IL-17A、VEGF在寻常型银屑病皮损中的表达及其与PASI评分相关性的研究

王姗，王聪聪，聂振华

（1.天津医科大学，天津300070；2.山东省淄博市中心医院，淄博255036；3.天津市中医药研究院附属医院，天津300120）

·论著·

IL-17A、VEGF在寻常型银屑病皮损中的表达及其与PASI评分相关性的研究

王姗1，王聪聪2，聂振华3

（1.天津医科大学，天津300070；2.山东省淄博市中心医院，淄博255036；3.天津市中医药研究院附属医院，天津300120）

目的研究白细胞介素17A（IL-17A）、血管内皮生长因子（VEGF）在寻常型银屑病患者皮损中的表达，并分析其与患者银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）的相关性，从而进一步探讨IL-17A、VEGF在银屑病发病机制中的作用。方法采用免疫组织化学法检测寻常型银屑病皮损组织和健康对照组皮肤组织中IL-17A、VEGF的表达水平并进行比较。结果寻常型银屑病患者皮损中IL-17A、VEGF的表达水平显著高于健康对照组，差异有统计学意义（均P<0.05），皮损中IL-17A、VEGF的表达水平与患者PASI呈正相关（r1=0.61，P<0.01；r2=0.58，P<0.01）。结论IL-17A、VEGF在银屑病发病过程中起着重要作用，在皮损中的表达水平可作为反映银屑病严重程度的一个指标。

寻常型银屑病；免疫组化；白细胞介素17A；血管内皮生长因子

银屑病确切病因及发病机制并不完全清楚，近年来，很多研究表明Th17细胞及Th17通路在银屑病的发生发展中起着越来越重要的作用。作为Th17细胞的下游效应分子，白细胞介素17A（IL-17A）的生物学效应也被逐渐发现，除了诱导成纤维细胞、上皮细胞分泌多种细胞因子促进局部炎症以外，还协同干扰素γ促进角质形成细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF），促进血管新生和表皮增殖。为此，笔者采用免疫组化方法以寻常型银屑病患者皮损和正常人皮肤为研究对象，观察IL-17A与VEGF在皮损处的表达情况，并分析二者与患者病情严重程度的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料银屑病组为符合寻常型银屑病诊断标准，就诊于天津市中医药研究院附属医院的门诊患者30例。入选标准：2个月内未系统使用维A酸类、糖皮质激素及免疫抑制剂等药物，2周内未外用药物，无其他系统性疾病。其中男18例，女12例，年龄18～65岁，平均（35.27±10.39）岁，病程1～38年，平均（25.27±12.04）个月。对照组正常人皮肤组织为同期来我院皮肤外科就诊者20例，其性别年龄构成均与银屑病组差异无统计学意义。所有入选者均签署了知情同意书，按常规皮肤手术活检取患者躯干部皮损及对照组正常人相应部位皮肤。每份标本置于10%福尔马林溶液内固定，石蜡包埋后切片厚为4 μm。

对不同频率的设计洪水，根据上述拟定的水面线法进行调洪演算，从调算成果（表2）看，两水库在调洪演算中存在着一定的水位差。经过与1976年、1982年两次调算结果对比，本成果合理、可靠。

硅胶的制备：称取20 g硅酸钠，加80 mL去离子水，搅拌使其充分溶解，配制浓度为20%的硅酸钠溶液(基本处于饱和状态)，再取50 mL的浓盐酸，将浓盐酸与硅酸钠溶液混合，得到水溶胶；密封放置24 h，使其老化由水溶胶变为水凝胶；用10%的稀氨水浸泡、去离子水清洗、过滤，放入电炉中在500 ℃煅烧2 h，得到干燥的硅胶成品。

1.2 试剂兔抗人IL-17A（DF6127）、VEGF（AF5131）多克隆抗体购买自Affinity Biologicals公司，免疫组化SP试剂盒购买自凯基生物科技发展有限公司，磷酸盐缓冲液（PBS）包、枸橼酸盐包、3%过氧化氢均购自天津润泰有限公司，DAB显色液现用现配，并且要在30 min内完成染色。

1.4.1 寻常型银屑病PASI评分用PASI评分法[1]对银屑病组皮损面积和严重程度进行评估，由同一研究者分别对患者的红斑（E）、鳞屑（D）、浸润（I）程度和皮疹面积进行记录，计算出PASI值。

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二是建立一支工匠型的研究队伍。学术研究是高等院校教学的重要内容，军队院校研究队伍的学术素养不仅直接关系着教学的时效和质量，也深刻影响着我军军事理论的发展。推动新时代军队院校文化建设，必须重视抓好研究队伍建设，大力弘扬工匠精神，坚持求真务实、脚踏实地。要坚决摒弃以往闭门造车的研究习惯，加强与外校、外军学术交流，增强理论研究的实践性。

1.3 方法免疫组化法严格按试剂盒操作说明进行。切片烘烤后脱蜡水化，应用3%过氧化氢溶液灭活内源性过氧化物酶，抗原修复后山羊血清封闭，加一抗，37℃孵育1 h，加山羊抗兔生物素化二抗孵育相同时间后，滴加过氧化酶标记的链亲和素，以上各步均用PBS冲洗2次，5 min/次，随后DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染后脱水透明，最后封片。用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

2.1 银屑病组和健康对照组IL-17A、VEGF在皮肤组织中的定位IL-17A表达定位：银屑病皮损组织中，IL-17A阳性细胞主要存在于真皮层，在表皮中，形成Munro微脓疡的中性粒细胞和基底层角质形成细胞胞浆也出现IL-17A阳性，见图1，正常皮肤组织真皮层存在少数IL-17A阳性细胞，见图2。

1.4 结果判定

1.5 统计学处理用SPSS17.0统计软件分析，所得数据符合正态分布，计量资料用均数±标准差（±s）表示，组间用独立样本t检验，寻常型银屑病患者皮损中IL-17A、VEGF表达水平与PASI评分的相关性分析用Spearson检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

1.4.2 IL-17A和VEGF光学显微镜下观察切片染色情况，细胞胞浆有棕黄色颗粒视为染色阳性，将免疫组化结果进行显微照相，每张切片随机选取5个具有代表性的视野，用Image Pro-Plus图像处理系统对结果进行半定量分析[2]，测定灰度值，取其平均值，反映该标本的表达强度。

2.2 银屑病组和健康对照组IL-17A、VEGF在皮肤组织中的半定量分析银屑病患者皮损组织中IL-17A、VEGF的阳性表达均明显高于健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0．05），见表1、2。

图1 高倍镜下银屑病皮损IL-17A的表达（HE染色×20）

图2 高倍镜下正常皮肤IL-17A的表达（HE染色×20）

图3 高倍镜下银屑病皮损VEGF的表达（HE染色×20）

图4 高倍镜下正常皮肤VEGF的表达（HE染色×20）

VEGF表达定位：银屑病皮损组织中，VEGF主要表达于基底层上角质形成细胞胞浆中，见图3，其中棘细胞层染色最强，基底层细胞染色不明显。真皮乳头层微血管的内皮细胞和真皮浸润的少量炎症细胞亦可见染色。正常人皮肤组织中VEGF的表达很弱，仅有少数的基底层细胞胞浆染色阳性，见图4。

2.3 银屑病组皮损组织中IL-17A、VEGF的表达水平与PASI评分的关系银屑病患者皮损组织中IL-17A、VEGF表达水平均与PASI评分呈线性正相关（r1=0.61，P<0.01；r2=0.58，P<0.01），见图5、6。

表1 银屑病组和健康对照组皮肤组织中IL-17A的表达水平

表2 银屑病组和健康对照组皮肤组织中VEGF的表达水平

3 讨论

银屑病是由T细胞介导的慢性炎症性皮肤病。作为T细胞的亚群，Th17细胞及其相应细胞因子也参与银屑病的发病过程。通过免疫组化研究发现，Th17细胞标志性的细胞因子IL-17A在寻常型银屑病患者皮损中高表达，差异有统计学意义（P<0.05）,类似研究结果国内外文献也有报道[3-4]。研究显示，IL-17A阳性细胞主要存在于真皮层，提示真皮内的淋巴细胞是分泌IL-17A的主要细胞，表皮中形成Munro微脓疡的中性粒细胞和基底层的角质形成细胞胞浆IL-17A也呈阳性，提示IL-17A在局部炎症反应的产生以及角质细胞增殖过程中起到相应作用，但具体作用机制有待进一步实验证实。可能是通过诱导多种效应细胞释放炎症因子和趋化因子实现的。本研究还发现，银屑病皮损中IL-17A的表达水平与PASI评分呈正相关，这说明IL-17A的检测对银屑病患者病情评估有一定的辅助意义，IL-17A的表达水平可以作为评价银屑病严重程度的一个指标。

图5 银屑病皮损组织中IL-17A的表达水平与PASI评分

图6 银屑病皮损组织中VEGF的表达水平与PASI评分

血管内皮生长因子属于血管内皮生长因子超家族的一员，是一个含有半胱氨酸结构的同源二聚体糖蛋白[5]。其在银屑病发生发展中的作用越来越受到学者们的重视。通过研究我们发现VEGF在银屑病皮损中高表达，差异有统计学意义（P<0.05），作为目前为止最关键的血管生成因子，VEGF在银屑病皮损中过度表达，提示血管增生是银屑病皮损形成的一个重要特征。缺氧、转化生长因子、表皮生长因子等是诱导VEGF表达的刺激因素，其中缺氧是非常重要的因素[6]。角质形成细胞增殖会导致局部氧耗增多，形成缺氧环境，缺氧刺激HIF-1α的表达增加，进而诱导大量VEGF的产生[7]。VEGF促进内皮细胞分裂、增殖、迁移从而介导血管生成，促进银屑病发生发展。目前国内外对VEGF与PASI评分关系观点不一，Bhushan等[8]研究显示VEGF与PASI评分显著相关，而张锡宝和陈积愫等[9-10]研究显示两者无相关性。笔者的研究与Bhushan等[8]结果一致，提示VEGF可以反映银屑病患者的病情轻重，成为评价银屑病严重程度的指标之一。

本研究发现寻常型银屑病患者皮损组织中IL-17A与VEGF的表达水平呈正相关，笔者推测，两者在银屑病的发病过程中发挥了协同作用。一方面，IL-17A可以协同干扰素γ，促进角质形成细胞分泌VEGF，进而增加银屑病皮损处血管的增生。另一方面，VEGF的促血管扩张迂曲和增加血管通透性的作用，使炎性细胞和炎性因子进入皮损，进而加重皮损处的炎症反应，从而形成恶性循环，使得炎症反应和血管增生相互促进，最终加重银屑病的发生和发展。

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Levels of IL-17A and VEGF in the Lesions of Patients with Psoriasis Vulgaris and Its Correlation with PASI Score

Wang Shan1,Wang Congcong2,Nie Zhenhua3
1.Tianjin Medical University,Tianjin 300070,China;2.Central Hospital of Zibo City in Shandong Province,Zibo 255036, China;3.Affiliated Hospital of Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300120,China

ObjectiveIn order to investigate the expression of IL-17A and VEGF in the lesions of patients with psoriasis vulgaris and its correlationship with psoriasis area and severity index（PASI）and the role of IL-17A and VEGF in the pathogenesis of psoriasis.MethodsThe expression of IL-17A and VEGF in the lesions of patients with psoriasis and the control group was detected by immunohistochemistry.Results The expression of IL-17A and VEGF in the lesions of psoriasis vulgaris patients had significant statistical difference from the expression of the control(P<0.05)and had significant correlation with PASI score（r1=0.61,P<0.01；r2=0.58,P<0.01).ConclusionIL-17A and VEGF play an important role in the pathogenesis of psoriasis，the expression level of IL-17A，VEGF can be used as an index to reflect the severity of psoriasis.

Psoriasis vulgaris；Immunohistochemistry；Interleukin-17A；Vascular endothelial growth factor

R758.63

A

1672－0709（2017）02-0097－03

2016-06-09）

聂振华，E-mail:niezhenhua@163.com