生脉注射液对自体脂肪颗粒移植存活率的影响

林辉，张晶晶，李红光（广西中医药大学第一附属医院激光整形美容科，广西 南宁 530022)

生脉注射液对自体脂肪颗粒移植存活率的影响

林辉，张晶晶，李红光
（广西中医药大学第一附属医院激光整形美容科，广西 南宁 530022)

目的探索生脉注射液对自体脂肪颗粒移植存活率的影响。方法9只兔建立自体脂肪颗粒移植动物模型，随机分为3组，实验组肌肉注射不同剂量的生脉注射液，对照组肌肉注射生理盐水。检测血清中VEGF 含量，成活脂肪的质量，计算移植脂肪的存活率。结果实验各组移植脂肪组织存活率和VEGF 含量均明显高于对照组。结论生脉注射液可以明显提高自体脂肪移植的存活率和存活质量。

生脉注射液；脂肪移植；兔；存活率

近年来，中医药在促血管新生作用逐渐被引起重视，单味药与方剂在促进新血管生成及提高促血管新生因子表达方面的研究均取得较多进展。生脉具有抑制促炎细胞因子和改善血流，增加机体抗缺氧能力，保护细胞，促进血管新生等作用。但生脉注射液能否促进自体脂肪移植的血管新生尚未有定论。本实验发现生脉注射液对于提高移植脂肪组织新生血管的形成有较大帮助，明显提高兔自体脂肪移植的存活率和存活质量。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材 料

生脉注射液（四川川大华西药业股份有限公司）；VEGF的ELISA试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；磷酸盐缓冲液、盐酸氯胺酮注射液、健康新西兰大白兔9只，雌雄不限，由广西中医药大学动物实验中心提供，体质量2.5～3.0Kg。

1.2 实验方法

1.2.1 建模兔术前先称重记录，然后将兔固定在实验台上。氯胺酮全麻满意后，手术部位备皮，用碘伏将兔耳部及腹股沟消毒，铺巾。于腹股沟切开取出腹股沟脂肪团约2.5ml，立即冲洗，剪碎，放入装有生理盐水的10ml注射器内，继续剪成直径1mm左右的脂肪颗粒。装有脂肪颗粒注射器放入离心机以800r/min离心3min后，去掉下层水、血液及破碎细胞成分等，吸去上层游离油脂。将脂肪颗粒导入1ml注射器内，接16G注脂顿针头由穿刺口进入兔耳背皮下组织剥离，边退针边注射。兔双耳背部移植区，共4处，每侧耳背两处移植区不相连，每处0.5ml。

1.2.2 分组9只兔建模成功后随机分成3组：对照组3只行肌肉注射无菌水0.37ml·Kg-1·d-1；实验1组3只行肌肉注射生脉注射液0.37ml·Kg-1·d-1；实验2组3只行肌肉注射生脉注射液0.74ml·Kg-1·d-1，均每天用药，连续用药2周。

1.2.3 标本采集与检测 术后13周行脂肪移植块标本取材，于耳背皮下丘状隆起中间处切开，在包膜表面，顿性与锐性结合剥离，完整取下脂肪移植块，修剪去表面包膜，然后用精密天平准确测量脂肪移植块质量。移植脂肪存活率=移植后样本质量/移植前质量×100%。移植块称量后置入10%福尔马林固定24h，经过冲洗、脱水、浸泡、浸蜡、包埋和切片等步骤后，行HE染色。脂肪移植术后1周、2周、4周、6周、8周于耳缘静脉采血，每只采血1ml，放入离心机以1 500 r/min离心5 min后，移液器吸取上层血清，移入冷冻管，将装好的冷冻管迅速置入-80 ℃超低温冰箱保存。术后13周，将样品从冰箱取出，用恒温水浴箱解冻，然后取样品，按照ELISA试剂盒说明书，经过包被抗体洗涤、加样品孵育洗涤、加入酶标再孵育洗涤和加底物显色等步骤，最后在酶标仪下读取吸光值，得到VEGF含量。

1.2.4 统计学方法采用SPSS20.0统计软件，所有数据用xs±表示，VEGF含量比较采用单因素方差分析进行检验，移植物质量和存活率比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

图1 各组血清VEGF表达

2 结 果

2.1 大体观察

实验过程中动物无死亡，耳背皮下可见丘状隆起的脂肪移植物，移植的脂肪组织无移位及扩散，未见坏死及液化。实验各组脂肪组织移植物体积均明显大于对照组，实验2组稍大于实验1组。

2.2 移植物质量和存活率

术后13周,实验1组脂肪质重(0.5923±0.1074)g，脂肪存活率（65.9±6.2）%；实验2组脂肪质重(0.5976±0.1062)g，脂肪存活率（66.5±7.6）%；对照组脂肪质重(0.3613±0.0916)g，脂肪存活率（40.2±6.3）%。实验各组脂肪移植物质量和存活率与对照组差异有显著性（P ＜0.05）。

2.3 VEGF含量

术后1周、2周、4周和6周，实验各组VEGF含量是先升高后降低，而对照组VEGF含量基本没有变化。实验各组VEGF含量与对照组差异有显著性（P＜0.05）。（图1）

2.4 组织学观察

HE染色显示，实验各组均可见周围新生血管较丰富，新生脂肪细胞大小一致，脂肪小叶结构接近正常脂肪组织, 脂肪组织间纤维间隔少，仍见散在前脂肪细胞聚集。实验2组对比实验1组的新生脂肪细胞大小更一致，但以上差别不明显。对照组移植脂肪组织中周围新生血管不明显,有较多脂肪细胞凋亡和坏死，脂滴融合在一起，形成较多大小不等囊泡样改变，脂肪细胞排列不整齐，纤维间隔较多，有炎性细胞反应。（图2）

图2 各组移植物的组织学改变(HE,×100)

3 讨 论

Kotaro Yoshimura[1]等提出了移植脂肪的三分层理论：最外层的存活区，中间的再生区和中心的坏死区。中央部分的脂肪组织由于缺血缺氧时间过长，极易发生了坏死，引发感染、硬结、囊肿等后遗症。由此可见，影响自体颗粒脂肪移植成活的关键是移植脂肪应尽早建立充分的血供，移植脂肪应尽快完成血管化。血管内皮生长因子(VEGF)能刺激血管内皮细胞、骨髓间充质干细胞的增殖以及多种血管活性物质的合成和分泌[2］。VEGF能够增强微静脉和小静脉血管通透性，调节与促进血管网络重构成熟，维持血管功能、影响血流动力学和组织愈合等作用。

在脂肪移植中加入VEGF，证实VEGF可促进移植物的血运重建，提高脂肪成活率和移植物的质量[3]。

生脉注射液具有益气养阴、复脉固脱、活血化瘀等功效，临床广泛用于病毒性心肌炎、急性胰腺炎、休克及配合化疗治疗某些癌症等。张育彬[4]发现生脉注射液可有效促进血管内皮细胞分泌NO，保护血管内皮功能, 并促进血管内皮细胞分泌VEGF, 促进血管新生增多, 降低炎症反应。曹艳花[5]等证实生脉注射液可明显提高缺氧复氧损伤乳鼠心肌细胞的SOD、ATP活性, 降低LDH、MDA水平, 从细胞水平表明生脉注射液具有保护细胞作用。低剂量生脉成骨胶囊兔血清可促进ECV304细胞分泌VEGF，提示这可能是生脉促进血管生成的主要作用机制之一[6]。多项研究已证实，生脉注射液能够使细胞分泌VEGF，提高局部血供，从而促进局部组织生长与修复[7,8]。鉴于生脉注射液能够降低炎症反应、保护细胞、分泌VEGF和促进血管新生增多等作用，由此推测生脉注射液可能促进移植脂肪组织血管新生，提高移植脂肪存活率和存活质量。

本实验结果显示，在自体脂肪移植术后13周，实验两组自体脂肪移植存活率和质量均明显高于对照组。HE切片染色观察显示，脂肪细胞大小与形态、新生毛细血管数量、移植脂肪组织纤维化程度等方面，实验组均优于对照组。提示生脉注射液可以增加移植脂肪组织内血供，加速移植物新生血管的形成，从而增加自体脂肪移植存活率和质量。实验两组的血清VEGF在脂肪移植术后的不同时间段的含量均明显高于对照组。提示生脉注射液可能提高细胞分泌VEGF，增加血管内皮细胞增殖和迁移，促进脂肪内部血管新生，加快移植脂肪内部血供的重建，增强血管通透性，提高脂肪内部细胞所需要的营养，减少移植物液化、坏死；VEGF又可以增加机体及移植脂肪组织抗缺氧能力，保持移植物顺利度过缺血、缺氧期，进一步提高了自体脂肪移植存活率和存活质量。

本实验虽然证实生脉注射液可以提高自体脂肪移植存活率和存活质量，但生脉注射液成分复杂，仍需要进一步研究哪种成分起作用，还有生脉注射液或者这种成分能否通过提高脂肪干细胞或前体细胞增殖、向脂肪细胞转化等，还有待进一步体内外实验。

[1] Kato H,Mineda K,Eto H,et al.Degeneration, regeneration,and cicatrization after fat grafting:dynamic total tissue remodeling during the first 3 months[J].Plast Reconstr Surg,2014,133(3):303e-313e.

[2] Pons J,Huang Y,Arakawa Hoyt J，et al.VEGF improves survival of mesenchymal stem cells in infarctedhearts［J］．Biochem Biophys Res Commun，2008,376(2)419-422．

[3] Feng L,Jie L,JianHua G,et a1.Improvement of the survival of human Autologous fat transplantation by using VEGF-transfected adiposederived stem cells[J]. Plast Reconstr Surg,2009,124(5):1437-1446.

[4] 张育彬.生脉注射液对老年冠心病不稳定型心绞痛NO 、VEGF及hs-CRP 的影响[J].长春中医药大学学报,2007,25(5):39-40.

[5]曹艳花,刘珊珊.生脉注射液对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用[J]. 山东医药,2010,50(14):38-39.

[6] 樊粤光,赵长青.生脉成骨胶囊对血管内皮细胞增殖及分泌VEGF 功能的影响[J].第一军医大学学报,2005,25(10):1228-1231.

[7] 蒋胜兰,朱丹妮,余伯阳.生脉注射液对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤保护的主要活性部位研究[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(17):88-90.

[8] 孙德波,韩渊.生脉注射液配合介入化疗治疗非小细胞肺癌前后VEGF水平变化[J].新疆医科大学学报,2009,32(9):1282-1284.

Effects of shengmai injection on the survival rate of fat autografts

LIN Hui,ZHANG Jing-jing,LI Hong-guang
(Department of Laser and Plastic Surgery, The First Affliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medical ，NanNing ，530022,，China)

Objective To investigate the infuence of shengmai injection on the survival rate of fat autografts .Methods Autologous fat was transplanted on rabbit to establish an animal model. Nine rabbits were randomly divided into 3 groups. The rabbit were injected different doses of Shengmai injection by intramuscular injection in cexperimental groups The ontrol groups were given normal saline.The content of VEGF in serum were detected , the weight of transplanted fat was determined and the survival rates were computed.Results The survival rate of fat autografts and the level of VEGF expression in experimental groups were signifcantly higher than those in control groups.Conclusion Shengmai injection can dramatically increase the survival rate and quality of fat autografts.

shengmai injection; fat autografting ; rabbit ;survival rate

10.19593/j.issn.2095-0721.2017.07.032

广西卫计委科研项目（编号:Z2015485）