RNAiso Plus 购自TaKaRa公司）提取外周血RNA ， 通过荧光实时定量RT-PCR检测方法（反转录-荧光定量PCR引物由上海卓立技术科技公司合成）[3]， 分别检测两组的筛选mRNA定量。美国Beckman全自动生物化学分析仪检测生物化学指标， 采用STA-revolution（全自动血凝仪）及配套试剂盒检测凝血功能。分析比较两组患者的临床相关指标（ALT、AST、γ-GT、PTA、TBIL、Cr、WBC）， 并分析HBV-ACLF患者三种mRNA和临床指标（ALT、AST、ALB、HBV-DNA、生存时间、PTA、INR、PLT、TBIL、DBIL、HBcAb）的关系。

1. 3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。相关性分析采用Pearson分析， Pearson相关系数的绝对值 （|r|）>0.8 为高度相关， |r|>0.5为中度相关， |r|>0.3为低度相关。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组的临床相关指标比较 肝衰竭组患者的ALT、AST、PTA、TBIL、Cr、WBC水平与对照组比较， 差异均具有统计学意义（P<0.05）；肝衰竭组患者的γ-GT与对照组比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2. 2 HBV-ACLF患者三种mRNA和临床指标的相关系分析 HBV-ACLF患者mRNA 150-5P与ALT、AST、PLT、TBIL、DBIL中度相关， 与生存时间高度相关；mRNA 146a-5P与ALT高度相关， 与AST、PTA、PLT、TBIL中度相关；mRNA 29a-3P与生存时间、PLT 、TBIL中度相关。见表2。

3 讨论

目前临床治疗ACLF仍存在很多阻碍， 虽然多学科重症监护治疗及人工肝治疗等方法在治疗过程中取得了一定成绩， 但治疗效果仍有待提高[4]。近年来研究表明mRNA在肝脏的炎症反应中扮演重要角色， 本次实验就是探究mRNA是否可以成为HBV导致的ACLF诊断预测新的标志物， 另外mRNA在HBV导致的ACLF是否参与炎症反应来影响疾病的进展。宁琴等[5]发现miR-146a敲除小鼠因超活化NF-κB会出现的超感染等炎症状态， 考虑其机制可能为miR-146a在NF-κB的驱使下是TLR信号通路及维甲酸诱导基因的负调节基因， 在巨噬细胞或者小肠上皮细胞中， miR-146a与其上游的主要组件， 包括IRAK1， IRAK2以及TNFR相关因子靶向结合[6]。本研究发现HBV-ACLF患者血清中mRNA 146a-5P的水平明显下降， 与 ALT、AST明显相关， 证明了mRNA 146a-5P确实参与炎症反应， 与文献[7]研究结果相符。miR-150则在组织缺氧情况下， 由缺氧诱导因子-1通过负性调节下调miR-150的表达， 其下游靶点血管内皮生长因子A（VEGA）mRNA及蛋白质增加， 促进肝再生。由此说明mRNA能够调节肝细胞凋亡， 参与肝再生过程， 在肝衰竭进展中起重要作用， 可能作为肝衰竭预后的潜在标志物。黄朝兴等[8]发现重型肝炎患者的mRNA 150-5P的表达是下调的， 本次实验mRNA 150-5P在肝衰竭组的表达较正常下调， 与其他相关报道相符。

综上所述， 肝病病情越重， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P水平越低， mRNA 146a-5P和mRNA 150-5P对HBV-ACLF患者的预后评估有着重要意义， 可以作为肝衰竭新的预后判断指标。

参考文献

[1] 李兰娟， 段钟平. 肝衰竭诊治指南（2012年版）. 中华肝脏病杂志， 2013， 21（3）：210-216.

[2] 中华医学会感染学分会肝功能衰竭与人工肝学组. 肝功能衰竭诊疗指南. 中华传染病杂志， 2006， 24（6）：422-425.

[3] 邓天勤， 黄永漢， 甄劲仪， 等. 男性不育伴乙型肝炎病毒感染患者精子DNA完整性的初步研究. 中华男科学杂志， 2013， 19（1）：72-76.

[4] 王晓晶， 宁琴. 乙型肝炎重症化的研究现状和展望. 临床肝胆病杂志， 2012， 28（6）：401-404.

[5] 宁琴， 朱琳， 严伟明. 乙型肝炎重症化的早期预警. 中华肝脏病杂志， 2010， 18（11）：805-807.

[6] 夏海鸣， 吴引伟， 殷国庆. 乙型肝炎病毒在慢性乙型肝炎患者肝细胞染色体上的整合情况. 江苏医药， 2006， 32（3）：201.

[7] 陈莉， 谭德明， 胡志亮， 等. 重型肝炎患者外周血单个核细胞中微小RNA表达的分析. 中华肝脏病杂志， 2011， 19（7）：556-558.

[8] 黄朝兴， 吕吟秋， 李凡凡， 等. 乙肝病毒血症与原发性肾炎患者肾组织内乙肝抗原沉积的相关性研究. 中国中西医结合肾病杂志， 2001， 2（9）：526-528.

[收稿日期：2017-02-28]