QuEChERS—气相色谱分析铁皮石斛中的6种有机磷农药残留

2017-06-22 17:37王万成柳敏
吉林农业·下半月 2017年6期
关键词:铁皮石斛气相色谱法

王万成+柳敏

摘要:目的:建立同时测定铁皮石斛中甲胺磷、甲拌磷、甲基对硫磷、毒死蜱、杀螟硫磷、磷胺6种有机磷农药残留的QuEChERS-气相色谱分析方法。样品用乙腈进行超声提取,无水硫酸镁盐析后, 提取液经N-丙基乙二胺(PSA)、C18和石墨化炭黑(GCB)进行分散固相萃取净化,火焰光度检测器(PFPD)进行分析测定, 外标法定量。结果 6种有机磷农药的检出限范围为0.002~0.01毫克/公斤,6次进样相对标准偏差小于5%, 平均回收率范围为85.6%~100.8%。结论:方法前处理操作简单, 检测的重复性好、精密度高,可满足对铁皮石斛中多种有机磷农药残留的同时测定。

关键词:QuEChERS;气相色谱法; 铁皮石斛;有机磷农药残留

中图分类号: TS255.7;O657.71 文献标识码: A DOI编号: 10.14025/j.cnki.jlny.2017.12.030

铁皮石斛为兰科石斛兰属多年生草本植物,喜在温暖、潮湿、半阴半阳的环境中生长。铁皮石斛含有丰富的氨基酸、多糖类物质,具有滋阴养血、增强免疫功能的作用的功能。清代《药性论》,铁皮石斛可补肾积精、养胃阴、益气力。現代药理研究表明:铁皮石斛能提高应激能力,具有良好的抗疲劳、耐缺氧的作用。作为我国传统名贵药材,近年来,以铁皮石斛为原料的保健食品更是越来越多。由于野生铁皮石斛的自然繁殖能力低、生长缓慢,目前已十分稀少。当今市场上流通的铁皮石斛,主要来自人工栽培。在栽培过程中,难免受到病虫害的影响,为了提高产量会通喷洒农药控制病虫害,同时铁皮石斛的生长还受到种植土壤、水源等的影响,这些均有可能引起农药残留量超标。目前检测农药残留以气相色谱方法居多。由于中药材基质复杂,样品前处理方面若未净化到位,会对检测结果产生很大的影响。QuEChERS法是近年来发展迅速的农药多残留快速提取方法, 该方法因具有快速、简单、有效、可靠、安全的特点而得名。很快得到广泛的应用。该方法主要采用乙腈提取,无水硫酸镁盐析分层,提取液经PSA(N-丙基乙二胺填料)、C18和石墨化炭黑(GCB)分散固相萃取,用GC或GC-MS进行多残留分析。本实验采用QuEChERS前处理方式,用GC- PFPD 测定新鲜采摘的铁皮石斛中有机磷农药残留量,为铁皮石斛的多项有机磷农药残留的同时测定提供参考依据[1-5]。

1仪器与试剂

瓦里安450型气相色谱仪带有PFPD检测器;DB-1毛细管色谱柱(30m×0.25mm,250μm);梅特勒XS205DH电子天平;台式高速冷冻离心机(湖南湘仪);安谱QuEChERS萃取包(硫酸镁和乙酸钠)和QuEChERS净化管(硫酸镁、PSA、GCB和C18)。

甲胺磷、甲拌磷、甲基对硫磷、毒死蜱、杀螟硫磷、磷胺标准品(100ug/ml)均购自农业部环境保护科学研究所;乙腈、乙酸乙酯为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

进样口温度,220℃;检测器温度,260℃;不分流; 载气,氮气;氢气流量 30mL/min,空气流量300mL/min;柱流量,2ml/min;柱温,80℃保持1min,以15℃/min升至200℃保持1min,然后以10℃/min升温到250℃,保持15分钟。

2.2 测定方法

2.2.1标准溶液的配制 由100ug/ml的各农药标准品溶液用乙酸乙酯稀释至一定浓度的标准储备溶液。

根据每种农药在仪器上的响应灵敏度,确定其在混合标准中间液的浓度,用乙酸乙酯溶液稀释定容,得系列浓度的混合标准工作液。

2.2.2 试样制备 将采集回来的新鲜铁皮石斛样品切碎,用搅拌机充分搅匀,待用。

提取:准确称取 10.0克已粉碎好的样品放入 25毫升离心管中,加入10毫升乙酸+乙腈(体积比:1+99)混合液,旋涡混合 1分钟,快速加入提取包(MgSO4、NaAcetate),适当旋涡混合,再剧烈振荡 20min,以 8000 r/min 离心 3min。净化:取 6毫升离心好的上清液于装有分散固相萃取剂(QuEChERS 净化试剂盒:含有1.2克 MgSO4+400 mg PSA+400 mg GCB+400 mg C18)的 15毫升离心管中(,旋涡混匀 3min,以 6000 r/min 离心 5min。取离心好的上清液2毫升于玻璃试管中,用氮吹仪吹至近干,乙酸乙酯定容至1毫升,最后用 0.22μm 滤膜过滤至进样瓶中。

3 结果与讨论

3.1 测定结果

标准色谱图。本实验根据色谱保留时间定性,6种有机磷农药的标准色谱图,如图1所示,6种有机磷农药各组分分离良好,峰形理想。

3.2进样溶剂的选择

乙腈对多数农药具有良好的溶解性,QEChERS法也推荐使用乙腈提取液,但是用乙腈作为进样溶剂色谱峰峰型很差,选择乙腈提取、净化后用乙酸乙酯作为进样溶剂,可克服色谱峰的裂分。

3.3基体干扰情况

基体空白可用于评估基体干扰情况,用未喷洒农药的铁皮石斛作为基体样品进行检测,结果发现铁皮石斛在PFPD检测器上无明显干扰峰存在,不会干扰待测农药的测定,见图2。

3.4 标准曲线及检出限

在以上色谱条件下,在0.02μg /ml~0.20μg/ml线性范围内6中有机磷农药呈良好的线性关系,相关系数(r2)>0.99。 以3倍信号噪声值(S/N)作为检出限6种农药的检出限在0.004 ~0.01mg/kg之间,见表1。

3.5精密度及回收率

本实验条件下,分别添加浓度为0.02ug/ml、0.05 ug/ml、 0.10ug/ml的3个浓度的混标液,每个浓度的样品重复测定6次,结果见表2。

4结论

采用缓冲QuEChERS法提取, 利用气相色谱火焰光度法可以快速测定铁皮石斛中6种有机磷农药残留, 方法快速、准确, 仪器和实验条件要求不高, 建立了完全满足铁皮石斛中有机磷类农药的残留量分析,并对其他中药材中机磷类农药的多残留检测也具有一定的参考价值。

参考文献

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[2]聂少平,蔡海兰.铁皮石斛活性成分及其功能研究进展[J].食品科学,2012,33(23):356-361.

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[4]王吉祥,王亚琴,牛之瑞,冯雷.GC- MS/MS法测定铁皮石斛中19种农药残留[J].食品研究与开发,2016,37(14):131-135.

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